Metüleensinine treeningu ja taastumise jaoks: mida on tegelikult mõõdetud

2022. aasta märtsis avaldas üks tipptasemel maratonijooksja sponsitud soovituse metüleensinist sisaldavale imemistabletile, öeldes, et see „võib aidata parandada keskendumist, vastupidavust ja und“ ning et ta kasutab seda enne raskeid treeninguid. Samal nädalal kirjeldasid üleriigilises ajakirjanduses tsiteeritud arstid laiemat suundumust kui seda, et suunamudijad tarvitavad akvaariumipuhastusvahendit. Kumbki seisukoht ei vasta küsimusele, mis jooksjal tegelikult on.

Kas keegi on andnud inimestele metüleensinist ja mõõtnud, kui kaugele või kui kiiresti nad liikusid või kui hästi taastusid? Selle artikli jaoks tehtud otsingutes ei leitud ühtegi kontrollitud inimuuringut, mille tulemusnäitaja käsitleks kehalist sooritusvõimet või taastumist. Viidete ahelas on kolm loomaliiki, mitu laboratoorset preparaati ja üks ühend, mis ei ole üldse metüleensinine.

Vastupidavus, taastumine ja toimemehhanism on eri väited

Marker võib muutuda sooritusvõimega võrreldes vastupidises suunas või muutuda ilma, et sooritusvõime üldse muutuks. See pole pelgalt tehniline nüanss: just selline muster ilmneb kõige sagedamini tsiteeritud metüleensinise treeningu-uuringus.

Koerte uuringus kasutati teist värvainet

Metüleensinise ja treeningu puhul viidatakse kõige sagedamini Imai ja kolleegide 1986. aasta jooksulindiuuringule teadvusel koertega. Selles katsetati, kas südame minutimahu suurenemine koormuse ajal sõltub kudede redoksseisundist, kasutades ainet, mida meetodite kirjelduses nimetatakse „4 mg/kg uut metüleensinist 3,7-bis(etüülamino)-2,8-dimetüülfenasotooniumkloriid, Eastman Kodak Company“. Uus metüleensinine on eraldi tiasiinvärvaine, millel on kaks etüülaminorühma seal, kus metüleensinisel on kaks dimetüülaminorühma, ning seda tuntakse eelkõige retikulotsüütide värvainena. Sellega saadud tulemus ei ole metüleensinisega saadud tulemus.

Uuring on siiski oluline, sest see näitab kõige selgemalt, et marker ja füsioloogia võivad muutuda teineteisest sõltumatult. Koerad jooksid kahes 20-minutilises etapis kiirusega 2.5 ja seejärel 5.0 mph, tõusuga 6 protsenti. Koormus kahekordistas südame minutimahu ja suurendas kogu keha hapnikutarbimist mõlemas rühmas kolm kuni neli korda. Füsioloogilise soolalahuse rühmas suurenes arteriaalse vere laktaadi ja püruvaadi suhe 6.0-lt 9.97-le. Ainet saanud rühmas see ei suurenenud.

Ükski funktsionaalne näitaja ei muutunud. Südame löögisagedus, arteriaalne vererõhk, vasaku vatsakese kontraktiilsus ja plasma katehhoolamiinide tase suurenesid mõlemas rühmas ühtemoodi ning südame minutimahu ja kogu keha hapnikutarbimise vaheline seos oli statistiliselt eristamatu. Autorid järeldavad, et suhte muutused „ei ole põhjuslikult seotud kerge kuni mõõduka koormuse ajal tekkiva vereringe aktivatsiooniga“.

See suhe on nõrgem näitaja, kui esmapilgul tundub. See vähenes, sest püruvaadi sisaldus suurenes 0.14-lt 0.38 mmol-ni liitri kohta, samal ajal kui laktaadi sisaldus suurenes samuti, 1.05-lt 2.85 mmol-ni liitri kohta. Koertel, kellele anti värvainet puhkeolekus, suurenes hapnikutarbimine veidi, arteriaalse vere pH tõusis ja süsinikdioksiidi sisaldus vähenes. Autorid nimetavad neid muutusi „sarnaseks“ mitokondriaalse lahtisidestaja 2,4-dinitrofenooli põhjustatud muutustega. Kiirus oli protokollis kindlaks määratud, seega ei lastud ühelgi koeral joosta kurnatuseni.

Rottide ujumisuuring ja selles kasutatud annus

Kõige tugevam loomade sooritusvõimet puudutav tulemus pärineb Pengi ja kolleegide 2025. aasta katsest ajakirjas Frontiers in Behavioral Neuroscience. Rotid ujusid kümnel järjestikusel ööl, saba külge kinnitatud raskustega, mis vastasid 3 protsendile kehakaalust, vähemalt kaks tundi öö kohta, kuni jõudsid skooriga määratletud kurnatuse lõpp-punktini. Pärast iga ujumiskorda sai üks rühm metüleensinist ninasiseselt ja teine samal viisil füsioloogilist soolalahust. Ainet saanud rotid ujusid kauem, enne kui täitsid kurnatuse kriteeriumid, liikusid järgmisel päeval avatud välja katses rohkem, ilmutasid vähem ärevuslaadset käitumist ning neil esines hipokampuses ja juttkehas vähem neuronite kadu, müeliini kahjustusi ja mitokondrite killustumist.

Ümberjutustustes jäetakse annus sageli mainimata. 1-protsendiline lahus on 10 mg/mL; kummassegi ninasõõrmesse manustati kümme mikroliitrit, seega oli kogus kokku umbes 20 mikroliitrit ehk 0.2 mg roti kohta iga ujumiskorra järel. Ninasisene manustamine valitakse selleks, et aine jõuaks ajju haistmis- ja kolmiknärvi kaudu, ning autorid märgivad, et nende uuringus „ei mõõdetud oksüdatiivseid reaktsioone, põletikku ega hormoonitasemeid ajus ja plasmas“. Soovitatud järgmine samm on uurida „treeningueelse MB manustamise terviklikku mõju“.

Just seda tahakski jooksja näha katsetatuna. Selles protokollis anti ühendit pärast koormust, et piirata kahjustusi. Pikem ujumine järgmisel päeval kurnatud rottide mudelis on taastumist puudutav leid, mitte tulemus treenitud inimese kohta, kes võtab annuse enne treeningut.

Kust tuli sõna „vastupidavus“

Hiirte uuring, mida tavaliselt kirjeldatakse vastupidavuse paranemist näitavana, on Gureevi ja kolleegide 2016. aasta töö ajakirjas Neuroscience Research. Hiired jõid 60 päeva jooksul metüleensinist sisaldavat vett annusega 15 mg/kg päevas. „Kehaline vastupidavus“ tähendab siin nööri- ehk horisontaalsete pulkade testi, mis hindab koos haardejõudu, motoorset koordinatsiooni ja tasakaalu. Ainet mittesaanud keskealiste hiirte skoor oli 1.17; ainet saanud hiirte skoor oli 2.23, täiskasvanud hiirte taseme lähedal. Täiskasvanud hiirtel ei paranenud ükski näitaja.

Hapnikutarbimine puhkeolekus suurenes umbes 15 protsenti. Vesinikperoksiidi tootmine aju mitokondrites suurenes 94.9-lt 176.7 pmol-ni minutis milligrammi valgu kohta. Mitokondriaalse DNA hulk suurenes 2.3 korda. See näitab mitokondrite suurenenud uuenemist vananevatel loomadel koos seda käivitava oksüdatiivse signalisatsiooniga. See ei tõenda, et terve sportlane liiguks kiiremini.

Rakukatsed ja nende piirid

Louters ja kolleegid teatasid 2005. aastal, et metüleensinine aktiveerib L929 fibroblastirakkudes glükoosi transporti GLUT1 kaudu, kontsentratsioonil 50 mikromooli liitri kohta kuni 800 protsendi võrra. 2008. aasta jätku-uuring näitas, et metüül-beeta-tsüklodekstriin seob metüleensinist otseselt ja blokeerib selle toime. See on rakuliini puudutav leid, mida pole skeletilihases kunagi näidatud.

Toimemehhanism ise on vaidluse all

Tretteri ja kolleegide 2014. aasta uuringus isoleeritud merisea aju mitokondritega suurendas metüleensinine kontsentratsioonil 100 nanomooli kuni 1 mikromool liitri kohta hapnikutarbimist puhkeolekus, taastas membraanipotentsiaali ja ATP tootmise I või III kompleksi inhibeerimise korral ning suurendas vesinikperoksiidi tootmist. Oluline on see, et „MB ei mõjutanud ADP-ga stimuleeritud hingamist ühegi“ katsetatud substraadi puhul. Maksimaalne sidestatud hingamine, millel põhineb treeningut puudutav väide, ei suurenenud.

Gureevi ja kolleegide 2019. aasta jätku-uuringus leidis sama labor, kust pärines hiirtega saadud tulemus, et metüleensinine „ei suuda taastada antimütsiiniga pärsitud membraanipotentsiaali ja hingamist“ hiire aju mitokondrites. Labor järeldas, et elektronide aktseptor on III kompleksi Qo sait, mitte mõni sellest kaugemal paiknev koht. Lihtne ettekujutus värvainest, mis kannab elektrone blokeeritud hingamisahelast mööda, ei kehti iga preparaadi puhul.

Miski sellest ei välista mõju inimesele. Küll aga tähendab see, et üksnes toimemehhanismil põhineval argumendil, milles usutavat mitokondriaalset keemiat käsitatakse tulemusena, on probleeme juba toimemehhanismi enda tasandil.

Kaks uuringukavandi probleemi, mille inimuuring peaks lahendama

Metüleensinise puhul on pimendamist raske tagada. See muudab uriini sinakasroheliseks ja inimesed märkavad seda. 2017. aasta ristuva ülesehitusega uuringus bipolaarse häire korral öeldi seda otse: „Valisime selle uuringukavandi, sest metüleensinine muudab uriini värvust ja seetõttu ei saanud me kasutada tavapärast platseebot.“ Selles uuringus võrreldi väikest annust suure annusega, mitte toimeaineta tabletiga.

Treeningu-uuringutes on see probleem tõsisem kui peaaegu üheski teises valdkonnas, sest ootused mõjutavad tugevalt tajutud pingutust ja ajasõidu tulemust. Uuring, milles ei suudeta osalejate eest varjata, mida nad saavad, mõõdab sama palju uskumust kui ravimi toimet.

Dokumenteeritud lahendus on olemas. 2016. aasta randomiseeritud piltdiagnostikauuringus 26 terve täiskasvanuga anti identsetes läbipaistmatutes kapslites 280 mg USP-kvaliteediklassi metüleensinist, ligikaudu 4 mg/kg, või platseebona toiduvärvi FD&C blue no. 2. Osalejatel paluti urineerida enne manustamist, kuid mitte enam pärast seda, „et vältida pimendamise rikkumist uriini võimaliku värvimuutuse tõttu“.

Teine probleem on annus ja manustamisviis. Suukaudselt manustatud metüleensinine eritub osaliselt uriiniga ning aju kokkupuude ainega on suukaudse manustamise järel ligikaudu poole väiksem kui veenisisese manustamise järel, nagu Gureevi uurimisrühm märgib, viidates Peteri ja kolleegide farmakokineetilisele tööle. Ninasisest manustamist rotile ei saa üle kanda kapslile ning avaldatud töödes jääb inimestel kasutatud annusevahemik 0.5 kuni 4 mg/kg vahele. 2016. aasta piltdiagnostikauuringus märgiti vastupidist mõju üle 10 mg/kg korral.

Inimuuringutes mõõdetakse midagi muud

Selle teema ümberjutustustes esineb kaks kontrollitud inimkatset ja kummaski ei mõõdetud kehalist sooritusvõimet. 2016. aasta piltdiagnostikauuringus ei ilmnenud tähelepanelikkuse reaktsiooniajas olulist ravimi ja aja koosmõju: platseeborühmas oli reaktsiooniaeg algul 230 ja seejärel 220 millisekundit ning metüleensinise rühmas algul 230 ja seejärel 230 millisekundit, P = .43. 2023. aasta veenisisese manustamise uuringus kaheksa terve naisega vähenesid nii aju verevool kui ka aju hapniku ainevahetuse kiirus, mitte ei suurenenud. Energia ja väsimuse tõendite ülevaade käsitleb mõlemat uuringut.

Kui otsustad seda siiski proovida

Enda peal katsetamine ei tõenda tõhusust, kuid selle saab piisavalt hästi üles märkida, et vältida enesepettust. Pane kirja toode ja partii, manustamisviis, manustamise aeg enne treeningut, täpne treening koos vahemaa või koormusega, tajutud pingutus numbrilisel skaalal, uni, kofeiin ja kõik ravimid ning järgmise päeva lihasvalulikkus ja sooritusvõime 48 tunni pärast sama tüüpi treeningul. Seejärel korda samu treeninguid ilma selleta.

Üks inimene, kes jälgib üht muutujat, ei saa eristada ravimi toimet treenitusest, motivatsioonist, ilmast ja treeningu tavapärasest juhuslikust kõikumisest. Kõige tõenäolisemalt eksitab just subjektiivne osa.

Metüleensinisel on ka riske, millel pole sooritusvõimega mingit pistmist. See inhibeerib monoamiini oksüdaasi A, mistõttu tuleb arvestada koostoimeid retseptiga antidepressantide ja teiste serotonergiliste ravimitega. Samuti on see G6PD puudulikkuse korral hemolüütilise aneemia riski tõttu vastunäidustatud. Ohutusjuhend käsitleb mõlemat ning ravimite koostoimete juhend rühmitab ravimitega seotud küsimused ravimiklasside kaupa. Kui võistled dopinguvastaste reeglite alusel, kontrolli reegleid, mitte ära tugine müüja väitele.

Aine ise on muutuja igas eespool kirjeldatud uuringus

Iga siin kirjeldatud annus oli kindlaksmääratud ühendi mõõdetud kogus. Kontrollimata müüjalt pärit pudel ei ole sama asi. Vastavus USP monograafiale on standard, mida ostja saab kontrollida. Sellele mittevastav aine on tõenäoliselt tekstiilitööstuse kvaliteediklassist ning võib sisaldada orgaanilisi lisandeid, näiteks Azure B, lahustijääke ja raskmetalle tasemetel, mida farmatseutiline spetsifikatsioon piirab. Mida USP tähistus kinnitab ja mida mitte käsitleb kvaliteediklassi ning lisandite analüüsimeetodite ülevaade selgitab, mida labor otsib.

Enamik müüjaid, kes kirjeldavad toodet sõltumatu osapoole testituna, kontrollib ainult raskmetalle ning esitab seejärel seda ühte analüüsipaketti nii, nagu vastaks see kogu spetsifikatsioonile. Blupreme kontrollib täielikku USP spetsifikatsiooni: identsust, puhtust, orgaanilisi lisandeid, lahustijääke, elementlisandeid, kuumutusjääki, mikrobioloogilisi piirnorme ja bakteriaalseid endotoksiine. Iga partii saadetakse koos analüüsisertifikaadiga ning selle õigesti lugemine tähendab partiinumbri ja labori andmete võrdlemist sinu käes oleva pudeliga.

Kokkuvõte

Üheski kontrollitud inimuuringus pole mõõdetud metüleensinise mõju vastupidavusele, kiirusele, jõule ega taastumisele. Laktaadimõju toetuseks viidatud koerte uuringus kasutati teist värvainet ja sooritusvõime erinevust ei leitud. Rottide ujumisuuringus manustati pärast koormust ninasiseselt 0.2 mg. Sõna „vastupidavus“ taga olevas hiirte uuringus kasutati vananevatel loomadel haarde- ja koordinatsioonitesti ning toimemehhanism on mitokondrite teemalises teaduskirjanduses vaidluse all.

Alles jäävad usutav toimemehhanism, mõned väikestest loomkatsetest saadud tulemused, üks dokumenteeritud lahendusega uuringukavandi probleem ja inimeste sooritusvõime andmete puudumine. Inimestel avalduva kasu tõendite ülevaade asetab treeningut puudutavad väited ülejäänud inimuuringute kõrvale ning uuringute kogu koondab iga väite taga olevad uuringud.

Kui treenid mingi eesmärgi nimel, on kõige tugevama tõendusbaasiga muutuja treening ise.