Metileno mėlis ir NAD+ metodai: mechanizmai, įrodymai ir teiginiai apie derinimą

Tiek metileno mėlis, tiek papildai, parduodami kaip NAD+ kiekį didinančios priemonės, aiškinami pasitelkiant žodžius „mitochondrijos“ ir „ląstelių energija“. Nė vienas toks apibūdinimas nepasako, ką produktas iš tikrųjų daro.

Šie du metodai veikia skirtingus kintamuosius. Vienu siekiama pakeisti, kiek NAD+ yra jūsų ląstelėse. Kitu keičiamas dviejų jo formų santykis. Tai nėra du keliai į tą patį tikslą.

Du dydžiai, kurie nuolat painiojami

NAD+ yra kofermentas. Jis priima elektronų porą hidrido jono pavidalu ir virsta NADH. Kai NADH perduoda tuos elektronus toliau, jis vėl virsta NAD+. Ląstelės nuolat naudoja šį ciklą: taip iš maisto išgauta energija pasiekia baltyminius mechanizmus, gaminančius ATP.

Kadangi NAD+ ir NADH yra dvi tos pačios molekulės būsenos, ląstelėje verta stebėti du atskirus dydžius. Pirmasis – bendras kiekis: kiek iš viso yra NAD+ ir NADH. Antrasis – jų santykis, nusakantis, kiek elektronų nešikliai šiuo metu yra apkrauti elektronais.

Vandens telkinio pavyzdys padeda aiškiai suprasti šį skirtumą. Vandens tūris už užtvankos atitinka bendrą kiekį. Aukščiau užtvankos sulaikyto ir žemiau jos išleisto vandens pasiskirstymas atitinka santykį. Atvėrę uždorį galite padidinti tą santykį nepridėdami nė litro. Tai nėra metileno mėlio veikimo metafora. Tai veikiau beveik pažodinis jo apibūdinimas.

Kiekio papildymo metodas

NAD+ pirmtakų papildai, įskaitant nikotinamido ribozidą, nikotinamido mononukleotidą ir nikotinamidą, yra statybinė medžiaga. Ląstelės sintetina NAD+ per pakartotinio panaudojimo kelią, vadinamą regeneracijos keliu, o pirmtakai į jį patenka. Tikslas – padidinti bendrą kiekį.

Gyvūnų tyrimuose tai gerai patvirtinta: daugelyje modelių NAD+ kiekis audiniuose mažėja senstant ir sergant metabolinėmis ligomis, o duodant pirmtakų jis paprastai didėja. Žmonių tyrimų išvados siauresnės. Tyrimai su žmonėmis iš tiesų rodo, kad šie junginiai didina išmatuotą NAD+ kiekį kraujyje. Tačiau jie neparodė nuoseklaus klinikinės vertinamosios baigties pagerėjimo, t. y. pokyčių, kuriuos žmogus pastebėtų arba kuriuos tyrimu siekiama išmatuoti.

Teiginys „NAD+ kiekis padidėjo“ nusako organizmo viduje išmatuotą pokytį. Tai nėra išvada apie tai, kaip žmogus jautėsi, judėjo ar atsigavo.

Ką metileno mėlis daro kitaip

Metileno mėlis nėra pirmtakas. Tai oksidacijos ir redukcijos reakcijose dalyvaujantis dažiklis, medicinoje naudojamas gerokai ilgiau nei šimtmetį, o jo patvirtintos naudojimo sritys yra siauresnės nei tiriamosios.

Ląstelėje nuo flavinų priklausomi fermentai jį redukuoja iki bespalvės formos – leukometileno mėlio, kuris paskui vėl oksiduojamas. Elektronai, kurie būtų keliavę per I kompleksą – pirmąją kvėpavimo grandinės stotelę, vietoj to gali būti pašalinti iš NADH per metileno mėlį. NADH virsta NAD+.

Santykis didėja. Bendras kiekis nedidėja.

Žiurkių diabetinės širdies tyrime tai buvo tiesiogiai išmatuota izoliuotose širdies mitochondrijose. Riebalų rūgščių oksidacijos metu pridėjus metileno mėlio, kurio koncentracija buvo nuo 6 iki 18 mikromolių litre, NADH kiekis ir NADH bei NAD+ santykis mažėjo priklausomai nuo dozės. Absoliutus NAD+ kiekis kito gerokai mažiau nei NADH kiekis – būtent to galima tikėtis iš junginio, kuris vieną formą paverčia kita, o ne pagamina daugiau kurios nors iš jų.

Svarbu, kur tie elektronai nukeliauja. Izoliuotose smegenų mitochondrijose metileno mėlis, kurio koncentracija buvo nuo 100 nanomolių litre iki 1 mikromolio litre, pagerino energijos gamybą, kai kvėpavimo grandinė buvo slopinama, ir kartu visomis tirtomis sąlygomis didino vandenilio peroksido gamybą bei mažino jo pašalinimą. Autoriai vandenilio peroksido susidarymą sieja su tiesiogine deguonies redukcija redukuotu metileno mėliu. Šiuo keliu iš NADH išeinantys elektronai nedingsta. Jie perduodami deguoniui.

Atskiras Achilo sausgyslės audinio tyrimas šią mintį išdėsto aiškiai. Metileno mėlis atkūrė NAD+/NADH pusiausvyrą ir padidino ATP gamybą pažeistuose tenocituose bei žiurkių tendinopatijos modelyje, o straipsnyje užfiksuota, kad bendras NAD kiekis reikšmingai nepakito.

Ką patvirtina audinių ir gyvūnų eksperimentai

Keturi eksperimentai, atlikti per keturis dešimtmečius, nagrinėja tą pačią idėją ir vis iš naujo parodo jos ribas.

Tyrime, kuriame žiurkėms ilgą laiką buvo duodama alkoholio, etanolis sumažino tiek citozolinį, tiek mitochondrinį NAD+/NADH santykį kepenyse. Į racioną pridėjus metileno mėlio, šio pokyčio daugiausia pavyko išvengti. Tačiau jis nesumažino etanolio sukelto kepenų suriebėjimo. Santykio korekcija nepakeitė baigties. Šį 1985 metų rezultatą verta prisiminti prieš teigiant, kad oksidacijos ir redukcijos pusiausvyros poslinkis yra naudos mechanizmas.

Kepenų ląstelių ir pelių, šertų daug riebalų turinčiu pašaru, tyrime metileno mėlis padidino NAD+/NADH santykį, padidino SIRT1, sumažino PGC-1alpha acetilinimą, aktyvino AMPK ir sumažino riebalų kaupimąsi kepenyse. Šiuo atveju baigtis iš tiesų keitėsi kartu su santykiu. Tas pats straipsnis rodo, kad poveikis nėra monotoniškas: trys miligramai kilogramui per dieną mitochondrijų DNR kiekį didino veiksmingiau nei dešimt, o deguonies suvartojimas ir AMPK signalizacija didėjo didėjant dozei.

Diabetinės širdies tyrime metileno mėlis, vienuolika savaičių duotas su geriamuoju vandeniu, sumažino NADH ir NAD+ santykį širdies mitochondrijose ir padidino sirtuino 3 aktyvumą. Lizino acetilinimas sumažėjo 83 vietose 34 baltymuose, daugiausia susijusiuose su riebalų rūgščių pernaša ir oksidacija. Išstūmio frakcija pagerėjo. Tačiau I komplekso palaikomas kvėpavimas nebuvo atkurtas. O geno išjungimo eksperimentas atskyrė du lengvai supainiojamus poveikius: santykis daugiausia keitėsi ir be sirtuino 3, o deacetilinimas nuo jo priklausė.

Sausgyslės tyrime metileno mėlis buvo naudojamas, kai I kompleksas buvo chemiškai blokuotas rotenonu. Jis vis tiek atkūrė NAD+ pusiausvyrą, tačiau vis tiek neapsaugojo nuo oksidacinio streso, matrikso degeneracijos ir ląstelių gyvybingumo praradimo. Vien santykio atkūrimo nepakako, kad audinys atsigautų.

Spausdinamame lape su išsamiomis šaltinių nuorodomis pateiktos tos pačios eilutės.

Kodėl į argumentą įtraukiami sirtuinai

Sirtuinai pašalina acetilo grupes iš baltymų ir tam naudoja NAD+. Jų aktyvumas priklauso nuo NAD+ prieinamumo, todėl bet kuris junginys, keičiantis šį prieinamumą, paskesniuose procesuose keičia ir sirtuinų aktyvumą.

Tai atramos taškas, kuriuo remiasi didžioji dalis „metileno mėlio NAD+ palaikymui“ rinkodaros. Čia pat sutrinka ir logika. Santykio pakeitimas gali padidinti sirtuinų aktyvumą. Iš to neišplaukia, kad produktas aprūpina NAD+, ir neišplaukia, kad jo poveikis prilygsta pirmtako vartojimui. Šių matavimų aiškinimas oksidacijos ir redukcijos požiūriu turi savų spąstų, su kuriais verta susipažinti prieš priimant kurį nors iš šių aiškinimų.

Kas buvo tirta su žmonėmis

Metileno mėlis dešimtmečius kliniškai naudojamas ūminiais atvejais, kai pacientai stebimi: esant methemoglobinemijai, su ifosfamidu susijusiam neurotoksiškumui ir labai žemam kraujospūdžiui operacijos metu. Tai siauros, prižiūrimos naudojimo sritys, o ne įrodymai, pagrindžiantys kasdienį vartojimą per burną siekiant pagerinti darbingumą.

Ieškant šiam straipsniui skirtų šaltinių, nerasta tyrimo su žmonėmis, kuriame būtų matuoti NAD+ metabolitai sveikiems savanoriams po metileno mėlio vartojimo. Pirmiau aptartos išvados gautos tiriant izoliuotas mitochondrijas, kultivuojamas ląsteles, žiurkių audinius ir žmogaus audinių eksplantus. Išimta sausgyslė, palaikoma gyvybinga laboratoriniame inde, yra vertingas žingsnis toliau nei ląstelių linija. Vis dėlto tai dar nėra žmogus.

Pirmtakų literatūra iš tiesų apima tyrimus su žmonėmis, o jų rezultatai kuklūs. NAD+ kiekis kraujyje didėja. Klinikinių vertinamųjų baigčių rezultatai nevienodi, o pokyčiai paprastai nedideli.

Taigi teiginys apie derinimą kelia pagrįstą klausimą, kurio atsakymas netenkina: nė viename šiam straipsniui rastame paskelbtame tyrime, klinikiniame tyrime ar atvejų serijoje metileno mėlis nebuvo išbandytas kartu su nikotinamido ribozidu, nikotinamido mononukleotidu ar NAD+ infuzija. Kiekvienas, apibūdinantis šį derinį kaip pagrįstą įrodymais ar sinerginį, ekstrapoliuoja iš dviejų atskirų įrodymų visumų.

Ekstrapoliacija gali suklaidinti abiem kryptimis. Ji gali būti pernelyg optimistinė, jei atkūrus santykį bendras kiekis apskritai nebėra ribojantis kintamasis. Ji gali būti ir pernelyg supaprastinta, nes metileno mėlio dozės ir atsako kreivė turi apsivertimo tašką. Patys tyrėjai šį junginį apibūdina kaip pasižymintį hormeze: mažesnės koncentracijos palankesnės redukcijai, o didesnės nukreipia elektronus nuo kvėpavimo grandinės ir gali veikti prooksidantiškai. Pridėjus daugiau substrato, ši kreivė netampa saugesnė.

Taip pat yra sąveikos rizikų, kurios visai nesusijusios su NAD+. Metileno mėlis slopina monoaminooksidazę A, todėl vartojamas kartu su tam tikrais antidepresantais kelia su serotoninu susijusią riziką; praneštų toksinio poveikio CNS atvejų apžvalgoje nustatyta, kad 13 iš 14 atvejų atitiko Hunter serotonininio toksinio poveikio kriterijus. Esant didelei ekspozicijai jis taip pat gali sukelti methemoglobinemiją. Jei vartojate receptinius vaistus, klausimas apie derinimą, kurį reikėtų užduoti gydytojui, yra susijęs su šiais mechanizmais, o ne su oksidacijos ir redukcijos pusiausvyra. Tokio pat nuoseklumo reikia ir vertinant įprastus derinius: kiti kartu su metileno mėliu vartojami papildai turi atskirą, daugiausia neištirtą įrodymų bazę.

Kodėl grynumas lemia, kokį eksperimentą iš tikrųjų atliekate

Metileno mėlio produktas yra mišinys, kol laboratorija neįrodo kitaip. Šiuo atveju svarbi priemaiša yra Azure B – demetilintas fenotiazinas, kuris nėra inertiškas. Tai oksidacijos ir redukcijos reakcijose aktyvus dažiklis, pasižymintis tomis pačiomis pagrindinėmis elektrocheminėmis savybėmis, todėl produktas, kuriame yra reikšmingas Azure B kiekis, nėra tiesiog grynesnė ar mažiau gryna tos pačios intervencijos versija. Tai kitoks mišinys, veikiantis tą patį kelią, o jo komponentų santykio niekas nėra apibūdinęs.

USP kokybės klasė leidžia pirkėjui gauti apibrėžtą medžiagą. Produktas, neatitinkantis USP kokybės klasės, greičiausiai yra tekstilinis dažiklis, o tekstilinės kokybės dažikliuose yra priemaišų, dėl kurių jie netinka vartoti, įskaitant sunkiuosius metalus ir tirpiklių likučius.

Skirtumai egzistuoja ne tik tarp kokybės klasių. Daugelis pardavėjų, teigiančių, kad produktas atitinka USP, tiria tik sunkiuosius metalus, o paskui šį vienintelį tyrimų rinkinį pateikia kaip visiškos atitikties įrodymą. Visa specifikacija apima tapatybę, grynumą, organines priemaišas, tirpiklių likučius, elementines priemaišas, likutį po kaitinimo, mikrobiologines ribas ir bakterinius endotoksinus. Dalinis tyrimų rinkinys nieko nepasako apie tai, ko neapima, o tarp praleistų rodiklių yra giminingos medžiagos ir tirpiklių likučiai.

Blupreme perka metileno mėlį iš farmacinio gamintojo ir skelbia analizės sertifikatą, apimantį visą specifikaciją, todėl buteliuke esanti medžiaga yra ta pati, kuri aprašoma tyrimuose. Jei prieš pirkdami norite patys patikrinti argumentus, straipsnyje kaip skaityti metileno mėlio tyrimus paaiškinama, ką kiekvieno tipo tyrimas gali ir ko negali parodyti.

Skirtumas, kuris atlaiko kritinį vertinimą

Pridėjus NAD+ pirmtako, keičiasi NAD+ kiekis. Metileno mėlis keičia tai, ką daro jau esantis NAD+. Pirmuoju atveju kalbama apie aprūpinimą, antruoju – apie srautą, o vieną metodą pagrindžiantys eksperimentai mažai ką pasako apie kitą.

Metileno mėlį pagrindžia nuoseklus mechanizmas, patvirtintas izoliuotose mitochondrijose ir gyvūnų audiniuose, su aiškia ir nuolat pasikartojančia išlyga: pakeisti santykį nėra tas pats, kas atkurti audinį. Trūksta tyrimų su žmonėmis, kuriuose būtų matuojamas poveikis NAD+. Nei viena, nei kita kategorija neturi tiesioginio abiejų metodų derinio tyrimo.

Abi kategorijas verta vertinti vienodai. Klauskite, kurį kintamąjį produktas neva keičia, o tada – kokių to kintamojo matavimų yra atlikta su žmonėmis. Kai atsakymas yra ląstelių tyrimas, žiurkė ar tikėtinas biocheminis kelias, tai ir yra tik tiek. Tai nėra pagrįstas papildų derinys.