Identifikimi i blusë së metilenit në laborator: spektrat në infra të kuqe dhe metodat plotësuese

Përfytyroni sikur tre laboratorë marrin të njëjtin pluhur blu. I pari regjistron një spektër në infra të kuqe dhe deklaron se është blu metileni. I dyti kryen kromatografi dhe raporton 0.4% Azure B. I treti kryen difraksion të rrezeve X mbi kristalet dhe përcakton një formë hidrati. Të tre kanë të drejtë dhe asnjëri nuk u është përgjigjur dy pyetjeve të tjera. Ngatërrimi fillon kur një rezultat interpretohet sikur u përgjigjet të treja pyetjeve.

Ky artikull i ndan këto pyetje. Identifikimi me spektroskopi infra të kuqe vërteton identitetin molekular kundrejt një standardi referimi. Kromatografia përcakton përbërjen. Difraksioni përcakton formën në gjendje të ngurtë. Një përputhje që përmbush kriterin e identitetit nuk është certifikatë pastërtie.

Identifikimi me spektroskopi infra të kuqe i përgjigjet mirë një pyetjeje

Prova farmakopeale e identitetit për blunë e metilenit është një krahasim i spektrit me standardin, jo një listë pikash spektrale për t'u kontrolluar. Në parapamjen e monografisë USP për blunë e metilenit, Identifikimi A i referohet spektroskopisë infra të kuqe me optikë ATR ose me një tabletë bromuri kaliumi. Spektri i mostrës duhet të përputhet me spektrin e standardit të referimit USP, ndërsa mostra dhe standardi duhet të përgatiten dhe të regjistrohen në kushte të barasvlershme. Asnjë listë fikse numrash valorë diagnostikues nuk e përcakton përfundimin. E përcakton mbivendosja e spektrave.

Kjo zgjedhje metodologjike pasqyron sjelljen e spektrave FTIR të blusë së metilenit. Veçoritë më të forta ndodhen në rajonin e gjurmës spektrale. Në literaturë, banda kryesore e unazës së konjuguar vendoset vazhdimisht pranë 1590 deri në 1600 cm-1, ku bashkëveprojnë modet e zgjatjes së lidhjeve aromatike karbon-karbon dhe karbon-azot. Banda të tjera pranë 1490 dhe 1390 cm-1 kanë karakter deformimi të unazës, të lidhjeve karbon-azot dhe karbon-hidrogjen. Bandat pranë 1355 dhe 1330 cm-1 përfshijnë lidhjet karbon-azot të grupit dimetilamino dhe deformimet e grupeve metil. Veçoritë pranë 1225 deri në 1250 cm-1 i përkasin skeletit heterociklik, ndërsa bandat pranë 1170 deri në 1130 dhe 1066 cm-1 kanë karakter karbon-squfur, me përkulje të lidhjeve aromatike C-H pranë 880 cm-1. Modet e zgjatjes shfaqen më lart: C-H aromatike pranë 3040 cm-1 dhe C-H të N-metilit afërsisht midis 2900 dhe 3000 cm-1. Caktimet e publikuara të bandave ndryshojnë në hollësi, sepse skeleti i fenotiaziniumit vibron si një sistem i ndërlidhur; prandaj, çdo tabelë të veçantë caktimesh trajtojeni si një interpretim të raportuar, jo si të vetmin interpretim të mundshëm.

Dy efekte të përgatitjes meritojnë vëmendje, sepse ndryshojnë spektrat IR të blusë së metilenit pa ndryshuar ngjyruesin. Së pari, materiali i hidratuar shfaq një brez të gjerë O-H rreth 3300 deri në 3500 cm-1, si dhe përkulje të ujit pranë 1630 deri në 1640 cm-1, ndërsa forma të ndryshme hidrati i zhvendosin në mënyrë të matshme bandat e gjurmës spektrale. Së dyti, matrica e tabletës KBr është higroskopike: lagështia e përthithur prodhon banda pikërisht në ato rajone të ujit dhe mund të ngatërrohet me ujin e hidratit nga mostra. Matja me ATR shmang matricën KBr, por intensitetet ATR ndryshojnë sipas thellësisë së depërtimit, e cila varet nga numri valor; kështu, një spektër ATR dhe një spektër në transmetim i të njëjtit pluhur nuk mund të mbivendosen drejtpërdrejt. Rregulli praktik rrjedh nga kërkesa farmakopeale: krahasoni mostrën dhe standardin e referimit të regjistruar me të njëjtën teknikë dhe dokumentoni se cila teknikë është përdorur. Për kiminë e kationit, kripës dhe hidrateve që qëndron pas këtyre spektrave, shihni referencën për strukturën dhe vetitë e blusë së metilenit.

Tabela e përzgjedhjes së metodës analitike

Kjo tabelë shërben si mjet përzgjedhjeje. Lexoni përgjatë një rreshti për të gjetur cilës pyetje i përgjigjet një metodë, çfarë vërteton një rezultat që përmbush kriteret dhe çfarë mbetet e pavërtetuar.

Pse një përputhje në infra të kuqe nuk është certifikatë pastërtie

Një përputhje e identitetit përjashton një ngjyrues të gabuar. Ajo nuk përcakton të gjithë përbërësit e mostrës. Tre kufizime kanë rëndësinë më të madhe.

Së pari, përbërjet e afërta ngjajnë në infra të kuqe. Azure B ndryshon nga bluja e metilenit vetëm nga një grup metil, ndaj spektri i tij i ngjan shumë atij të blusë së metilenit. Një përzierje që përmban disa për qind Azure B përsëri mbivendoset mirë me një spektër referimi të blusë së metilenit. Zbulimi i kësaj papastërtie kërkon kromatografi, e cila trajtohet në udhëzuesin për papastërtitë e blusë së metilenit dhe metodat e testimit.

Së dyti, spektroskopia infra e kuqe analizon materialin në tërësi dhe ka ndjeshmëri të kufizuar ndaj përbërësve në sasi të vogla. Sasi të vogla ngjyruesish të afërt, tretësish të mbetur ose mbetjesh inorganike fshihen nën bandat kryesore. Mungesa e pikave spektrale shtesë është provë e dobët për mungesën e papastërtive.

Së treti, standardi i referimit përcakton të gjithë krahasimin. Një standard i degraduar, me spektër të zhvendosur nga hidratimi ose i trajtuar në mënyrë të papërshtatshme e ndryshon pikën e referimit. Të njëjtin efekt ka edhe përdorimi i teknikave të papërputhshme, si vlerësimi i një spektri ATR të mostrës kundrejt një standardi referimi të matur me KBr. Regjistroni lotin e standardit, teknikën dhe përgatitjen së bashku me çdo përfundim.

Përzierjet kërkojnë një kujdes të fundit. Një spektër që përputhet kryesisht, por ka shpatulla spektrale ose anomali intensiteti, nuk është një rezultat i pranueshëm me disa shënime sqaruese. Është sinjal për të ndarë përbërësit e mostrës përpara identifikimit të saj.

Metodat plotësuese në praktikë

HPLC e blusë së metilenit jep përgjigjen për përbërjen që spektroskopia infra e kuqe nuk mund ta japë. Metoda aktuale farmakopeale përdor një kolonë të tipit fenil me një gradient ujë-acetonitril që përmban acid trifluoroacetik dhe kryen detektimin në 246 nm, jo në brezin e dukshëm. Identiteti përcaktohet nga përputhja e kohës së retencionit me standardin e referimit; i njëjti krahasim shërben edhe për përcaktimin sasior. Prova e papastërtive organike identifikon Azure B me materialin e tij të referimit, në një retencion relativ pranë 0.8 kundrejt blusë së metilenit në 1.0, dhe kërkon rezolucion të lartë midis dy pikave kromatografike. Vini re zgjedhjen e gjatësisë së valës: seria e demetilimit përthith gjithnjë e më tej drejt së kuqes, nga tionina pranë 600 nm, përmes Azure C, Azure A dhe Azure B, deri te bluja e metilenit pranë 670 nm. Një detektor i vendosur në një gjatësi vale fikse pranë 660 nm, rrjedhimisht, përgjigjet në mënyrë të pabarabartë përgjatë serisë dhe nënvlerëson disa homologë. Profilizimi i plotë i të gjithë serisë, kur nevojitet, duhet të kryhet me një metodë LC-MS/MS me kolonë C18 dhe standarde të kualifikuara për çdo analit.

Difraksioni i pluhurit i përgjigjet pyetjes për gjendjen e ngurtë, informacionin për të cilën dy metodat e mësipërme e shkatërrojnë ose e shpërfillin: tretja e pluhurit për kromatografi fshin informacionin kristalor, ndërsa vibrimet molekulare japin informacion për lidhjet dhe jo për rregullimin strukturor me shtrirje të gjatë. Modelet e difraksionit dallojnë fazat e hidrateve dhe kristalinitetin, dhe bluja e metilenit ka më shumë nevojë për këtë shqyrtim sesa shumica e materialeve. Studimet në gjendje të ngurtë nga Rager dhe kolegët identifikuan pesë struktura të dallueshme hidrati, duke përfshirë një pentahidrat, dy dihidrate, një monohidrat dhe një hidrat të ndërmjetëm, dhe nuk gjetën asnjë trihidrat të mirëfilltë ndër format e karakterizuara. Trajtimi në laborator ka rëndësi këtu: lagështia dhe temperatura ndryshojnë qëndrueshmërinë e hidrateve, ndërsa bluarja intensive mund të ndryshojë fazën ose të ulë kristalinitetin; prandaj kontrolloni dhe dokumentoni lagështinë relative dhe temperaturën dhe mbajeni bluarjen në minimum. Etiketimi i hidrateve dhe ndikimi i tij në masën e peshuar diskutohen më tej te format e hidrateve të blusë së metilenit dhe etiketimi.

Përthithja UV-Vis luan një rol plotësues. Maksimumet e njohura konfirmojnë sjelljen e pritshme të tretësirës dhe mundësojnë përcaktimin e përqendrimit, por një tretësirë blu që përthith në gjatësinë e pritshme të valës është në përputhje me blunë e metilenit pa e vërtetuar atë, pasi ngjyruesit e afërt përthithin në gjatësi vale pranë saj.

Çfarë të pyesni përpara blerjes

Kthejini këto dallime në pyetje për blerjen. Pyesni cili lot është testuar, cila teknikë ka vërtetuar identitetin, nëse prova HPLC e papastërtive ka përdorur materialin e referimit Azure B dhe nëse forma e hidratit është karakterizuar apo është supozuar. Mbi të gjitha, pyesni nëse certifikata mbulon specifikimin e plotë apo vetëm prova të përzgjedhura. Shumë shitës që deklarojnë përputhshmëri farmakopeale testojnë vetëm metalet e rënda, duke i lënë pa përgjigje pyetjet për identitetin, përmbajtjen, papastërtitë organike, tretësit dhe ndotjen mikrobike.

Blupreme teston specifikimin e plotë USP, duke mbuluar identitetin, pastërtinë, papastërtitë organike, tretësit e mbetur, papastërtitë elementare, mbetjen pas kalcinimit, kufijtë mikrobikë dhe endotoksinat bakteriale, në partneritet me një prodhues farmaceutik të blusë së metilenit. Certifikata publike e analizës për çdo seri prodhimi publikohet te testimi i cilësisë nga Blupreme, në mënyrë që baza e përcaktimit sasior dhe rezultatet e papastërtive të lexohen drejtpërdrejt, në vend që të nxirren me hamendësim. Edhe rezultatet pranë 100% kërkojnë që të deklarohet baza e llogaritjes së tyre, siç shpjegon udhëzuesi për përmbajtjen mbi 100 për qind. Përputhja e identitetit e hap shqyrtimin. Dokumentacioni i plotë e përmbyll atë.