የሜቲሊን ብሉ ታሪክ፡ ከቀለም ወደ መድኃኒት እና ምርምር

ሜቲሊን ብሉ ወደ ፋርማሲ ከመድረሱ በፊት ወደ ታካሚ ደርሷል።

Paul Guttmann እና Paul Ehrlich በ1891 ቀለሙ ለወባ ስለተጠቀመበት ያቀረቡት ሪፖርት ሁለት የሙቀት መጠን ግራፎችን ይዟል። ሁለተኛው ከ13 July እስከ 5 August ይዘልቃል፣ ሕክምናውም ቀን በቀን በጎን ማስታወሻው ላይ ተጽፏል። በ18 እና 19 July ያሉት መዝገቦች "1 × 0,05 Methylenblau" ይላሉ። በቀጣዮቹ ቀናት ተመሳሳይ መጠን አምስት እና ሰባት ጊዜ እንደተሰጠ ተመዝግቧል፣ እስከ 22 July ደግሞ አነስተኛ መጠን ያለው quinine ወደ መዝገቡ ተጨምሯል። በግራፉ የመጀመሪያ ግማሽ ከ37 °C እስከ 39.5 °C መካከል የሚወዛወዘው የትኩሳት መስመር ቀለሙ ከተሰጠ በኋላ ይረጋጋል፣ ለቀሪዎቹ ሦስት ሳምንታትም በ36 °C እና 37.5 °C አካባቢ መካከል ይቆያል።

ታካሚው ከሁለቱ አንዱ ነበር፣ በጽሑፉም ሁለቱ እንደ የቤት አገልጋይ እና መርከበኛ ተገልጸዋል። የተሰጣቸው ውህድ ለአሥራ አምስት ዓመታት የንግድ ጨርቃ ጨርቅ ቀለም ሆኖ ነበር፣ እና እነዚህ ሁለት ወንዶች አንድ የተወሰነ ህዋስ ላይ ያነጣጠረ ሙሉ በሙሉ ሰው ሠራሽ መድኃኒት እንደተሰጣቸው ከተመዘገቡት የመጀመሪያ ሰዎች መካከል ናቸው።

ቀለሙ ቀድሞ መጣ

በንግድ የተሳካው የመጀመሪያው ሰው ሠራሽ ቀለም በ1856 በWilliam Henry Perkin ተፈጠረ። Perkin የአሥራ ስምንት ዓመት ወጣት ሲሆን፣ በEaster ዕረፍት ወቅት በቤት ላቦራቶሪ ውስጥ እየሠራ እና quinine ለማዘጋጀት እየሞከረ ነበር። በምትኩ ጥቁር ቅሪት አገኘ፣ አሟሟውም፣ ከዚያም በሐር ላይ በጣም ጥሩ ሁኔታ የሚጣበቅ ቀለም አገኘ። በAugust 1856 ፓተንት አድርጎታል፣ እስከ 1857 መጨረሻም ለLondon የሐር ማቅለሚያ ፋብሪካ አቅርቦት የሚያደርግ ፋብሪካ ነበረው።

በ1875 Adolf von Baeyer ቀይ ቀለም አዘጋጅቶ eosin ብሎ ሰየመው፤ ስሙም Eos ከሚለው የግሪክኛ የንጋት ቃል የመጣ ነው። በ1876 Heinrich Caro፣ በዚያን ጊዜ የBadische Anilin- und Soda-Fabrik ላቦራቶሪ ዳይሬክተር የነበረው፣ ከBaeyer ጋር ሜቲሊን ብሉን ለጥጥ የሚውል በaniline ላይ የተመሠረተ ቀለም አድርጎ አዘጋጀ። የኬሚካል መዋቅሩ ግን ከዚያ ወደ ዘጠኝ ዓመታት ገደማ በኋላ ነው የተወሰነው።

ያ መነሻ ዛሬም በንጥረ ነገሩ ስያሜ ውስጥ ይታያል። "Methylene blue" ከቀለም ካታሎግ የመጣ የንግድ ስም እንጂ የኬሚካል መግለጫ አይደለም። ይህ ስም የሚያመለክተው ውህድ methylthioninium chloride ነው፣ እና በስሙ፣ በጨዉ እና በhydrates መካከል ያሉት ልዩነቶች ማንኛውም ሰው ንጥረ ነገሩን መመዘን ወይም specification ማንበብ እንደጀመረ ጠቃሚ ይሆናሉ።

ማቅለም ድልድዩ ነበር

ከቀለም ፋብሪካዎች ወደ ሆስፒታል የሚወስደው መንገድ በማይክሮስኮፕ በኩል አለፈ፣ እና ሜቲሊን ብሉ ከመኖሩ በፊት ጀምሯል። Wilhelm Erb በ1865 picric acid በመጠቀም ሰው ሠራሽ ቀለምን በደም ላይ የተጠቀመ የመጀመሪያው ሰው ነበር፣ በአንዳንድ ቀይ የደም ሴሎች ውስጥም መረብ መሰል ቅርጽ ተመለከተ።

Paul Ehrlich የ1878 የዶክትሬት ጥናቱ የhistological staining ሂደትን ከጨርቃ ጨርቅ ማቅለም ጋር አነጻጽሮ፣ ሁለቱም የኬሚካል ምላሾች ናቸው ብሎ ተከራክሯል። በRobert Koch ስር በtubercle bacillus ላይ ሲሠራ፣ aniline dyes ወደ acid እና basic ክፍሎች ከፈላቸው፣ እያንዳንዱ ክፍልም የሴል የተለያዩ ክፍሎችን እንደሚያቀልም አረጋገጠ። በ1880 ሁለቱን ቀላቀለ፤ ከላይ ያለው ፈሳሽ ግልጽ እስኪሆን ድረስ የሜቲሊን ብሉ saturated solution ወደ acid fuchsin ፈሰሰ። እሱ neutralen Farbkörper ወይም neutral stain ብሎ የጠራው ውጤት አንድ ሳይሆን ሦስት ቀለሞችን አመጣ፣ ከዚያ በፊት ያልታዩ በpolymorphonuclear cells ውስጥ ያሉ granules አሳየ፣ እና የመጀመሪያውን leukocyte differential count ማድረግ አስቻለ። እነዚያ granules የድብልቁን ሁለቱንም ክፍሎች ስለወሰዱ፣ Ehrlich እነሱን ለሚይዙት ሴሎች neutrophil የሚለውን ቃል ፈጠረ።

ከሁለት ዓመታት በኋላ Koch ሜቲሊን ብሉን tubercle bacillus ለማግኘት ተጠቀመ፣ በ1883 ደግሞ Ehrlich ዘዴውን አሻሻለ። በ1886 የተለየ ዓይነት ምልከታ አሳተመ፤ ቀለሙን በሕይወት ያሉ እንስሳት ውስጥ በመውጋት እያንዳንዱ አካል ምን ያህል እንደሚወስደው አነጻጸረ፣ እና ለአንጎልና ለነርቭ ቲሹ የጎላ ዝንባሌ እንዳለው ደመደመ። ያንን ዝንባሌ ባለፈው ዓመት ለተመለከተው የቀለሙ oxidation-reduction cycling አያያዘው። ይህ cycling ኦክሲጅኑ ሲያልቅ የሜቲሊን ብሉ ፈሳሽ ቀለሙን የሚያጣበት፣ አየር ሲመለስም እንደገና የሚያገኘው ምክንያት ነው። የዚያን cycling ውጤቶች ለመጀመሪያ ጊዜ የለኩት ሙከራዎች የኋለኛው አሥርት ዓመት ናቸው፣ እና ራሱ mechanism ከታሪኩ የተለየ ርዕስ ነው።

ፓራሳይቱ እና ሐምራዊው ኒውክሊየስ

Alphonse Laveran በ1880 አዲስ፣ ያልተቀለመ ደም በመመርመር የወባ ፓራሳይትን አገኘ። በደረቀ የደም smear ውስጥ በመደበኛነት ለማየት ግን stain ያስፈልግ ነበር፣ በዚያን ጊዜ የነበሩት stains ደግሞ ቀይ እና ሰማያዊ ብቻ ያመጡ ነበር።

በ1888 ፖላንዳዊው pathologist Czesław Cheçinski acid fuchsin ን eosin በመተካት የሜቲሊን ብሉ እና eosin ድብልቅ አዘጋጀ። የዘዴው መነሻ ጉዳይ በ30 September 1887 በወባ የሞተ ወታደር ነበር። Cheçinski በደም ፊልሞቹ ውስጥ ሰማያዊ የአበባ መሰል ቅርጾችን፣ አሁን Plasmodium malariae ተብለው የሚታወቁትን፣ እና ማጭድ ቅርጽ ያላቸውን፣ አሁን የPlasmodium falciparum gametocytes ተብለው የሚታወቁትን፣ አየ። ውጤቱ በአንድ ጊዜ ስለበሽታው የነበሩ ሁለት ተፎካካሪ ማብራሪያዎችን አስወገደ፤ የmiasma theory እና Edwin Klebs እና Corrado Tommasi-Crudeli ወባ በbacterium ይከሰታል የሚለውን አባባል።

ፓራሳይቱ ይታይ ነበር። ኒውክሊየሱ ግን አይታይም ነበር፣ ይህም ባህሪው ምን እንደሆነ ክፍት ጥያቄ አድርጎት ነበር። Ernst Malachowski፣ በBreslau የነበረ ሐኪም፣ ችግሩን መጀመሪያ በአጋጣሚ ከዚያም ሆን ብሎ ፈታው። በ1889 በአንድ preparation ውስጥ የplasmodial nucleus differential staining አስተዋለ፣ ግን እንደገና ማምጣት አልቻለም። ሜቲሊን ብሉን acid ማድረግ አልረዳም። በborax አልካላይን ማድረጉ ግን በእያንዳንዱ ጊዜ ውጤቱን አመጣ። ዘዴውን በ15 June 1890 በሕዝብ ፊት አሳየ፣ በዚያው ዓመትም አሳተመው፣ በAugust 1891 ደግሞ የበለጠ ዝርዝር ዘዴ አቀረበ።

Dmitri Romanowsky የራሱን ስሪት በSeptember 1891 አሳተመ። ምርጥ ውጤቶቹ የመጡት ከሁለት ወራት በላይ ያረጀ፣ ችላ የተባለ እና ሻጋታ የያዘ የሜቲሊን ብሉ solution ጠርሙስ ነበር። የMalachowski መግለጫ ሆን ተብሎ የተደረገ ነበር፣ እና በራሱ አባባል በቀላሉ የሚደገም ነበር፤ የRomanowsky ግን አንድ ጊዜ የሠራ የመጨረሻ መንገድ ነበር። ሆኖም eponym ለRomanowsky ሄደ፣ እና ኒውክሊየሱን የሚያሳይ ሐምራዊ ቀለም ማን እንደፈጠረ ያለው ክርክር የራሱ ሰነዶች ያሉት የተለየ ታሪክ ነው።

ምስል፡ ከGuttmann እና Ehrlich የ1891 ሪፖርት የተወሰደው ሁለተኛው የሙቀት መጠን ግራፍ። የላይኛው ክፍል ከ13 እስከ 24 July፣ የታችኛው ክፍል ደግሞ ከ25 July እስከ 5 August ይሸፍናል፤ በጎን ያሉት መዝገቦች የተሰጡትን መጠኖች ይጠቅሳሉ፣ እና ለመዝገቡ የመጨረሻ ሦስት ሳምንታት የሙቀት መጠኑ ወደ መደበኛው ቅርብ ሆኖ ይቆያል። ለKrafts, Hempelmann and Skórska-Stania፣ Parasitology Research 111:1–6 (2012) ከተስካነው ሪፖርት እንደገና ተቀርቧል፣ PMID 22411634።

መብሰሉ በእርግጥ demethylation ነበር

በ1890ዎቹ የተሳተፉት ማንም ሰው "ripening" በሜቲሊን ብሉ ላይ ምን እንደሚያደርግ አያውቅም ነበር። መልሱ ከኢንዱስትሪያዊ ኬሚስትሪ ወጣ። Heinrich August Bernthsen በ1883 phenothiazine የተባለውን parent compound አዘጋጀ፣ በ1885 ሜቲሊን ብሉ የዚያ ቤተሰብ አባል እንደሆነ አረጋገጠ፣ እና በዚያው ዘመን alkaline conditions ከቀለሙ methyl groups እንደሚያስወግዱ፣ በዚህም ዛሬ azures የሚባሉት ውህዶች እንደሚፈጠሩ አሳየ።

Bernard Nocht በ1898 እና 1899 active fraction አወጣ፣ ግን Rot aus Methylenblau፣ ከሜቲሊን ብሉ የመጣ ቀይ ብሎ ብቻ ሊጠራው ቻለ። Michaelis በ1901 azure I እንደሆነ ለየው። Jenner በ1899 ለdye precipitate absolute methanol እንደ solvent አስገባ፣ ይህም የደም ፊልሞችን በሙቀት ማስተካከል ያስፈልግ የነበረውን አስወገደ፤ Leishman እና Reuter ሁለቱንም እድገቶች አጣመሩ፤ Wright በ1902 ቀላል የተደረገ ዘዴ አሳተመ። የGiemsa አስተዋጽኦ፣ እሱም በ1902፣ በዘፈቀደ በበሰለ solution ላይ መደገፍን በማቆም በምትኩ የታወቁ dyes የተለኩ መጠኖችን መጠቀም ነበር። ከዚያም pure methylene azure እንዴት እንደሚያዘጋጅ ለማሳተም አልፈለገም፣ ዘዴውንም ለDr. Grübler's laboratory ሸጠ፤ ላቦራቶሪው ምርቱን azure I በማለት ለገበያ አቀረበ፣ እና የእሱ ስሪት ብቻ እውነተኛ Giemsa stain ነው ብሎ ገለጸ።

ሁለት የዓለም ጦርነቶች ሥራውን በአጋጣሚ አጠናቀቁት። የጀርመን dyes ማግኘት ሳይቻል ሲቀር፣ Lillie, Roe እና Wilcox በአሜሪካዊ ምትኮች ላይ ሠሩ፣ እና ምርጥ staining ከሦስት የተለዩ ክፍሎች እንደሚመጣ አገኙ፤ pure methylene blue፣ የእሱ breakdown product Azure B፣ እና eosin። እነዚህ ሦስቱ ዛሬ ወባን ለመመርመር በሚጠቀሙበት stain ውስጥ ዋና ክፍሎች ሆነው ቀጥለዋል፣ አሁን Malachowski, Wright እና Giemsa የሚሉትን ስሞች አንድ ላይ በሚያጣምር ስያሜ ስር።

ምስል፡ በሰው ቀይ የደም ሴሎች ውስጥ ያሉ የPlasmodium falciparum ring forms፣ በRomanowsky-type method የተቀለሙ። በቀለበቱ ውስጥ ያለው ሐምራዊ መዋቅር Malachowski በborax ያከመው ሜቲሊን ብሉ ለመጀመሪያ ጊዜ እንዲታይ ያደረገው chromatin ነው። ምስሉ በErnst Hempelmann የተዘጋጀ ሲሆን ወደ public domain ተለቋል።

አንድ ስም፣ በርካታ ንጥረ ነገሮች

እነዚያን ክፍሎች የለዩት ዓመታት ከኬሚስትሪው በላይ የቆየ ችግር ትተው ሄዱ። Ralph Lillie በ1969 በbiological stains፣ "manufactured to rigid specifications commensurate with their delicate and exacting uses" እና ለጨርቃ ጨርቅ ማቅለሚያ በሚውሉ non-biological stains፣ "require less rigorous and demanding manufacturing standards" መካከል መስመር ሳለ። ሁለቱም ዓይነት ምርቶች ተመሳሳይ ስም ይዘው ነበር፣ እና በመካከላቸው ያለው ልዩነት የደረጃ ልዩነት ብቻ አልነበረም። ለጥጥ የተጻፈ specification እና ለdiagnostic reagent የተጻፈ specification እርስ በርስ የሚተካኩ አይደሉም፣ እና በጨርቃ ጨርቅ specification መሠረት የተሠራ ንጥረ ነገር ለመዋጥ የታሰበ አልነበረም።

Azure B ይህን በግልጽ ያሳያል። ይህ የሜቲሊን ብሉ monodemethylated form ነው፣ የራሱ የሚለካ pharmacological activity አለው፣ እና ሁለቱን ማንም ከመለየቱ በፊት ከአንድ ምዕተ ዓመት በላይ በclinical methylene blue preparations ውስጥ በቁጥጥር ያልነበረ ክፍል ሆኖ ነበር። አንድ ቡድን ሜቲሊን ብሉ ከተሰጠ በኋላ በautopsy ላይ የተወሰደ የሰው ቲሹ 5 እስከ 14 per cent ያልተለወጠ ሜቲሊን ብሉ እና 86 እስከ 95 per cent Azure B እንደያዘ አገኘ። አንድ የተወሰነ preparation Azure B ሊይዝ ይገባል ወይስ አይገባም፣ እና በምን ገደብ ላይ፣ የspecification ጥያቄ ነው፣ እና Azure B እንደ impurity እና metabolite ላይ የተደረገው ምርምር ከዚያ ይቀጥላል።

ተግባራዊ ውጤቱ የሚገኘውም በspecification ውስጥ ነው። USP መስፈርትን ማሟላት ገበያው የሚያቀርበውን ከፍተኛ ንጽህና ለማግኘት መንገድ ነው፣ ምክንያቱም አንድ መለኪያ ብቻ ሳይሆን ሙሉ በሙሉ የታተመ የፈተና መስፈርት ነው። መለያ፣ assay፣ Azure B ን ጨምሮ organic impurities፣ residual solvents፣ elemental impurities፣ residue on ignition፣ microbial limits፣ እና bacterial endotoxins ይሸፍናል። የheavy-metal ውጤት ብቻ የሚዘግብ እና USP compliance ብሎ የሚጠራ ሰርቲፊኬት ከዚያ ዝርዝር አንድ መስመር ብቻ ነው የዘገበው።

Blupreme ሜቲሊን ብሉን ከpharmaceutical manufacturer ያገኛል እና ሙሉ certificate of analysis ያትማል፣ heavy metals ብቻን ሳይሆን ሙሉውን USP specification ይፈትሻል። certificate of analysis ለማንበብ መመሪያው እና USP designation ምን እንደሚያረጋግጥ እና ምን እንደማያረጋግጥ ሰነዱን ከተነገረው claim ጋር እንዴት እንደሚፈተሽ ያብራራሉ።

ታሪኩ የሚፈቅደው እና የማይፈቅደው

የታሪኩ ተከታታይነት እውነተኛ ነው፣ እና ከአብዛኞቹ የምርት ገጾች ከሚያመለክቱት የበለጠ ረጅም ነው። ሜቲሊን ብሉ በ1891 ለወባ ጥቅም ላይ ዋለ፣ በ1899 በagitated psychosis ውስጥ sedative ሆኖ ተዘገበ፣ እና side chain ከquinacrine፣ chloroquine፣ promethazine እና chlorpromazine ጋር በታሪካዊ መስመር ይገናኛል። Ehrlich ከArthur Leppmann ጋር ያሳተመው የ1890 ጽሑፍ የneuralgic እና rheumatic pain እፎይታን ገልጾ ነበር፣ ከዚያም ቀለሙን በmental illness ላይ መፈተሽ አስቦ ሳይፈትነው ቀርቷል።

ከዚህ ውስጥ ምንም ነገር ዘመናዊ አጠቃቀምን አያረጋግጥም። የ1891 የወባ ውጤት ሁለት ታካሚዎችን እና አንድ የሙቀት መጠን ግራፍን ብቻ ያካተተ ነበር። አንድን ሞለኪውል ለረጅም ጊዜ ማወቅ ለማጥናት ምክንያት ነው፣ ውጤት ግን አይደለም። የውህዱ እንደ መድኃኒት ታሪክ እና በወባ ላይ የተደረጉት ዘመናዊ trials Ehrlich ከሚጠይቃቸው የተለዩ ጥያቄዎችን ይመልሳሉ፣ እና endpoints በራሳቸው መስፈርቶች መነበብ አለባቸው።

በመዝገቡ ውስጥ ከቀድሞው ይልቅ ለአሁኑ ዘመን የሚመለከት አንድ ዝርዝር አለ። ተመራማሪዎች በ2000ዎቹ በBurkina Faso የሜቲሊን ብሉ የወባ trials ሲያካሂዱ፣ pharmaceutical-grade material ለማግኘት ውድድር ውስጥ ራሳቸውን አገኙ፣ እና ጥሬ ንጥረ ነገሩ GMP validation ካገኘ በኋላ ዋጋው ወደ መቶ እጥፍ ገደማ እንደጨመረ ዘገቡ። ቀለም በሌላ ሊተካ ይችላል። መድኃኒት ግን አይችልም። Lillie በ1969 ያሰመረው ልዩነት ዛሬ አንድ ጠርሙስ ምን እንደያዘ የሚወስነው ያው ልዩነት ነው።