Vì sao kết quả định lượng xanh methylen có thể vượt 100%

Kết quả định lượng xanh methylen 101.0% là một kết quả phân tích được báo cáo. Điều đó không có nghĩa là 100 g nguyên liệu thực sự chứa 101 g xanh methylen. Để diễn giải kết quả, cần xác định đại lượng được đo, khối lượng nguyên liệu dùng làm mẫu số và cách phòng thí nghiệm tính toán kết quả.

Định nghĩa xanh methylen của USP quy định khoảng định lượng từ 97.0% đến 103.0%, tính trên cơ sở đã làm khô. Đây là các giới hạn chấp nhận cho một phép thử cụ thể. Chúng không phải là tuyên bố về độ tinh khiết thực tế vượt 100%, cũng không phải là khoảng không đảm bảo đo của mọi phép đo trong phòng thí nghiệm.

Bắt đầu từ mẫu số

Kết quả trên cơ sở nguyên trạng khi nhận được đề cập đến nguyên liệu ở trạng thái khi nhận, bao gồm cả nước trong đó. Kết quả trên cơ sở đã làm khô loại khối lượng mất đi trong điều kiện làm khô quy định khỏi mẫu số. Kết quả này biểu thị lượng chất phân tích so với phần nguyên liệu còn lại.

Cần thận trọng với các thuật ngữ này. Chương về hao hụt khối lượng khi làm khô của USP định nghĩa phép đo dựa trên lượng chất dễ bay hơi được loại bỏ trong các điều kiện quy định. Hao hụt khối lượng khi làm khô không mặc nhiên là phép đo riêng lượng nước. Các chất dễ bay hơi khác cũng có thể góp phần. Hãy sử dụng phương pháp thực tế và cơ sở báo cáo ghi trên phiếu.

Với phép hiệu chỉnh đơn giản, khi kết quả định lượng và hao hụt khối lượng khi làm khô áp dụng cho cùng một nguyên liệu và chất phân tích được giữ lại:

Định lượng trên cơ sở đã làm khô (%) = định lượng trên cơ sở nguyên trạng khi nhận (%) × 100 / 100 − hao hụt khối lượng khi làm khô (%)

Phép quy đổi ngược là:

Định lượng trên cơ sở nguyên trạng khi nhận (%) = định lượng trên cơ sở đã làm khô (%) × 100 − hao hụt khối lượng khi làm khô (%) / 100

Không hiệu chỉnh lần nữa đối với kết quả đã được báo cáo trên cơ sở đã làm khô.

Ví dụ tính toán: một mẫu, hai tỷ lệ phần trăm hợp lệ

Giả sử một mẫu giả định có khối lượng 100 g chứa 88 g xanh methylen, biểu thị theo dạng clorid khan, 10 g nước và 2 g chất rắn không bay hơi khác. Giả định bước làm khô loại bỏ chính xác lượng nước mà không làm mất hoặc biến đổi chất màu. Đây là các lượng dùng để minh họa, không phải kết quả của một lô sản phẩm.

Các tỷ phần trên cơ sở khô có tổng bằng 100%. Kết quả định lượng cao hơn không loại bỏ các chất rắn khác hay làm tăng lượng chất màu. Nó chỉ thay đổi cơ sở so sánh từ toàn bộ mẫu nhận được sang phần khô của mẫu.

Ngược lại, một báo cáo ghi định lượng trên cơ sở đã làm khô là 99.0% và hao hụt khối lượng khi làm khô là 12.0% cho phép suy ra định lượng trên cơ sở nguyên trạng khi nhận là 99.0 × 0.88 = 87.12%, tùy thuộc vào các giả định của phương pháp. So sánh trực tiếp 87.12% đó với kết quả 99.0% trên cơ sở đã làm khô của nhà cung cấp khác sẽ là so sánh các đại lượng khác nhau.

Nước cũng có thể thuộc dạng hydrat của tinh thể. Sự khác biệt giữa xanh methylen trihydrat và nguyên liệu khan giải thích vì sao khối lượng công thức và cơ sở định lượng phải tương ứng với nhau. Nhãn ghi dạng hydrat không thay thế được kết quả đo nước hoặc làm khô riêng cho từng lô.

Vì sao kết quả định lượng được báo cáo có thể vượt 100%

Một phép tính khối lượng khô đúng với các số đo chính xác không thể biến tỷ phần khối lượng thực thành giá trị lớn hơn 100%. Kết quả vượt giới hạn đó xuất phát từ cách thu được giá trị ước lượng bằng phân tích, bao gồm độ không đảm bảo đo, sai lệch có thể có hoặc vấn đề trong báo cáo hay tính toán.

Bản tin sửa đổi chính thức của USP tháng 9 năm 2023 mô tả phép định lượng so sánh tín hiệu sắc ký lỏng của mẫu với chất chuẩn đối chiếu. Đây là phép xác định có hiệu chuẩn, không phải việc tách và cân thực tế từng chất trong bột. Việc ấn định giá trị cho chất chuẩn, cân, pha loãng, đáp ứng của thiết bị và hiệu chỉnh theo hao hụt khi làm khô đều có thể ảnh hưởng đến giá trị ước lượng được báo cáo.

Xét mẫu giả định thứ hai: 90 g xanh methylen và 10 g nước. Tỷ phần thực trên cơ sở khô của mẫu là 100%. Nếu tín hiệu định lượng cao hơn 1% và phép hiệu chỉnh theo hao hụt khi làm khô hoàn toàn chính xác, phương pháp sẽ ước lượng lượng tương đương 90.9 g trong 100 g ban đầu. Hiệu chỉnh giá trị ước lượng đó cho kết quả 90.9 / 90 × 100 = 101.0%. Phần 0.9 g dư ra là do ước lượng cao hơn thực tế, không phải có thêm nguyên liệu.

Giải thích của NIST về độ không đảm bảo đo phân biệt giá trị ước lượng qua phép đo với hiểu biết chính xác về đại lượng thực được đo. Phòng thí nghiệm phải đánh giá độ không đảm bảo đo của chính mình. Quy định 97.0% đến 103.0% không xác lập rằng phương pháp có “độ không đảm bảo đo ±3%”. Kết quả cao cũng không chứng minh rằng nguyên nhân là biến thiên ngẫu nhiên. Nếu kết quả liên tục cao, cần kiểm tra hiệu chuẩn, chuẩn bị mẫu, hệ số hiệu chỉnh và cơ sở tính toán.

Bản thuyết minh đề xuất của USP năm 2026 nêu rõ đây là một đề xuất dựa trên phiên bản chính thức tháng 9 năm 2023. Không nên coi một đề xuất sửa đổi là yêu cầu thử nghiệm đang có hiệu lực chỉ vì nó có ngày ban hành mới hơn.

Hàm lượng chất màu và độ tinh khiết sắc ký trả lời những câu hỏi khác

“Hàm lượng chất màu” cần có phương pháp và cơ sở tính được nêu rõ. Ví dụ, tiêu chuẩn M9140 của Sigma-Aldrich liệt kê hàm lượng chất màu ít nhất 82% cho một chất nhuộm sinh học dạng hydrat. Mức tối thiểu đó không phải là giá trị đo được của từng lô. Nó không xác định phần còn lại là chất nhiễm bẩn nguy hại, cũng không chứng minh sự tương đương với tiêu chuẩn dược phẩm.

Tương tự, tỷ lệ phần trăm diện tích sắc ký là diện tích của một pic được phát hiện chia cho tổng diện tích các pic đã được xác định để đưa vào phép tính. Nó không mặc nhiên là khối lượng xanh methylen chia cho toàn bộ khối lượng mẫu. Hướng dẫn nộp dữ liệu sắc ký của USP phân biệt chuẩn hóa diện tích với tính toán bằng chuẩn ngoại và mô tả các hệ số đáp ứng tương đối, vì cùng một khối lượng có thể tạo ra các đáp ứng khác nhau ở đầu dò.

Trong các điều kiện đã chọn, đầu dò có thể không đo được nước, muối vô cơ hoặc mọi chất nhiễm bẩn hữu cơ. Vì vậy, các phép định lượng riêng biệt có thể cùng tồn tại mà không cộng lại đúng bằng 100%. Kết quả tạp chất hữu cơ, phân tích nguyên tố và hao hụt khối lượng khi làm khô là các phép đo bổ sung cho nhau.

Đọc kết quả trong bối cảnh của báo cáo

Sử dụng hướng dẫn đọc phiếu phân tích để tìm thông tin nhận diện lô, phương pháp, cơ sở báo cáo, kết quả đo và giới hạn chấp nhận. Luôn giữ mỗi kết quả đi kèm đơn vị và mẫu số của nó. Với các phép tính dung dịch trong phòng thí nghiệm, công cụ tính nồng độ mol của xanh methylen nêu rõ các giả định về dạng nguyên liệu và kết quả định lượng.

Kết quả định lượng 101% có thể đáp ứng tiêu chuẩn định lượng trong khi một phép thử bắt buộc khác không đạt. Kết quả định lượng 99% không thể xác lập tính vô trùng, mức tạp chất nguyên tố chấp nhận được hoặc việc sản phẩm được cấp phép. Ý nghĩa của xanh methylen cấp USP phụ thuộc vào toàn bộ các yêu cầu áp dụng. Một phép so sánh chất lượng hữu ích xem xét liệu nguyên liệu được mô tả trong hồ sơ có đáp ứng các yêu cầu đó hay không, thay vì xếp hạng nhà cung cấp theo tỷ lệ phần trăm cao nhất.