మిథిలీన్ బ్లూను కణ శ్వాసక్రియతో అనుసంధానించిన ప్రయోగాలు

ఫైబ్రిన్ తొలగించిన మానవ రక్తాన్ని 37 °C వద్ద మూడు గంటలు ఉంచితే, అందులో ఉన్న ఆక్సిజన్‌లో సుమారు రెండు శాతం వినియోగమవుతుంది. అలా ఉంచే ముందు కొద్దిపాటి మిథిలీన్ బ్లూను కలిపితే, అదే రక్తం సుమారు అరవై ఐదు శాతం ఆక్సిజన్‌ను వినియోగిస్తుంది. కణాల్లో ఏ మార్పూ లేదు. మారింది ద్రావణం మాత్రమే.

ఈ సంఖ్య జాన్స్ హాప్‌కిన్స్‌లో జార్జ్ హారప్, ఇ. ఎస్. గుజ్‌మన్ బారన్ 1928లో ప్రచురించిన పరిశోధనా పత్రం నుంచి వచ్చింది. మిథిలీన్ బ్లూ కణ శ్వాసక్రియను మెరుగుపరుస్తుందనే విస్తృతంగా పునరావృతమయ్యే వ్యాఖ్యకు మూలం ఇదే. ఆ వ్యాఖ్య తప్పు కాదు; అయితే అది వినిపించేంత విస్తృతమైన అర్థాన్ని ఇవ్వదు.

పట్టికలోని సంఖ్య నిజంగా ఏం కొలుస్తుంది

వారు కొలిచిన తుది పరిమాణం ఆక్సిజన్ గ్రహణం; దాన్ని వాయు విశ్లేషణతో నిర్ణయించారు. హారప్, బారన్ తాజాగా సేకరించిన రక్తాన్ని 10 °C వద్ద దూది గుండా వడపోసి తెల్ల రక్తకణాలను తొలగించారు. నమూనాను ఆక్సిజన్‌తో సంతృప్తం చేసి, రెండు భాగాలుగా విభజించి, ఒక భాగానికి రంగు పదార్థాన్ని కలిపారు. నిర్ణీత సమయం ఉంచిన తర్వాత రెండింటినీ విశ్లేషించారు. తెల్ల రక్తకణాల సంఖ్య ఘన మిల్లీమీటరుకు సుమారు వెయ్యిని మించడం చాలా అరుదు. నమూనాలో మొదట ఉన్న ఆక్సిజన్‌లో ఎంత భాగం మాయమైందో, దానినే ఆక్సిజన్ వినియోగంగా నివేదించారు.

వారు కార్బన్ డయాక్సైడ్‌ను కూడా కొలిచారు; కానీ అక్కడ కొలత పద్ధతి ఆటంకం కలిగించింది. అధ్యయనం చేస్తున్న ప్రతిచర్యతో సంబంధం లేని కారణాల వల్ల, ఫైబ్రిన్ తొలగించిన రక్తం మొదటి గంటలో ప్రతి 100 mLకు రెండు మిల్లీమోళ్ల వరకు కార్బన్ డయాక్సైడ్‌ను విడుదల చేసింది. అందువల్ల సంపూర్ణ రక్తం నుంచి లెక్కించిన శ్వాస నిష్పత్తులు ఉపయోగపడలేదు. లాక్ ద్రావణంలో ఉంచిన కడిగిన కణాలు మాత్రమే అర్థం చేసుకోగలిగే గణాంకాలను ఇచ్చాయి. రంగు పదార్థం ఉన్నా లేకపోయినా అవి 0.73 నుంచి 0.80 మధ్యే ఉన్నాయి.

ఈ వివరాన్ని అల్పమైనదిగా తీసుకోలేం. ఈ పత్రాల్లో “శ్వాసక్రియ” అంటే మూసివేసిన పాత్రలో జరిగే వాయు మార్పిడి. ఆక్సిజన్ వినియోగానికీ ఉపయోగకరమైన శక్తి ఉత్పత్తికీ మధ్య ఉన్న తేడాను ఆక్సిజన్ వినియోగం ATP గురించి ఏం చెబుతుంది, ఏం చెప్పదు అనే వ్యాసంలో విడిగా పరిశీలించాం.

కణాల శ్వాసక్రియ అతి తక్కువగా ఉన్నచోటే రంగు పదార్థం అత్యధికంగా పెంచింది

పరిపక్వమైన క్షీరదాల ఎర్ర రక్తకణాల్లో కొలవదగిన ఆక్సిజన్ వినియోగం దాదాపుగా ఉండదు. కేంద్రకం ఉన్న పక్షుల ఎర్ర రక్తకణాల్లో అది ఉంటుంది. హారప్, బారన్ రెండింటిపైనా ప్రయోగాలు చేశారు; వాటి మధ్య తేడానే వారి వాదనకు ప్రధాన ఆధారం.

క్షీరదాల నమూనాల్లో రంగు పదార్థం ఇరవై నుంచి యాభై రెట్ల పెరుగుదలను కలిగించింది. ఇప్పటికే శ్వాసక్రియ జరుగుతున్న కణాలు గల గూస్ పక్షి రక్తంలో, ఆ రేటు ఎప్పుడూ రెండు రెట్లకు మించి పెరగలేదు. ప్రారంభ శ్వాసక్రియ ఎంత ఎక్కువగా ఉంటే, రంగు పదార్థం దాన్ని అంత తక్కువగా పెంచగలిగింది.

ఒకే జాతిలోనూ ఇదే క్రమం కనిపిస్తుంది. పాలిసైథీమియా వెరా ఉన్న రోగి నుంచి తీసుకున్న, అపరిపక్వ కణాలు గల మానవ రక్త నమూనా, రంగు పదార్థం లేకుండానే తన ఆక్సిజన్‌లో 11.3 శాతం వినియోగించింది. ఆరోగ్యవంతుడైన దాత నుంచి తీసుకున్న కడిగిన కణాల్లో ఇది 2.8 శాతం మాత్రమే. రంగు పదార్థాన్ని కలిపినప్పుడు మొదటి నమూనాలో వినియోగం 63.4 శాతానికి మాత్రమే చేరింది—సుమారు ఆరు రెట్ల వేగవృద్ధి. సాధారణ కణాల్లో మాత్రం వేగం దాదాపు ముప్పై రెట్లు పెరిగింది. పరిపక్వ కణాలను అపరిపక్వ కణాల మాదిరిగా ప్రవర్తించే దిశగా రంగు పదార్థం నెట్టింది; అది చేస్తున్న పని ఇదేనని రచయితలు చెప్పారు.

సయనైడ్ దాన్ని ఆపి ఉండాలి

కణ ఆక్సీకరణను సయనైడ్ ఆపుతుందని అప్పటికే తెలుసు. అయినప్పటికీ హారప్, బారన్ రంగు పదార్థంతో పాటు దానినీ కలిపారు.

పశువుల రక్తంలో వచ్చిన ఫలితాలు దీనికి ఉదాహరణ. ఏమీ కలపకుండా మూడు గంటలు ఉంచినప్పుడు ఆక్సిజన్ పరిమాణం వాల్యూమ్ శాతంలో 22.61 నుంచి 22.03కు పడిపోయింది. మిథిలీన్ బ్లూ కలిపితే అది 12.84కు తగ్గింది. మిథిలీన్ బ్లూతో పాటు ఒక మోలార్‌లో ఐదు వేల వంతు సాంద్రత గల పొటాషియం సయనైడ్‌ను కలిపితే, అది 12.74కు తగ్గింది. రంగు పదార్థం ప్రభావం దాదాపు ఏమాత్రం మారలేదు.

చిత్రం: మానవ ఎర్ర రక్తకణాల సూక్ష్మ శ్వాసక్రియను నిరంతరంగా నమోదు చేసిన రేఖాచిత్రం. బాణం మిథిలీన్ బ్లూ కలిపిన సమయాన్ని సూచిస్తుంది. అంతకుముందు రేఖ దాదాపు సమాంతరంగా ఉంటుంది; ఆ తర్వాత క్రమంగా పైకి ఎక్కుతుంది. హారప్, బారన్, Journal of Experimental Medicine 48:207–223 (1928), PMID 19869478 నుంచి పునర్ముద్రించారు.

రంగు పదార్థం ఆక్సిజన్ వాహకంగా పనిచేస్తూ, “పరిపక్వ క్షీరదాల కేంద్రకం లేని ఎర్ర రక్తకణాల నుంచి కనుమరుగైన ఒక పదార్థాన్ని అందిస్తోంది” అనేది వారి నిర్ధారణ. రెండేళ్ల తర్వాత రాక్‌ఫెల్లర్ ఇన్‌స్టిట్యూట్‌లోని మైఖేలిస్, సాలమన్ ఈ భిన్నాభిప్రాయాన్ని శాశ్వతంగా నిలిచిపోయిన రెండు అవకాశాలుగా వివరించారు. రంగు పదార్థం ప్రభావం “ఆ రంగు పదార్థానికి యాదృచ్ఛికంగా ఉన్న ఒక లక్షణం” కావచ్చు; లేదా అది “జీవుల్లోని ఏదో తెలియని పదార్థానికి ఒక నమూనా” కావచ్చు. ఈ రెండు అవకాశాల మధ్య ప్రశ్న ఇంకా తేలలేదు. మారిందల్లా, ఇప్పుడు ఆ కణాలను మరింత కచ్చితంగా వర్ణించగలగడం.

కాలేయ సారం కూడా అదే పని చేసింది

అవయవాల నుంచి చల్లటి నీటితో తీసిన సారాలు కూడా అదే ప్రేరణను కలిగిస్తాయని మైఖేలిస్, సాలమన్ చూపించారు. ఎలుక కాలేయ సారం అత్యంత బలమైన ప్రభావాన్ని చూపింది; ఆ తర్వాత వరుసగా మూత్రపిండం, ప్లీహం, వృషణం ఉన్నాయి. మెదడు, కండరం, రక్త సీరమ్ ప్రభావం చాలా తక్కువగా ఉంది లేదా అసలే లేదు.

తర్వాత వారు కార్బన్ మోనాక్సైడ్ సమక్షంలో ఆ సారాన్ని పరీక్షించారు. 98 శాతం కార్బన్ మోనాక్సైడ్, 2 శాతం ఆక్సిజన్ ఉన్న మిశ్రమంలో, సారం లేదా రంగు పదార్థం ప్రేరేపించిన శ్వాసక్రియ మారలేదు. అదే వాయు మిశ్రమం ఈస్ట్ శ్వాసక్రియను, కేంద్రకం ఉన్న కోడి ఎర్ర రక్తకణాల శ్వాసక్రియను సుమారు 60 నుంచి 80 శాతం నిరోధించింది. ఇది కార్బన్ మోనాక్సైడ్‌కు స్పందించే శ్వాసక్రియా ఎంజైమ్ గురించి వార్‌బర్గ్ ఇచ్చిన వివరణకు అనుగుణంగా ఉంది. కాబట్టి గుర్తించని ఆ కణజాల పదార్థం వార్‌బర్గ్ ఎంజైమ్ కాదు.

ఆ పదార్థం ఏమై ఉండవచ్చనే కొన్ని ఊహలు పరిశోధనలో తోసిపుచ్చబడ్డాయి. క్షయీకృత గ్లూటాథయోన్, సిస్టీన్ తమ సొంత ఆక్సీకరణకు అవసరమైనంత ఆక్సిజన్ వినియోగాన్ని మాత్రమే కలిగించాయి. హార్డెన్, యంగ్‌ల కోఎంజైమ్‌ను కూడా మినహాయించారు; ఎందుకంటే అది కండరాల్లో అత్యధికంగా ఉన్నా, వాటిలో ప్రభావం దాదాపు అతి తక్కువగా కనిపించింది. కొన్నేళ్ల క్రితం పేరు పెట్టిన కైలిన్ సైటోక్రోమ్ విషయంలోనూ ఇదే వైరుధ్యం ఎదురైంది. క్రియాశీల పదార్థం కణ కేంద్రకం నుంచి వచ్చిందనే తమ సొంత ప్రతిపాదనను కూడా వారు కేవలం ఒక సూచనగానే పేర్కొన్నారు.

ఈ ప్రభావం కొన్ని పరిస్థితులపై ఆధారపడింది

కణాలు చెక్కుచెదరకుండా ఉండాలి. స్వేదనజలం లేదా పదేపదే గడ్డకట్టించడం వల్ల కలిగిన హీమోలిసిస్, అంటే ఎర్ర రక్తకణాలు విచ్ఛిన్నమవడం, రంగు పదార్థానికీ సారానికీ వచ్చే ప్రతిస్పందనను పూర్తిగా తొలగించింది. పాక్షిక హీమోలిసిస్ అయితే, దాని పరిమాణానికి అనుగుణంగా ప్రతిస్పందనను తగ్గించింది.

చక్కెర కూడా అవసరమైంది. గ్లూకోజ్, ఫ్రక్టోజ్, సుక్రోజ్ రంగు పదార్థం ప్రేరేపించిన శ్వాసక్రియకు తోడ్పడ్డాయి; మానిటాల్ తోడ్పడలేదు. చక్కెర లేనప్పుడు శ్వాసక్రియ అసలు జరగలేదు. ఆ ప్రక్రియలో రంగు పదార్థం కణాలను దెబ్బతీసినట్లు కనిపించింది; అందుకే ఒకటి లేదా రెండు గంటల తర్వాత గ్లూకోజ్ కలిపినా శ్వాసక్రియ తిరిగి ప్రారంభం కాలేదు. కణానికి అవసరమైన ఒక నిర్మాణ భాగాన్ని రంగు పదార్థం ఆక్సీకరిస్తోందని రచయితలు సూచించారు.

చీకటిలోనూ ప్రభావం స్పష్టంగా ఉన్నప్పటికీ, వెలుతురు రంగు పదార్థం ప్రభావాన్ని గణనీయంగా పెంచింది. క్షయీకరణ చెందగల ఇతర రంగు పదార్థాలు భిన్నంగా ప్రవర్తించాయి: టోలుయిలీన్ బ్లూ మిథిలీన్ బ్లూతో సమానంగా లేదా దానికంటే ఎక్కువ ప్రభావం చూపింది; ఇండిగో డైసల్ఫోనేట్ మాత్రం దాదాపు ఏమీ చేయలేదు. రంగు పదార్థం ఆక్సీకరణ-క్షయీకరణ పొటెన్షియల్‌కూ దాని ప్రభావ పరిమాణానికీ మధ్య స్పష్టమైన సంబంధం కనిపించలేదు. పొర పారగమ్యత, విషపూరితత ఇందుకు కారణాలని రచయితలు భావించారు.

ప్రభావం శ్వాసక్రియను కాకుండా కిణ్వ ప్రక్రియను అనుసరించింది

బారన్ 1930 అధ్యయనం కణ సస్పెన్షన్ల నుంచి, సాధారణ ఎలుక అవయవాల కణజాల ముక్కలు మరియు మార్పిడి చేసిన కణితుల వైపు మళ్లింది.

వాయు సమక్ష గ్లైకోలిసిస్ లేని కణజాలాల్లో మిథిలీన్ బ్లూ ఏమీ చేయలేదు లేదా ఆక్సిజన్ వినియోగాన్ని కొద్దిగా తగ్గించింది: మూత్రపిండంలో సుమారు 14 శాతం, క్లోమంలో సుమారు 14 శాతం, కాలేయంలో సుమారు 5 శాతం. ఆక్సిజన్ ఉన్నప్పటికీ కిణ్వ ప్రక్రియ జరిపే కణజాలాల్లో అది వినియోగాన్ని పెంచింది: ప్లీహంలో సుమారు 8 శాతం, మెదడులో సుమారు 13 శాతం. కణితుల్లో పెరుగుదల మానవ రొమ్ము కార్సినోమాలో సుమారు 27 శాతం నుంచి రౌస్ కోడి సార్కోమాలో 80 శాతానికి పైగా ఉంది. ఇది ప్రతి కణజాలంలోని వాయు సమక్ష గ్లైకోలిసిస్‌కు సుమారుగా అనుపాతంలో ఉంది.

చిత్రం: ప్రతి బిందువు ఒక కణజాల రకాన్ని సూచిస్తుంది. అడ్డ అక్షం వాయు సమక్ష గ్లైకోలిసిస్‌ను చూపిస్తుంది; నిలువు అక్షం మిథిలీన్ బ్లూ కలిపిన తర్వాత ఆక్సిజన్ వినియోగంలో వచ్చిన మార్పును చూపిస్తుంది. గణాంకాలు బారన్, Journal of Experimental Medicine 52:447–456 (1930), పట్టిక 6, PMID 19869777 నుంచి తీసుకున్నారు.

తర్వాత సయనైడ్ ప్రయోగం దీనికి ప్రతిబింబంలాంటి ఫలితాన్ని ఇచ్చింది. అంతకుముందు స్పందించని ఆ కణజాలాల్లో శ్వాసక్రియను సయనైడ్‌తో అడ్డుకున్నప్పుడు కిణ్వ ప్రక్రియ ప్రాధాన్యం పొందింది. అప్పుడు రంగు పదార్థం మళ్లీ ఆక్సిజన్ వినియోగాన్ని పెంచింది: మూత్రపిండంలో సుమారు 59 శాతం, కాలేయంలో సుమారు 19 శాతం, ప్లీహంలో సుమారు 286 శాతం, వృషణంలో సుమారు 200 శాతం.

కణం లేదా కణజాలం కిణ్వ సామర్థ్యాన్ని పరీక్షించడానికి ఈ రంగు పదార్థాన్ని ఉపయోగించవచ్చని బారన్ ప్రతిపాదించారు. చివరగా ఒక ఊహను పేర్కొన్నారు: రంగు పదార్థం ఉన్న మాధ్యమంలో అనేక తరాల పాటు కణితిని పెంచడం వల్ల, ఏదో ఒకరోజు దాని జీవక్రియ శాశ్వతంగా సాధారణ కణజాల జీవక్రియలా మారవచ్చు. అది 1930లో రాసిన పరిశోధన ప్రశ్న. చికిత్సకు సంబంధించిన వాదన కాదు.

ఆ ప్రయోగాలు కొలిచి ఉండలేనిది ఏమిటి

1928, 1930లో “శ్వాసక్రియ” అంటే ఆక్సిజన్ వినియోగం. అడెనోసిన్ ట్రైఫాస్ఫేట్ గురించి మొదటిసారి 1929లో నివేదించారు. విడిగా తీసిన మైటోకాండ్రియా ఎలక్ట్రాన్లను బదిలీ చేస్తూనే ఫాస్ఫేట్‌ను ఎస్టరీకరిస్తాయని 1949లో నిరూపించారు. తొలి మిథిలీన్ బ్లూ పత్రాల్లో ఏదీ శక్తి ఉత్పత్తిని కొలిచి ఉండలేదు; అలా కొలిచామని వాటిలో ఏదీ చెప్పలేదు.

రెండో సమస్య కణాలే. పరిపక్వ క్షీరదాల ఎర్ర రక్తకణాల్లో మైటోకాండ్రియా ఉండవు. రెటిక్యులోసైట్ దశలో అవి ఎంపికాత్మక ఆటోఫజీ ద్వారా మైటోకాండ్రియాను, రైబోసోమ్‌లను తొలగిస్తాయి. అందుకే పరిపక్వ ఎర్ర రక్తకణం గ్లైకోలిసిస్‌పై నడుస్తుంది; దాని పెంటోస్ ఫాస్ఫేట్ మార్గంపై ప్రధానంగా ATP కోసం కాకుండా NADPH కోసం ఆధారపడుతుంది. 1928 ప్రయోగాల్లో మరమ్మతు చేయడానికి ఎలక్ట్రాన్ రవాణా గొలుసు అసలు లేదు. ఆక్సిజన్‌ను వినియోగించినది ఏదైనా, అది వేరే పని చేస్తోంది.

ఆ వేరే పని ఏమిటో ఇప్పుడు తగినంత స్పష్టంగా వివరించగలం. మిథిలీన్ బ్లూ కణంలోని క్షయీకరణ సమతుల్యాల నుంచి ఎలక్ట్రాన్లను స్వీకరించి ల్యూకోమిథిలీన్ బ్లూగా మారుతుంది. అది అణురూప ఆక్సిజన్ వల్ల తిరిగి ఆక్సీకరణ చెంది, చక్రాన్ని పూర్తి చేస్తుంది. మానవ ఎర్ర రక్తకణాల్లో NADPHపై ఆధారపడే ఫ్లావిన్ రిడక్టేజ్, దానికి సంబంధించిన డైసల్ఫైడ్ రిడక్టేజ్‌లు క్షయీకరణ దశను నిర్వహిస్తాయి. గుర్తించిన గ్లూకోజ్‌ను ఉపయోగించిన 1976 అధ్యయనంలో, ఈ రంగు పదార్థం హెక్సోస్ మోనోఫాస్ఫేట్ షంట్‌ను ప్రేరేపిస్తుందని, తక్కువ సాంద్రతలో ప్రభావం ఆక్సీహీమోగ్లోబిన్‌పై ఆధారపడుతుందని, ఎక్కువ సాంద్రత అయిన 0.1 mM వద్ద హైడ్రోజన్ పెరాక్సైడ్‌ను ఉత్పత్తి చేస్తుందని కనుగొన్నారు. క్షయీకృత రంగు పదార్థం ఆక్సిజన్‌ను కలిసినప్పుడు ఏర్పడేది పెరాక్సైడ్; ఫాస్ఫేట్ బంధాలు కాదు.

మైటోకాండ్రియాలో పరిస్థితి, ప్రజాదరణ పొందిన సారాంశాలు ఒప్పుకునేదానికంటే ఎక్కువ వివాదాస్పదంగా ఉంది. ఒక పరిశోధన ధోరణి ప్రకారం, రంగు పదార్థం కాంప్లెక్స్ I ప్రాంతం నుంచి ఎలక్ట్రాన్లను తీసుకుని సైటోక్రోమ్ cకి అందిస్తుంది. మరో అధ్యయనంలో, చిట్టెలుక మెదడు మైటోకాండ్రియాలో యాంటిమైసిన్‌తో అడ్డుకున్న తర్వాత అది శ్వాసక్రియను పునరుద్ధరించలేదని కనుగొన్నారు. ఆ అధ్యయనం ఎలక్ట్రాన్ స్వీకర్త స్థానాన్ని బదులుగా కాంప్లెక్స్ IIIలోని యుబిక్వినాల్-బంధన స్థలంగా గుర్తించింది. మూడో అధ్యయనంలో, తక్కువ సాంద్రతలు విశ్రాంత స్థితిలో ఆక్సిజన్ వినియోగాన్ని పెంచినా, ADP ప్రేరేపించిన శ్వాసక్రియను మార్చలేదని కనుగొన్నారు. ఈ అంశాన్ని అత్యంత సూటిగా చెప్పాలంటే, మిథిలీన్ బ్లూ ప్రేరేపించిన ఆక్సిజన్ వినియోగం ఆక్సిడేటివ్ ఫాస్ఫోరిలేషన్‌పై అసలు ఆధారపడదు: శ్వాసక్రియా గొలుసును నిరోధించినప్పటికీ, ఆ గొలుసు లేని నమూనాల్లోనూ అది కొనసాగింది.

ఈ రెండు పరిమాణాల మధ్య తేడాను నేరుగా కొలిచిన అధ్యయనాలూ ఉన్నాయి. విడిగా తీసిన ఎలుక కాలేయ మైటోకాండ్రియాలో, రంగు పదార్థం సాంద్రత పెరిగేకొద్దీ శ్వాసక్రియా నియంత్రణ నిష్పత్తులు తగ్గాయి, ఉబ్బుదల వచ్చింది. దీన్ని రచయితలు ఆక్సిడేటివ్ ఫాస్ఫోరిలేషన్ అనుసంధానం తెగిపోవడంగా వర్ణించారు. ద్రవాన్ని ప్రసరింపజేసిన ఎలుక కాలేయంలో, మిథిలీన్ బ్లూ ఆక్సిజన్ వినియోగాన్ని పెంచుతుండగా ATP-ADP నిష్పత్తి తగ్గింది.

వైద్య సంబంధిత ఆధారాలు కూడా ఇదే సందేశాన్ని ఇస్తాయి. మెత్‌హీమోగ్లోబినీమియాకు, NADPHపై ఆధారపడే క్షయీకరణ మార్గం ద్వారా, ప్రతి కిలోగ్రాముకు సుమారు ఒకటి నుంచి రెండు మిల్లీగ్రాముల మిథిలీన్ బ్లూను సిర ద్వారా ఇచ్చి చికిత్స చేస్తారు; ఎక్కువ మోతాదులు మాత్రం చికిత్స చేస్తున్న అదే పరిస్థితిని కలిగిస్తాయి. చెక్కుచెదరని ఎర్ర రక్తకణాల్లో విరుగుడు ప్రభావం అత్యధికంగా ఉంటుందని, హీమోలిసిస్ ఉన్నప్పుడు తగ్గుతుందని అదే సమీక్ష పేర్కొంది. అంటే, 1930లో హీమోలిసిస్‌పై వచ్చిన పరిశీలన డెబ్బై మూడు సంవత్సరాల తర్వాత ఆసుపత్రి సందర్భంలో మళ్లీ కనిపించింది. ఉపయోగకరమైన, హానికరమైన ప్రభావాలు ఒక మోతాదు పరిమితికి ఇరువైపులా ఉండే సమ్మేళనం విషయంలో, ఆక్సిజన్ వినియోగ కొలత ఆధారంగా మోతాదును ఊహించకూడదు.

ఈ చర్చలో బ్యాచ్ ఎందుకు భాగం కావాలి

హారప్, బారన్ మరోసారి చదవదగిన విషయాన్ని గమనించారు. మిథిలీన్ బ్లూ స్వయంగా స్పెక్ట్రోస్కోప్‌లో మెత్‌హీమోగ్లోబిన్‌కు ప్రత్యేకమైన రెండు పట్టీల మధ్య ఒక పట్టీని ఏర్పరుస్తుంది; “పైపైన పరిశీలించినప్పుడు ఇది సులభంగా గందరగోళానికి దారితీయవచ్చు.” గుర్తించడానికి ప్రయత్నిస్తున్న పదార్థాన్ని రంగు పదార్థమే పోలి కనిపించగలదు.

ఇదే సమస్యకు ఒక రసాయన రూపం కూడా ఉంది. చిన్న భాగంగా ఉండే సంబంధిత ఫీనోథయజీన్‌కు దాని సొంత రెడాక్స్ ప్రవర్తన, పారగమ్యత, విషపూరితత ఉంటాయి. నమోదు చేసిన ఒక ఉదాహరణ దీని ప్రాముఖ్యతను స్పష్టంగా చూపిస్తుంది: మిథిలీన్ బ్లూ అయోడినేషన్‌పై చేసిన అధ్యయనంలో, సుమారు 7 నుంచి 8 శాతం Azure B ఉన్న నమూనాలు ప్రధానంగా అయోడినేషన్ చెందిన Azure Bని ఉత్పత్తి చేశాయి. కాబట్టి ఆ ప్రతిచర్యలో మిథిలీన్ బ్లూ కాకుండా మలినమే ప్రధాన పాత్ర పోషించింది.

ప్రయోగశాలలోనైనా, రంగు పూసే పని బల్ల వద్దనైనా, అక్వేరియంలోనైనా మిథిలీన్ బ్లూను రియాజెంట్‌గా ఉపయోగించే ఎవరైనా, బ్యాచ్ లక్షణాలను నిర్ధారించకపోతే, స్పష్టంగా నిర్వచించని పదార్థంతో పనిచేస్తున్నట్లే. సంబంధిత పదార్థాలు, గుర్తింపు, మూలక మలినాలు, మిగిలిన ద్రావకాలు, దహనం తర్వాత మిగిలే అవశేషం—ఇవన్నీ ప్రయోగంలో భాగాలే; దాని చుట్టూ ఉండే కాగితపు పనులు కావు. Blupreme తన మిథిలీన్ బ్లూను ఔషధ తయారీదారు నుంచి పొందుతుంది. భార లోహాలను మాత్రమే కాకుండా మొత్తం USP నిర్దేశాన్ని పరీక్షించి, పూర్తి విశ్లేషణ ధ్రువపత్రాన్ని ప్రచురిస్తుంది. విశ్లేషణ ధ్రువపత్రాన్ని చదవడానికి మార్గదర్శిని, USP-గ్రేడ్ గుర్తింపు ఏం నిర్ధారిస్తుంది, ఏం నిర్ధారించదు అనే వ్యాసాలు, వాదనకు పత్రం సరిపోతుందో ఎలా తనిఖీ చేయాలో వివరిస్తాయి.

ఆ సంఖ్య సరైనదే

1928, 1930 ప్రయోగాలు జాగ్రత్తగా నిర్వహించారు. వాటి ప్రధాన పరిశీలన ఇప్పటికీ నిలిచింది: క్షయీకరణ చెందగల రంగు పదార్థం, అతి తక్కువ శ్వాసక్రియ ఉన్న కణాన్ని, సయనైడ్ అడ్డుకునే దశ గుండా వెళ్లకుండానే, విశ్రాంత స్థితి రేటు కంటే అనేక రెట్లు ఎక్కువ ఆక్సిజన్ వినియోగించేలా చేయగలదు.

“శ్వాసక్రియ”ను దాని ఆధునిక అర్థంతో చదివినప్పుడే పొరపాటు మొదలవుతుంది. వాయు మార్పిడి కొలత ఎలక్ట్రాన్లు ఆక్సిజన్‌కు చేరాయని చెబుతుంది. వాటిలో ఏవైనా ATP తయారీకి ఉపయోగపడ్డాయో చెప్పదు. మైటోకాండ్రియా లేని కణంలో ఈ రెండు వ్యాఖ్యల మధ్య వ్యత్యాసం గరిష్ఠంగా ఉంటుంది. కణాల్లో మిథిలీన్ బ్లూ చేసే పనుల విస్తృత పటం ఇదే తేడాను మరింత విస్తృత సందర్భంలో చూపిస్తుంది. రంగు పదార్థం నుంచి ఔషధం వరకు ఈ సమ్మేళనం చరిత్ర వస్త్రాలకు రంగు ఇచ్చే పదార్థం అసలు ఈ ప్రయోగాల దాకా ఎలా వచ్చిందో వివరిస్తుంది.