Artikulua
Metileno urdinarekin tindatzea: mikroskopia-metodoak eta benetako irudien atlasa
Metileno urdinarekin tindatzeak errazago bereizteko modukoak egiten ditu eremu argiko mikroskopian bestela nekez ikusten diren zelula-ezaugarriak. Ikasleei masail-zelula baten nukleoa aurkitzen edo mikroorganismoen ingerada eta antolamendua aztertzen lagun diezaieke. Objektu urdin bat, ordea, behaketa bat da. Organismoari izena ematea, hura neurtzea eta gaixotasun baten adierazle ote den erabakitzea zeregin bereiziak dira.
Azaleko irudiak kontrastearen printzipioa erakusten du. Beheko atlasak modu independentean dokumentatutako laginen benetako argazkiak biltzen ditu, jatorrizko iturriei buruzko informazioarekin.
Zer erakusten du metileno urdinak?
Metileno urdina tindagai basikoa da: haren ioi koloredunak karga positiboa du. OpenStaxek laginen tindaketari buruzko azalpenean dioenez, tindagai basikoek karga negatiboa duen zelula-materialarekin elkarreragiten dute, eta zelulak hondo argiago baten gainean nabarmentzen lagun dezakete. Prestakin egokietan, metileno urdinak azido nukleikotan aberatsak diren eskualdeak eta tindagaia lotzen duten beste egitura batzuk nabarmentzen ditu.
Tindaketa sinple batean, tindagai bakarrak ematen du kontrastea. Horren ondorioz, hainbat organismo urdin ager daitezke, organismo bera izan gabe. Hasieran, galdera erabilgarriak deskribatzaileak dira: objektuak biribilak ala luzangak dira, bakartuak ala multzokatuak, uniformeki tindatuak ala barruan bereizketak dituztenak? Ikusi tindaketa sinplearen eta Gram tindaketaren arteko aldea kolorea sailkapen-emaitza gisa interpretatu aurretik.
Kontrastea eta bereizmena ez dira gauza bera. Kontrasteak objektu bat ingurutik bereizten laguntzen du; bereizmenak elkarrengandik hurbil dauden xehetasunak bereizten ditu. Irudi ilunago batek ez du bermatzen egitura gehiago bereiztea. Era berean, pikor ilun guztiei ez zaie organuluaren etiketa jarri behar.
Prestakin naturalak, tindatutako muntaketa hezeak eta frotisak
Tindatu gabeko prestakin heze batek, edo prestakin natural batek, tindagairik gehitu gabeko ikuspegia gordetzen du, nahiz eta jatorrizko ingurunetik ateratzeak ere lagina aldatu. Tindatutako muntaketa heze batean, erreaktiboa gehitzen da materiala estalki baten azpian likidoan dagoen bitartean. Finkatutako frotis batean, materiala portaobjektu batean hedatzen da, eta zehaztutako finkatze-metodo bat erabiltzen da ondorengo prozesamenduaren aurretik. OpenStaxen prestaketari buruzko ikuspegi orokorrak muntaketa hezeak eta finkatzea bereizten ditu, eta azaltzen du zergatik ez duten finkatutako organismoek ohiko mugimendua edo metabolismoa behatzeko aukerarik ematen.
Prestakin horiek galdera desberdinei erantzuten diete:
| Prestakina | Behaketa erabilgarria | Irudiak bakarrik ezin duena ezarri |
|---|---|---|
| Muntaketa heze naturala | Mugimendua, ingeradak, berez ikusgai dagoen materiala | Identitatea mugimenduan edo forman soilik oinarrituta |
| Tindatutako muntaketa hezea | Tindagaia lotzen duten egituren eta inguruaren arteko kontrastea | Erreaktiboak ohiko fisiologia aldatu gabe utzi duen |
| Finkatutako eta tindatutako frotisa | Zehaztutako prestaketa baten ondoren gordetako morfologia | Jatorrizko lagin biziak nola jokatzen zuen |
| Izen jakineko metodo diferentziala | Zehaztutako tindaketa-erreakzioa, kontrol egokiekin | Espeziearen identitatea edo diagnostikoa, metodoaren gainerako ebidentziarik gabe |
Ikasgelan alderaketa bat egiteko, erregistratu tindatu gabeko prestakin bat, irakaskuntza-protokoloaren arabera bereiz prestatutako prestakin tindatu bat aztertu aurretik. Mantendu argiztapena eta irudiak hartzeko ezarpenak alderatzeko moduan. Bi zelula desberdinen argazkiak egiten badira, deskribatu adibide gisa, ez zelula bakar baten aurreko eta ondorengo erregistro gisa.
Mikroskopia-atlasa: benetako hiru lagin tindatu
Atlas hau lizentzia irekia duten hiru mikrografiaren hautaketa eta interpretazio originala da. Iturrietako egileek laginak eta tindagaiak identifikatzen dituzte. Ez dugu haien laginen benetakotasuna modu independentean egiaztatu. Irudiak moztu gabe erreproduzitu dira, galerarik gabeko WebP bihurketen bidez, ezaugarririk gehitu edo koloreak aldatu gabe.
1. lamina: giza masail-zelulak
Lagina: giza masail-zelulak. Tindagaia: metileno urdina. Handipena: 400×, argazkilariak adierazitakoa. Eskala-barra: ez dago eskuragarri; iturriak ez du pixelaren tamaina kalibraturik ematen. Fritzmann2002ren argazkia, 2017koa, Giza masail-zelulak (metileno urdinarekin tindatuta) lanetik hartua, CC BY-SA 4.0 lizentziarekin. Erreprodukzio honek lizentzia hori mantentzen du.
.jpg){kind=link}
Hasi zelula bakartu batekin: haren nukleo ilunagoa errazago bereizten da inguruko zitoplasma urdinetik. Ondoren, aztertu haren azpian dauden zelula gainjarriak. Gainjartzeak zaildu egiten du muga bati jarraitzea, eta tokian tokiko eskualde ilunagoa sor dezake. Erabili lamina hau ingeradak marrazten trebatzeko, ez orban ilun bakoitza nukleo gisa zenbatzeko. Masail-zelulak behatzeko gidak lagin horri dagokion ariketa garatzen du.
2. lamina: tipula-zelulak
Lagina: tipula-zelulak, iturriak identifikatutakoaren arabera. Tindagaia: metileno urdina. Handipena: “200x” ageri da jatorrizko fitxategi-izenean; ez da modu independentean balioztatu. Eskala-barra: ez dago eskuragarri; ez da kalibraziorik ematen. Alvy16ren argazkia, 2019koa, Tipula-zelula 200x lanetik hartua, CC BY 4.0 lizentziarekin.
Konpartimentu luzangek geruza antolatu bat osatzen dute. Alderatu haien muga partekatu luzeak 1. laminako ingerada irregularrekin. Erreparatu, halaber, material ilun nabarmenari eta eremuaren distira irregularrari. Argazkiak ez du metakin ilun bakoitzaren identitatea ezartzen. Erakusten du zergatik jaso behar dituen behaketa-erregistro erabilgarri batek artefaktuak eta ziurgabetasuna, kolorea hartzen duen guztiari etiketa jarri beharrean.
3. lamina: iturriak Candida spp. gisa identifikatutako legamia
Lagina: Candida spp., argazkilariaren arabera. Tindagaia: metileno urdinarekin egindako tindaketa positibo sinplea. Handipena: ez dago eskuragarri. Eskala-barra: ez dago eskuragarri; ez da pixelaren tamaina kalibraturik ematen. Martaren argazkia, Wikimediako Martunia.g erabiltzailearena, 2021ekoa, Metileno urdinarekin egindako tindaketa positiboa 2 lanetik hartua, CC BY 4.0 lizentziarekin.
Alderatu multzo urdin trinkoak objektu gutxiago dituzten ertzekin. Banakako ingeradei errazago jarraitzen zaie objektuak gutxiago gainjartzen diren tokietan. Candida izena iturriaren erregistrotik dator, ez argazki honetan egindako espezie-identifikazio batetik. Lamina honek ez du bideragarritasunari buruzko emaitzarik ere ematen. Legamiaren bideragarritasun- eta arnasketa-saioek beren baldintzak, kontrolak eta interpretazioa behar dituzte.
Eskala zuzen irakurtzea
Lamina hauek ikusizko alderaketak egiteko balio dute, ez mikrometrotan neurtzeko edo laminen arteko zelula-tamaina absolutuak alderatzeko. Adierazitako handipenak ez du falta den kameraren kalibrazioa berreskuratzen. Irudi baten bistaratze-tamaina aldatzeak haren itxurazko handipena aldatzen du.
Zure irudietarako, ezarri neurketa-kalibrazio bat erreferentzia-estandar ezagun bat eta dagokion konfigurazio optikoa erabiliz. Nikonen mikrometriari buruzko gidak azaltzen du nola bihurtzen dituen platina-mikrometro batek irudiaren edo erretikuluaren zatiketa arbitrarioak luzera fisiko. Erregistratu objektiboa, kameraren konfigurazioa eta kalibrazioa, eta gehitu eskala-barra bat datu horietatik abiatuta. Ez ondorioztatu barra bat testuliburu bateko batez besteko zelula-tamainatik.
Botila metodoarekin bat dator?
Metileno urdinaren etiketa duen botila bat ez da laborategiko zehaztapen oso bat. Egiaztatu haren kontzentrazioa eta unitateak, disolbatzailea, osagai gehigarriak, aurreikusitako aplikazioa, lotearen dokumentazioa eta jarraibideak. Erreaktibo baten segurtasun-datuen fitxak arriskuak deskribatzen ditu; metodoaren jarraibideek ezartzen dute nola erabili aurreikusitako prestakinerako.
Adibide zehatz bat da Mercken Löffler metileno urdinaren disoluzioa. Fabrikatzaileak mikroskopiarako erreaktibo gisa identifikatzen du, eta tindaketa azido-alkoholarekiko erresistentean kontratindagai gisa duen eginkizuna deskribatzen du. Adierazitako sukoitasunak ere erakusten du zergatik ez den “likido urdin bat” informazio nahikoa manipulazioa edo berotzea planifikatzeko. Ezaugarri horiek formulazio horri dagozkio, ez automatikoki metileno urdinaren edozein ur-disoluzi ori.
Era berean, eosina eta metileno urdina dituen agarra formulatutako hazkuntza-ingurunea da. Ez da lagin bati metileno urdin hutsa gehituz egindako portaobjektuko tindaketa bat. Irudiak lortzeko beste helburu bat baduzu, alderatu mikroskopiarako metileno urdinaren alternatibak.
Hasiberrientzako mikroskopio-kit batekin, hasi haren dokumentatutako hezkuntza-metodoarekin, prestakin ezagunekin eta zehaztutako erreaktiboarekin. Botila batek etiketa galdu badu edo ezin bada haren osaera zehaztu, ordezkatu dokumentatutako erreaktibo egokiarekin. Erabili begi-babesa eta benetako formulaziorako emandako manipulazio-jarraibideak. Giza materialak eta ingurumen-lagin ezezagunek irakaskuntza-laborategiko laginak manipulatzeko eta deuseztatzeko prozedurak behar dituzte; tindatzeak ez ditu prozedura horiek ordezkatzen.
Idatzi behaketa ondorioa baino lehen
“Objektu urdin obalatuak multzotan” irudi baten deskribapen justifikagarria da. “Infekzio jakin bat” esateko, irudiak eman ez duen ebidentzia behar da. Koadernoan, bereizita jaso laginaren jatorria, prestaketa, tindaketa-erreakzioa eta identifikazio-metodoa. Bereizketa horrek erabilgarri egiten du ikasgelako irudi sinple bat, eta mikrografia erakargarri bati babestu ezin duen baieztapenik egoztea saihesten du.