নিবন্ধ
মিথিলিন ব্লু স্টেইনিং: মাইক্রোস্কোপি পদ্ধতি এবং বাস্তব-চিত্র অ্যাটলাস
মিথিলিন ব্লু স্টেইনিং উজ্জ্বল-ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপিতে সাধারণত অস্পষ্ট সেলুলার বৈশিষ্ট্যগুলিকে আরও সহজে আলাদা করে দেখতে সাহায্য করে। এটি শিক্ষার্থীদের গালের কোষের নিউক্লিয়াস খুঁজে পেতে বা অণুজীবের আকৃতি ও বিন্যাস পরীক্ষা করতে সহায়তা করতে পারে। তবে একটি নীল বস্তু কেবল একটি পর্যবেক্ষণ। জীবের নাম নির্ধারণ, পরিমাপ করা এবং এটি রোগ নির্দেশ করে কিনা সিদ্ধান্ত নেওয়া আলাদা কাজ।
কভারটি কনট্রাস্ট নীতিটি দেখায়। নিচের অ্যাটলাসে স্বাধীনভাবে নথিভুক্ত নমুনা থেকে নেওয়া বাস্তব ফটোগ্রাফ রয়েছে, যার মূল উৎস তথ্য সংরক্ষিত আছে।
মিথিলিন ব্লু কী প্রকাশ করে?
মিথিলিন ব্লু একটি বেসিক ডাই: এর রঙযুক্ত আয়ন ধনাত্মক চার্জ বহন করে। OpenStax নমুনা স্টেইনিং সম্পর্কে তাদের আলোচনায় ব্যাখ্যা করে, বেসিক ডাই ঋণাত্মক চার্জযুক্ত সেলুলার উপাদানের সঙ্গে পারস্পরিক ক্রিয়া করে এবং হালকা পটভূমির বিপরীতে কোষকে স্পষ্ট করে তুলতে পারে। উপযুক্ত প্রস্তুতিতে, মিথিলিন ব্লু নিউক্লিক-অ্যাসিড-সমৃদ্ধ অঞ্চল এবং অন্যান্য স্টেইন-বাঁধনকারী কাঠামোকে গুরুত্ব দিয়ে দেখায়।
একটি সাধারণ স্টেইনে একটি ডাই কনট্রাস্ট সরবরাহ করে। ফলে একাধিক জীব একইভাবে নীল দেখাতে পারে, যদিও তারা একই জীব নয়। প্রাথমিকভাবে কার্যকর প্রশ্নগুলি বর্ণনামূলক: বস্তুগুলি কি গোলাকার নাকি দীর্ঘায়িত, বিচ্ছিন্ন নাকি গুচ্ছবদ্ধ, সমানভাবে স্টেইনযুক্ত নাকি অভ্যন্তরীণভাবে পৃথক? রঙকে শ্রেণিবিন্যাসের ফল হিসেবে ব্যাখ্যা করার আগে সিম্পল স্টেইনিং এবং Gram staining-এর পার্থক্য দেখুন।
কনট্রাস্ট এবং রেজোলিউশন এক জিনিস নয়। কনট্রাস্ট কোনো বস্তুকে তার আশপাশ থেকে আলাদা করতে সাহায্য করে; রেজোলিউশন কাছাকাছি থাকা বিস্তারিত অংশ আলাদা করে। গাঢ় ছবি মানেই বেশি রেজোলিউশনের কাঠামো নয়। একইভাবে প্রতিটি গাঢ় দানাকে অঙ্গাণু হিসেবে চিহ্নিত করা উচিত নয়।
নেটিভ প্রস্তুতি, স্টেইন করা ওয়েট মাউন্ট এবং স্মিয়ার
আনস্টেইনড, বা নেটিভ, ওয়েট প্রস্তুতি অতিরিক্ত ডাই ছাড়া একটি দৃশ্য সংরক্ষণ করে, যদিও মূল পরিবেশ থেকে সরিয়ে নেওয়া হলেও নমুনায় পরিবর্তন আসে। স্টেইন করা ওয়েট মাউন্টে উপাদান তরলের মধ্যে কভারস্লিপের নিচে থাকা অবস্থায় রিএজেন্ট যোগ করা হয়। একটি ফিক্সড স্মিয়ার স্লাইডে উপাদান ছড়িয়ে দেয় এবং পরবর্তী প্রক্রিয়ার আগে নির্দিষ্ট ফিক্সেশন পদ্ধতি ব্যবহার করে। OpenStax-এর প্রস্তুতি সংক্রান্ত সারাংশ ওয়েট মাউন্টকে ফিক্সেশন থেকে আলাদা করে এবং ব্যাখ্যা করে কেন ফিক্স করা জীব আর স্বাভাবিক চলাচল বা বিপাকের দৃশ্য দেয় না।
এই প্রস্তুতিগুলি ভিন্ন প্রশ্নের উত্তর দেয়:
| Preparation | Useful observation | What the image cannot establish alone |
|---|---|---|
| Native wet mount | চলাচল, আকৃতি, স্বাভাবিকভাবে দৃশ্যমান উপাদান | শুধু গতি বা আকৃতির ভিত্তিতে পরিচয় |
| Stained wet mount | স্টেইন-বাঁধনকারী কাঠামো ও আশপাশের মধ্যে কনট্রাস্ট | রিএজেন্ট স্বাভাবিক শারীরবৃত্তীয় অবস্থা অপরিবর্তিত রেখেছে কিনা |
| Fixed, stained smear | নির্ধারিত প্রস্তুতির পর সংরক্ষিত গঠন | মূল জীবন্ত নমুনা কীভাবে আচরণ করেছিল |
| Named differential method | উপযুক্ত নিয়ন্ত্রণসহ নির্দিষ্ট স্টেইনিং প্রতিক্রিয়া | পদ্ধতির বিস্তৃত প্রমাণ ছাড়া প্রজাতির পরিচয় বা রোগ নির্ণয় |
শ্রেণিকক্ষের তুলনার জন্য, শিক্ষণ পদ্ধতি অনুযায়ী তৈরি আলাদাভাবে স্টেইন করা প্রস্তুতি পরীক্ষা করার আগে একটি আনস্টেইনড প্রস্তুতি নথিভুক্ত করুন। আলোকসজ্জা এবং ছবি ধারণের সেটিং তুলনাযোগ্য রাখুন। যদি দুটি ভিন্ন কোষের ছবি তোলা হয়, সেগুলিকে উদাহরণ হিসেবে বর্ণনা করুন, একটি কোষের আগে-পরে রেকর্ড হিসেবে নয়।
মাইক্রোস্কোপি অ্যাটলাস: তিনটি বাস্তব স্টেইন করা নমুনা
এই অ্যাটলাস তিনটি উন্মুক্ত লাইসেন্সপ্রাপ্ত মাইক্রোগ্রাফের মূল নির্বাচন এবং ব্যাখ্যা। উৎস লেখকেরা নমুনা ও স্টেইন শনাক্ত করেছেন। আমরা তাদের নমুনা স্বাধীনভাবে প্রমাণীকরণ করিনি। ছবিগুলি ক্ষতিহীন WebP রূপান্তর হিসেবে ক্রপ ছাড়া পুনরুৎপাদন করা হয়েছে, কোনো অতিরিক্ত বৈশিষ্ট্য বা রঙ পরিবর্তন ছাড়া।
প্লেট ১: মানব গালের কোষ
নমুনা: মানব গালের কোষ। স্টেইন: মিথিলিন ব্লু। ম্যাগনিফিকেশন: 400×, ফটোগ্রাফার দ্বারা উল্লেখিত। স্কেল বার: অনুপলব্ধ; উৎস কোনো ক্যালিব্রেটেড পিক্সেল আকার সরবরাহ করে না। Fritzmann2002-এর 2017 সালের ছবি, Human Cheek Cells (Methylene Blue Stain) থেকে, লাইসেন্সপ্রাপ্ত CC BY-SA 4.0-এ। এই পুনরুৎপাদনে সেই লাইসেন্স বজায় রাখা হয়েছে।
.jpg){kind=link}
একটি বিচ্ছিন্ন কোষ দিয়ে শুরু করুন: চারপাশের নীল সাইটোপ্লাজম থেকে এর গাঢ় নিউক্লিয়াস সহজে আলাদা করা যায়। এরপর নিচের একে অপরের উপর থাকা কোষগুলি দেখুন। ওভারল্যাপ সীমানা অনুসরণ করা কঠিন করে এবং স্থানীয়ভাবে আরও গাঢ় অঞ্চল তৈরি করতে পারে। এই প্লেটটি সীমানা অনুসরণ করার অনুশীলনের জন্য ব্যবহার করুন, প্রতিটি গাঢ় অংশকে নিউক্লিয়াস হিসেবে গণনা করার জন্য নয়। গালের কোষ পর্যবেক্ষণ নির্দেশিকা নমুনা-নির্দিষ্ট অনুশীলনটি আরও ব্যাখ্যা করে।
প্লেট ২: পেঁয়াজের কোষ
নমুনা: পেঁয়াজের কোষ, উৎস অনুযায়ী শনাক্ত। স্টেইন: মিথিলিন ব্লু। ম্যাগনিফিকেশন: মূল ফাইলের নামে “200x” দেখা যায়; এটি স্বাধীনভাবে যাচাই করা হয়নি। স্কেল বার: অনুপলব্ধ; কোনো ক্যালিব্রেশন সরবরাহ করা হয়নি। Alvy16-এর 2019 সালের ছবি, Onion cell 200x থেকে, লাইসেন্সপ্রাপ্ত CC BY 4.0-এ।
দীর্ঘায়িত অংশগুলি একটি সংগঠিত স্তর তৈরি করে। তাদের দীর্ঘ যৌথ সীমানার সঙ্গে প্লেট ১-এর অনিয়মিত সীমানাগুলি তুলনা করুন। গাঢ় দৃশ্যমান উপাদান এবং অসম ক্ষেত্রের উজ্জ্বলতাও লক্ষ্য করুন। ছবিটি প্রতিটি গাঢ় জমার পরিচয় নির্ধারণ করে না। এটি দেখায় কেন একটি কার্যকর পর্যবেক্ষণ রেকর্ডে রঙ গ্রহণকারী সবকিছুকে নাম দেওয়ার পরিবর্তে আর্টিফ্যাক্ট এবং অনিশ্চয়তা অন্তর্ভুক্ত করা উচিত।
প্লেট ৩: উৎস অনুযায়ী Candida spp. হিসেবে শনাক্ত ইস্ট
নমুনা: ফটোগ্রাফারের মতে Candida spp.। স্টেইন: মিথিলিন ব্লু দিয়ে সাধারণ পজিটিভ স্টেইনিং। ম্যাগনিফিকেশন: অনুপলব্ধ। স্কেল বার: অনুপলব্ধ; কোনো ক্যালিব্রেটেড পিক্সেল আকার সরবরাহ করা হয়নি। Marta, Wikimedia ব্যবহারকারী Martunia.g-এর 2021 সালের ছবি, Positive staining with methylene blue 2 থেকে, লাইসেন্সপ্রাপ্ত CC BY 4.0-এ।
ঘন নীল গুচ্ছগুলির সঙ্গে কম ঘন প্রান্তের তুলনা করুন। যেখানে বস্তুগুলি কম ওভারল্যাপ করে সেখানে পৃথক সীমানা অনুসরণ করা সহজ। Candida নামটি উৎস রেকর্ড থেকে এসেছে, এই ছবির উপর সম্পাদিত প্রজাতি শনাক্তকরণ থেকে নয়। এই প্লেট কোনো জীবন্ততা ফলাফলও সরবরাহ করে না। ইস্টের জীবন্ততা এবং শ্বসন পরীক্ষা এর জন্য নিজস্ব শর্ত, নিয়ন্ত্রণ এবং ব্যাখ্যা প্রয়োজন।
স্কেল সঠিকভাবে পড়া
এই প্লেটগুলি মাইক্রোমিটারে পরিমাপ বা প্লেটগুলির মধ্যে প্রকৃত কোষের আকার তুলনার জন্য নয়। উল্লেখিত ম্যাগনিফিকেশন অনুপস্থিত ক্যামেরা ক্যালিব্রেশন পুনরুদ্ধার করে না। ছবির প্রদর্শন আকার পরিবর্তন করলে তার আপাত বড় হওয়ার মাত্রা পরিবর্তিত হয়।
নিজস্ব ছবির জন্য, পরিচিত স্ট্যান্ডার্ড এবং প্রাসঙ্গিক অপটিক্যাল সেটআপ ব্যবহার করে একটি পরিমাপ ক্যালিব্রেশন স্থাপন করুন। Nikon-এর মাইক্রোমেট্রি নির্দেশিকা ব্যাখ্যা করে কীভাবে একটি স্টেজ মাইক্রোমিটার ইচ্ছামতো ছবি বা রেটিকল বিভাজনকে বাস্তব দৈর্ঘ্যে রূপান্তর করে। অবজেক্টিভ, ক্যামেরা কনফিগারেশন এবং ক্যালিব্রেশন নথিভুক্ত করুন এবং সেই তথ্য থেকে একটি স্কেল বার যোগ করুন। পাঠ্যবইয়ের গড় কোষ আকার থেকে কোনো বার অনুমান করবেন না।
বোতলটি কি পদ্ধতির সঙ্গে মেলে?
মিথিলিন ব্লু লেখা একটি বোতল সম্পূর্ণ ল্যাবরেটরি স্পেসিফিকেশন নয়। এর ঘনত্ব এবং একক, দ্রাবক, অতিরিক্ত উপাদান, নির্ধারিত ব্যবহার, ব্যাচ ডকুমেন্টেশন এবং নির্দেশনা পরীক্ষা করুন। একটি রিএজেন্টের সেফটি ডেটা শিট ঝুঁকি বর্ণনা করে; পদ্ধতির নির্দেশনা নির্ধারিত প্রস্তুতির জন্য এটি কীভাবে ব্যবহার করতে হবে তা নির্ধারণ করে।
একটি নির্দিষ্ট উদাহরণ হলো Merck's Löffler's methylene blue solution। প্রস্তুতকারক এটিকে মাইক্রোস্কোপি রিএজেন্ট হিসেবে শনাক্ত করে এবং অ্যাসিড-ফাস্ট স্টেইনিংয়ে কাউন্টারস্টেইন হিসেবে এর ভূমিকা বর্ণনা করে। এর তালিকাভুক্ত দাহ্যতাও দেখায় কেন “একটি নীল তরল” হ্যান্ডলিং বা উত্তাপ পরিকল্পনার জন্য পর্যাপ্ত তথ্য নয়। এই বৈশিষ্ট্যগুলি ওই ফর্মুলেশনের ক্ষেত্রে প্রযোজ্য, প্রতিটি জলীয় মিথিলিন ব্লু দ্রবণের ক্ষেত্রে স্বয়ংক্রিয়ভাবে নয়।
একইভাবে, eosin methylene blue agar একটি প্রস্তুতকৃত কালচার মিডিয়াম। এটি সাধারণ মিথিলিন ব্লু যোগ করে তৈরি কোনো স্লাইড স্টেইন নয়। ভিন্ন ইমেজিং উদ্দেশ্যের জন্য মাইক্রোস্কোপির জন্য মিথিলিন ব্লুর বিকল্প তুলনা করুন।
একটি প্রাথমিক মাইক্রোস্কোপ কিটের জন্য, এর নথিভুক্ত শিক্ষামূলক পদ্ধতি, পরিচিত প্রস্তুত স্লাইড এবং নির্ধারিত রিএজেন্ট দিয়ে শুরু করুন। কোনো বোতলের লেবেল হারিয়ে গেলে বা এর গঠন নির্ধারণ করা না গেলে, উপযুক্ত নথিভুক্ত রিএজেন্ট দিয়ে তা প্রতিস্থাপন করুন। প্রকৃত ফর্মুলেশনের জন্য সরবরাহ করা চোখের সুরক্ষা এবং হ্যান্ডলিং নির্দেশনা ব্যবহার করুন। মানব উপাদান এবং অজানা পরিবেশগত নমুনার জন্য শিক্ষণ ল্যাবরেটরির নমুনা-হ্যান্ডলিং ও নিষ্পত্তি পদ্ধতি প্রয়োজন; স্টেইনিং সেই পদ্ধতির বিকল্প নয়।
সিদ্ধান্তের আগে পর্যবেক্ষণ লিখুন
“গুচ্ছ আকারে নীল ডিম্বাকার বস্তু” একটি ছবির জন্য সমর্থনযোগ্য বর্ণনা। “একটি নির্দিষ্ট সংক্রমণ” এমন প্রমাণ প্রয়োজন যা ছবি সরবরাহ করেনি। নমুনার উৎস, প্রস্তুতি, স্টেইনিং প্রতিক্রিয়া এবং শনাক্তকরণ পদ্ধতিকে নোটবুকে আলাদা রাখুন। এই পার্থক্য একটি সাধারণ শ্রেণিকক্ষের ছবিকে কার্যকর করে এবং একটি আকর্ষণীয় মাইক্রোগ্রাফকে এমন দাবি বহন করা থেকে রোধ করে যা এটি সমর্থন করতে পারে না।