Xanh methylen và bệnh đa xơ cứng: nghiên cứu trên động vật đã kiểm tra điều gì

Khi tìm kiếm xanh methylen cho bệnh đa xơ cứng (MS), bạn sẽ thấy những bài báo có vẻ cùng trả lời một câu hỏi. Nhưng thực tế không phải vậy. Một bài báo cho chuột mắc bệnh dùng xanh methylen như một biện pháp điều trị. Bài còn lại không điều trị bất kỳ động vật nào bằng chất này. Nghiên cứu đó dùng xanh methylen làm thuốc nhuộm màu xanh trên các lát cắt tủy sống mỏng để nhà nghiên cứu bệnh học có thể quan sát myelin dưới kính hiển vi.

Đây là điểm mấu chốt của toàn bộ bài viết. Chất nhuộm này có hai vai trò trong sinh học, và hai vai trò ấy không có gì chung ngoài việc dùng cùng một chất trong lọ. Với vai trò ứng viên thuốc, chất này được đưa vào động vật sống và câu hỏi là bệnh có thay đổi hay không. Với vai trò thuốc nhuộm, nó được áp dụng lên mô đã chết và được cố định sau thí nghiệm, với câu hỏi là mô trông như thế nào. Nếu bỏ qua sự khác biệt đó, bạn sẽ đọc phần phương pháp nghiên cứu bệnh học như thể đó là kết quả điều trị.

EAE là gì, giải thích đơn giản

Viêm não tủy tự miễn thực nghiệm, thường được viết tắt là EAE, là mô hình động vật tiêu chuẩn dùng để mô phỏng một số khía cạnh của bệnh đa xơ cứng. Nhà nghiên cứu gây miễn dịch cho một con chuột có tính cảm thụ bằng một đoạn protein myelin cùng chất bổ trợ mạnh. Sau đó, hệ miễn dịch tấn công hệ thần kinh trung ương của chính con vật. Chuột xuất hiện tình trạng yếu lan từ dưới lên, dễ chấm điểm trên thang từ 0 đến 5, từ đuôi mềm rũ đến liệt chi sau.

Sự thuận tiện khi chấm điểm này giải thích vì sao EAE được sử dụng phổ biến, đồng thời cũng giải thích vì sao mô hình này có thể gây hiểu lầm. MS ở người xuất hiện tự phát, liên quan đến một tập hợp đích miễn dịch rộng hơn và ít được xác định rõ hơn, đồng thời gây các triệu chứng về thị giác, cảm giác, nhận thức, tiểu não và vận động trong diễn tiến tái phát hoặc tiến triển. EAE tái hiện một số cơ chế chọn lọc như viêm, mất myelin và tổn thương sợi trục trong điều kiện được kiểm soát. Nó không tái hiện MS ở quy mô thu nhỏ. Độc giả muốn nắm khung kiến thức chung có thể xem lại cách xanh methylen được cho là tác động ở cấp độ tế bào trước khi đánh giá bất kỳ tuyên bố nào về một bệnh cụ thể.

Hai bài báo dưới đây cũng sử dụng các kháng nguyên EAE khác nhau, và điều này rất quan trọng. Nghiên cứu điều trị gây bệnh bằng MOG35-55, một peptide ngắn từ glycoprotein myelin của tế bào ít nhánh. Nghiên cứu bệnh học gây bệnh bằng MP4, một protein dung hợp từ các đoạn protein cơ bản của myelin và protein proteolipid. Việc lựa chọn dòng chuột và kháng nguyên làm thay đổi vị trí xuất hiện tổn thương cũng như đặc điểm của phản ứng viêm, nên hai nghiên cứu này không phải hai lần thực hiện cùng một thí nghiệm.

Sơ đồ: từ mô hình đến câu hỏi và giới hạn

Hãy giữ bảng này để tiện đối chiếu. Đây là bảng tham chiếu nền tảng cho bài viết. Mỗi hàng nêu câu hỏi lâm sàng mà mô hình có thể giải đáp, những gì thực sự được đo lường và giới hạn khi suy rộng sang người.

Bất kỳ ai muốn kiểm tra một tiêu đề tiếp theo đều có thể dùng lại các cột này với sự hỗ trợ từ cách đọc nghiên cứu tiền lâm sàng: hỏi về loài và kháng nguyên, vai trò của hợp chất, các tiêu chí đánh giá, và liệu kết quả phản ánh diễn tiến bệnh hay chỉ là hình ảnh mô tại một thời điểm.

Kết quả điều trị: việc dùng chất này đã thay đổi điều gì

Nghiên cứu điều trị năm 2016 trên Journal of Neuroimmunology sử dụng chuột cái C57BL/6, khoảng 8 đến 10 tuần tuổi, được gây miễn dịch bằng 250 microgam MOG35-55 cho mỗi con. Sau khi gây bệnh, các động vật EAE được phân ngẫu nhiên vào nhóm xanh methylen hoặc nhóm EAE không điều trị, và điểm lâm sàng được theo dõi đến khoảng ngày 30.

Điểm lâm sàng ở chuột được điều trị thấp hơn có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng EAE từ ngày 15 đến ngày 30, với P nhỏ hơn 0.01. Phân tích tủy sống cũng cho kết quả cùng chiều: động vật được điều trị có ít thâm nhiễm viêm hơn, ít mất myelin hơn và ít mất sợi trục hơn.

Điểm đặc biệt là bộ chỉ dấu tín hiệu. Điều trị làm tăng hoạt hóa AMPK và biểu hiện SIRT1, đồng thời ức chế hoạt hóa NF-kB, một yếu tố điều khiển trung tâm của phản ứng viêm. Về miễn dịch thích ứng, điều trị làm giảm đáp ứng Th17 và tăng cường đáp ứng Treg. Vì vậy, chuỗi tác động được đề xuất là: xanh methylen tác động đến AMPK và SIRT1, làm giảm tín hiệu NF-kB, dẫn đến chuyển dịch từ Th17 gây viêm sang Treg điều hòa, từ đó giảm tổn thương mô và giảm điểm lâm sàng.

Chuỗi đó là một cách diễn giải, không phải một trình tự nhân quả đã được chứng minh. Nghiên cứu cho thấy việc dùng thuốc, thay đổi tín hiệu và cải thiện bệnh diễn ra đồng thời. Nghiên cứu không chứng minh rằng AMPK và SIRT1 chịu trách nhiệm cho toàn bộ lợi ích, và phần văn bản được lập chỉ mục công khai không trình bày đủ rõ liều chính xác tính bằng miligam trên kilôgam, đường dùng, ngày bắt đầu hoặc thời gian dùng để có thể tái lập phác đồ chỉ từ bản tóm tắt. Hãy coi mọi con số liều dùng được trích từ bài báo này trên một trang bán hàng là chưa được xác minh, trừ khi trang đó dẫn phần phương pháp trong toàn văn. Nguồn bằng chứng rộng hơn về xanh methylen ở người là nơi cần kiểm tra xem tín hiệu miễn dịch ban đầu này có bao giờ phát triển thành dữ liệu lâm sàng hay không.

Kết quả bệnh học: mô cho thấy điều gì trong sáu tháng

Nghiên cứu MP4 năm 2015 trên PLoS ONE sử dụng chuột cái C57BL/6 được gây miễn dịch bằng 200 microgam MP4 trong chất bổ trợ Freund hoàn chỉnh, kèm độc tố ho gà vào ngày gây miễn dịch và một lần nữa sau 48 giờ. Không động vật nào được dùng xanh methylen như một loại thuốc. Sau khi cố định và đúc khối mô, các lát cắt ngang tủy sống dày một micromét được nhuộm bằng xanh methylen để quan sát bằng kính hiển vi quang học; bó trước bên được quan sát bằng kính hiển vi điện tử để xem chi tiết hơn.

Mô được lấy mẫu ở ba giai đoạn: đỉnh cấp tính với 7 con chuột, ba tháng sau khởi phát với 5 con chuột và sáu tháng sau khởi phát với 10 con chuột. Điểm lâm sàng trung bình ở các giai đoạn này gần như giống nhau, khoảng 1.7 đến 1.8 trên thang từ 0 đến 5. Nhưng mô cho thấy một diễn biến khác. Mật độ sợi chỉ bị tổn thương myelin tăng từ khoảng 569,000 sợi trên mỗi milimét vuông ở đỉnh cấp tính lên khoảng 1,496,000 ở thời điểm sáu tháng; sự khác biệt giữa giai đoạn cấp tính và dài hạn có ý nghĩa thống kê với P bằng 0.027. Tổn thương kết hợp cả myelin và sợi trục tăng khoảng gấp đôi sau sáu tháng. Các sợi đang tái tạo bao myelin vẫn dưới một phần trăm ở mọi giai đoạn, một chi tiết khiến kỳ vọng về khả năng sửa chữa cần được nhìn nhận thận trọng.

Tổn thương sợi trục diễn biến theo hình chữ U: cao ở đỉnh cấp tính, thấp hơn ở ba tháng và cao nhất ở sáu tháng; tình trạng này tương quan với sưng ty thể và giảm khoảng cách giữa các sợi thần kinh trung gian. Người đánh giá không biết điểm lâm sàng và giai đoạn của mẫu, điều này củng cố nhận định rằng điểm lâm sàng đã phản ánh không đầy đủ tổn thương cấu trúc đang tiếp diễn.

Sự không tương xứng đó là đóng góp thực sự của nghiên cứu đối với độc giả tìm hiểu MS. Điểm khuyết tật ổn định không đồng nghĩa với mô ổn định. Điều này cũng cho thấy vì sao bài báo không thể hỗ trợ bất kỳ tuyên bố nào về điều trị MS bằng xanh methylen. Nghiên cứu kiểm tra ảnh hưởng của thời gian, không phải của điều trị.

Vì sao cả hai nghiên cứu đều không xác lập lợi ích ở bệnh nhân

Hãy xem mỗi bài báo là một nghiên cứu trả lời tốt một câu hỏi hẹp, nhưng hoàn toàn không trả lời được câu hỏi về bệnh nhân.

Thứ nhất, nguyên nhân khác nhau. EAE được chủ động gây ra bằng một kháng nguyên và chất bổ trợ xác định. MS ở người phát triển tự phát với phạm vi thành phần miễn dịch rộng hơn, bao gồm tế bào T, tế bào B, miễn dịch bẩm sinh và tế bào thần kinh đệm tại chỗ. Một hợp chất làm thay đổi đáp ứng thiên về MOG ở chuột không nhất thiết làm thay đổi đáp ứng rộng hơn đó ở người.

Thứ hai, kiểu hình khác nhau. Tình trạng yếu lan từ đuôi đến chi sau ở chuột là một chỉ dấu thuận tiện. Nó thu gọn tính không đồng nhất của MS ở người thành một con số về vận động. Các thuốc thường làm thay đổi điểm EAE ngắn hạn mà không thay đổi diễn tiến bệnh ở người; vì vậy, EAE là công cụ sàng lọc và nghiên cứu cơ chế, chứ không phải một phòng khám thu nhỏ.

Thứ ba, mức phơi nhiễm và thời điểm dùng vẫn chưa được làm rõ. Việc dùng liên tục từ sớm trong một thí nghiệm 30 ngày trên chuột không tương đương với dùng đường uống kéo dài ở người đã mắc bệnh, và không nghiên cứu nào đo nồng độ thuốc trong hệ thần kinh. Thiếu mối liên hệ đó, không có cơ sở nối một nồng độ trên đĩa thí nghiệm hoặc một liều ở chuột với một phác đồ cho người.

Thứ tư, hai bài báo không tái lập kết quả của nhau. Kháng nguyên khác nhau, câu hỏi khác nhau, tiêu chí đánh giá khác nhau, và trong một trường hợp hoàn toàn không có điều trị. Việc trích dẫn chúng cùng nhau như hai nghiên cứu điều trị MS có kết quả tích cực là một lỗi nhầm lẫn bản chất nghiên cứu.

Điều này có ý nghĩa gì với độc giả đang cân nhắc bằng chứng

Các bài báo này không xác lập một phác đồ xanh methylen cho MS. Nghiên cứu điều trị hỗ trợ việc tiếp tục nghiên cứu AMPK, SIRT1, NF-kB và cân bằng Th17 với Treg trong MOG EAE. Nghiên cứu bệnh học nhắc rằng tổn thương mô có thể tiến triển trong khi điểm số có vẻ không thay đổi, và rằng xanh methylen trong phần phương pháp đôi khi chỉ là một lọ thuốc nhuộm chứ không phải thuốc điều trị. Độc giả theo dõi các nghiên cứu đang diễn ra về bệnh đa xơ cứng nên ghi nhớ sự khác biệt giữa thuốc nhuộm và thuốc điều trị. Những vấn đề an toàn, bao gồm nguy cơ về máu và tương tác, cần được trao đổi với bác sĩ cùng với dữ liệu an toàn chung về xanh methylen trước khi bất kỳ ai hành động dựa trên các tiêu đề về kết quả phòng thí nghiệm.

Có thể tóm tắt kết luận trong một câu. Một nghiên cứu được trích dẫn đã cho chuột MOG EAE dùng xanh methylen và báo cáo bệnh nhẹ hơn cùng sự chuyển dịch miễn dịch theo hướng chống viêm, trong khi nghiên cứu còn lại không dùng thuốc điều trị nào và chỉ dùng xanh methylen để nhuộm tủy sống khi ghi nhận tổn thương myelin và sợi trục tích lũy trong sáu tháng, nên hai nghiên cứu này không xác lập rằng xanh methylen có lợi cho MS ở người.