Metil plavo nije metilensko plavo: CAS brojevi, strukture i primene

Dve boce stoje na laboratorijskom stolu. Na jednoj piše metil plavo. Na drugoj metilensko plavo. Umoran čitalac vidi istu reč dvaput. Hemijski gledano, to su dva različita molekula.

Ova zabuna u nazivima ima praktične posledice. Ako naručite pogrešnu boju, bojenje se odvija drugačije, redoks indikator se nikada ne pojavi ili formulacija sadrži jedinjenje koje niko nije validirao. Rešenje je jednostavno: uobičajeni naziv posmatrajte kao smernicu, a odluku donesite na osnovu identifikatora. Pre svega proverite CAS broj, Colour Index broj i hidratni oblik.

Kratak odgovor

Metilensko plavo je mala katjonska fenotiazinska boja, C.I. 52015, čiju osnovu čini kompaktan hromofor sa tri prstena i dve dimetilamino grupe. Metil plavo je velika anjonska triarilmetanska boja, C.I. 42780, izgrađena od sulfonovanih trifenilmetanskih jedinica. Pripadaju istoj porodici boja i dele deo naziva. Gotovo ništa drugo im nije zajedničko.

Toluidinsko plavo O bliže je metilenskom plavom. Obe su katjonske tiazinske boje, ali toluidinsko plavo O ima jednu amino grupu i metil-supstituent na prstenu na mestu gde metilensko plavo ima drugu dimetilamino grupu. Ta mala promena pomera njegov apsorpcioni maksimum i menja selektivnost bojenja, pa ni ove dve boje nisu međusobno zamenljive.

Tabela identiteta: proverite ova polja pri svakoj narudžbini

Nazivi u katalozima variraju. Dobavljači neprecizno koriste sinonime. Polja navedena u nastavku ne variraju, a kvalitetan sertifikat analize ih sadrži. PubChem navodi metilensko plavo kao metiltioninijum-hlorid, C.I. Basic Blue 9, što je polazna osnova za sve što sledi.

Dva detalja u ovoj tabeli uzrok su većine grešaka pri kupovini. Prvo, metilensko plavo ima nekoliko CAS brojeva za različite hidratne oblike, a 122965-43-9 označava nespecificirani hidrat, a ne konkretno trihidrat (7220-79-3), kako je navedeno u pregledu identifikatora u USP monografiji. Odmeravanje mase na osnovu pogrešne molarne mase neprimetno menja svaku kasnije izračunatu koncentraciju. Drugo, spisak sinonima jednog dobavljača za toluidinsko plavo O uključuje naziv Methylene Blue T50, što znači da pretraga kataloga samo po nazivu može dati sasvim pogrešnu boju.

Struktura objašnjava ponašanje

Zamislite dva hromofora jedan pored drugog i zabuna nestaje. Osnovu metilenskog plavog čini fenotiazinijumski sistem: tri kondenzovana prstena sa sumporom i azotom u srednjem prstenu i po jednom dimetilamino grupom na svakom kraju. Obojena vrsta je metiltioninijumski katjon sa hloridnim kontra-jonom. Mali, ravan, pozitivno naelektrisan i sklon vezivanju za negativno naelektrisane ćelijske komponente.

Metil plavo ima približno dva i po puta veću molarnu masu. Njegova boja potiče od trifenilmetanskog jezgra sa sulfonovanim anilino-fenil grupama, a isporučuje se kao dinatrijumova so. Te sulfonatne grupe čine ga anjonskom kiselom bojom, sa suprotnim naelektrisanjem i potpuno drugačijim afinitetima prema tkivima. Dok metilensko plavo ulazi u ćelije i učestvuje u redoks ciklusima, metil plavo služi za bojenje kolagena i vezivnog tkiva, kao i za bojenje gljivičnih preparata pod nazivom Cotton Blue, na primer u protokolima sa laktofenolnim pamučnim plavim. Zamena jedne boje drugom ne daje slabiju verziju istog rezultata. Ona daje drugačiji eksperiment.

Toluidinsko plavo O zadržava fenotiazinijumski skelet, pa je njegovo ponašanje slično ponašanju metilenskog plavog, ali nije isto. Njegov apsorpcioni maksimum je blizu 626 nm, naspram približno 660 do 665 nm kod metilenskog plavog, a njegovo metahromatsko bojenje kiselih komponenti tkiva (granula mastocita, mucina, hrskavice, struktura bogatih nukleinskim kiselinama) ima sopstvenu selektivnost opisanu u preglednim radovima iz histologije. Laboratorija koja metilensko plavo zameni sa TBO treba da očekuje pomerene spektre i drugačiji kontrast, a ne povoljnu zamenu.

Čemu svaka boja zapravo služi

Metilensko plavo je prvo korišćeno kao tekstilna boja, a zatim je našlo primenu u bakteriologiji, hematologiji i mikroskopiji, što je sažeto u literaturi o njegovoj istoriji. Njegova druga oblast primene je hemija: oksidovani oblik je plav, a redukovano leukometilensko plavo gotovo bezbojno, zbog čega služi kao redoks indikator. Treća oblast primene je farmacija. Metiltioninijum-hlorid je aktivna supstanca leka na recept PROVAYBLUE, indikovanog za stečenu methemoglobinemiju, a upravo ta medicinska uloga podiže zahteve za čistoću znatno iznad kvaliteta potrebnog za bojenje ili tekstil. Članak Kako metilensko plavo deluje kao redoks boja objašnjava mehanizam na kojem se zasnivaju ove primene.

Metil plavo nikada nije prošlo taj put. Ono ostaje boja za papir, tekstil, kožu i mikroskopiju: sertifikovana boja za kolagen u postupcima bojenja vezivnog tkiva po Malloryju, zamena za brzo zeleno u varijantama trihromnog bojenja po Gomoriju i boja za gljive u mikologiji. Neki proizvodi sa metil plavim imaju pH-indikatorski opseg približno od 9.4 do 14. Ništa od toga ne čini ga redoks terapeutikom, niti ga ijedan sertifikat za bojenje može pretvoriti u takav preparat.

Toluidinsko plavo O prvenstveno je biološka boja sa metahromatskim svojstvima, koja se koristi u histologiji i mikrobiologiji, a zasebno i kao klinička vitalna boja koja pomaže u ocrtavanju sumnjivih oralnih lezija pre biopsije. Ono je pomoćno sredstvo za izbor mesta biopsije, a ne zamena za histopatologiju. Svako ko poredi toluidinsko plavo sa metilenskim plavim za dijagnostičku namenu ili izradu formulacije treba da uporedi spektre, ciljne komponente tkiva i dokumentaciju o kvalitetu, a ne nazive.

Slični nazivi koji dovode kupce u zabludu

Još tri naziva zaslužuju mesto na kontrolnoj listi za proveru. Novo metilensko plavo N (New Methylene Blue N) nije metilensko plavo. To je C.I. 52030 (CAS 1934-16-3), etilovani fenotiazin sa metil-grupama na prstenu, koji se koristi u histologiji i hematologiji, a metode bojenja novim metilenskim plavim pripadaju toj zasebnoj literaturi. Azure B je bliži: to je analog metilenskog plavog nastao jednom N-demetilacijom (CAS 531-55-5, C.I. 52010), koji je ujedno glavni metabolit metilenskog plavog i dokumentovana nečistoća u sirovini metilenskog plavog. Zato USP program povezuje referentni materijal metilenskog plavog sa standardom za Azure B. Njihov međusobni odnos i značaj profilisanja nečistoća obrađeni su u članku Azure B kao nečistoća i metabolit. Kristal violet, koji se ponekad prodaje pod starim nazivom gencijana violet, jeste triarilmetanska boja (CAS 548-62-9, C.I. 42555) koja uopšte nema tiazinski prsten.

Proverite identitet pre plaćanja

Pouzdana nabavna specifikacija navodi tačno hemijsko jedinjenje, CAS broj, C.I. broj, hidratni oblik i kvalitet, a zatim ih potvrđuje poređenjem sa sertifikatom analize, umesto sa prednjom etiketom. Apsorpcioni maksimum je brza nezavisna provera: metilensko plavo blizu 665 nm, toluidinsko plavo O blizu 626 nm, metil plavo blizu 595 do 605 nm u propisanim kiselim uslovima. Maksimum na pogrešnom mestu znači da je boja pogrešna, bez obzira na to šta piše na boci.

Dokumentacija o kvalitetu odgovara na drugačije pitanje od hemijskog identiteta. Sertifikacija koju sprovodi Biological Stain Commission ispituje sadržaj boje i svojstva bojenja određene serije, što je važno kada je cilj ponovljivost bojenja. Usaglašenost sa USP obuhvata farmaceutski identitet, čistoću, organske nečistoće, rezidualne rastvarače, elementarne nečistoće i mikrobiološku kontrolu, što je važno kada je materijal namenjen konzumiranju. Ova dva programa imaju delimično zajedničku svrhu, ali se razlikuju po sadržaju, pa jedan sertifikat ne može zameniti drugi.

Tu kvalitet pri kupovini dobija konkretno značenje. Visoka čistoća je važna zato što je metilensko plavo koje nije usaglašeno sa USP obično tekstilnog kvaliteta, sa nečistoćama poput Azure B, teških metala ili rezidualnih rastvarača, koje nijedan protokol bojenja ne proverava. Većina prodavaca koji tvrde da su usaglašeni sa USP ispituje samo teške metale i proglašava posao završenim. Potpuna usaglašenost obuhvata identitet, određivanje sadržaja, organske nečistoće, rezidualne rastvarače, elementarne nečistoće, ostatak nakon žarenja, mikrobiološke granice i bakterijske endotoksine, a članak Kako izabrati metilensko plavo farmaceutskog kvaliteta vodi kroz tumačenje te dokumentacije. Blupreme sarađuje sa farmaceutskim proizvođačem metilenskog plavog, sprovodi ispitivanja prema celokupnoj USP specifikaciji i objavljuje kompletan COA, što je praktično značenje dosledne provere identiteta koju ovaj članak preporučuje.