Bluja e metilenit dhe skleroza multiple: çfarë testuan studimet te kafshët

Kërkoni për blunë e metilenit për MS dhe do të gjeni punime që duket sikur i përgjigjen së njëjtës pyetje. Nuk është kështu. Njëri punim u dha blu metileni minjve të sëmurë si trajtim. Tjetri nuk trajtoi asnjë kafshë me të. Ai e përdori blunë e metilenit si ngjyrues blu në prerje të holla të palcës kurrizore, që një patolog të mund të shihte mielinën në mikroskop.

Ky është koncepti mbi të cilin mbështetet i gjithë artikulli. Ngjyruesi ka dy role në biologji, të cilat nuk kanë asgjë të përbashkët përveç shishes. Si kandidat për bar, ai i jepet në doza një kafshe të gjallë dhe pyetja është nëse sëmundja ndryshon. Si ngjyrues, ai aplikohet pas eksperimentit mbi ind të vdekur të fiksuar dhe pyetja është si dukej indi. Nëse nuk e dalloni këtë ndryshim, do ta lexoni një seksion të metodave patologjike sikur të ishte një rezultat trajtimi.

Çfarë është EAE, me fjalë të thjeshta

Encefalomieliti autoimun eksperimental, zakonisht i shkurtuar si EAE, është modeli standard te kafshët për disa aspekte të sklerozës multiple. Një studiues imunizon një mi të ndjeshëm ndaj sëmundjes me një fragment të një proteine të mielinës, së bashku me një adjuvant të fortë. Sistemi imunitar më pas sulmon sistemin nervor qendror të vetë kafshës. Miu zhvillon dobësi që përparon nga poshtë lart dhe që vlerësohet lehtësisht në një shkallë nga 0 në 5, nga bishti i flashkët deri te paraliza e gjymtyrëve të pasme.

Kjo lehtësi e vlerësimit shpjegon pse EAE është i përdorur gjerësisht, por edhe pse mund të çojë në përfundime të gabuara. MS te njerëzit shfaqet vetvetiu, përfshin një grup shënjestrash më të gjerë dhe më pak të përcaktuar, dhe prodhon simptoma optike, shqisore, njohëse, cerebelare dhe motorike, me ecuri me rikthime ose progresive. EAE riprodhon mekanizma të përzgjedhur, si inflamacioni, demielinizimi dhe dëmtimi i aksoneve, në kushte të kontrolluara. Ai nuk riprodhon MS në miniaturë. Lexuesit që duan kuadrin e përgjithshëm mund të shqyrtojnë se si mendohet se vepron bluja e metilenit në nivel qelizor, përpara se të gjykojnë ndonjë pretendim të veçantë për një sëmundje.

Dy punimet më poshtë përdorën gjithashtu antigjene të ndryshme për EAE, dhe kjo ka rëndësi. Studimi i trajtimit e induktoi sëmundjen me MOG35-55, një peptid të shkurtër nga glikoproteina e oligodendrociteve të mielinës. Studimi patologjik e induktoi sëmundjen me MP4, një bashkim segmentesh të proteinës bazike të mielinës dhe të proteinës proteolipidike. Zgjedhja e linjës së minjve dhe e antigjenit ndryshon vendin ku shfaqen lezionet dhe mënyrën si sillet inflamacioni, prandaj këto dy studime nuk janë dy përsëritje të të njëjtit eksperiment.

Harta: nga modeli te pyetja dhe kufijtë

Mbajeni këtë tabelë të hapur. Ajo është referenca bazë për këtë artikull. Çdo rresht tregon cilës pyetje klinike mund t’i përgjigjet modeli, çfarë u mat realisht dhe ku ndalet zbatimi i gjetjeve te njerëzit.

Kushdo që kontrollon titullin e radhës mund të përdorë të njëjtat kolona, me ndihmën e udhëzuesit si të lexoni studimet paraklinike: pyesni për specien dhe antigjenin, rolin e përbërësit, treguesit e vlerësimit dhe nëse rezultati përshkruan ecurinë e sëmundjes apo një pamje të indit në një çast të caktuar.

Rezultati i trajtimit: çfarë ndryshoi dhënia e dozave

Studimi i trajtimit i vitit 2016 në Journal of Neuroimmunology përdori minj femra C57BL/6, rreth 8 deri në 10 javë të vjetër, të imunizuar me 250 mikrogramë MOG35-55 për mi. Pas induktimit, kafshët me EAE u ndanë rastësisht në një grup që mori blu metileni ose në një grup me EAE të patrajtuar, dhe vlerësimet klinike u ndoqën deri afërsisht në ditën 30.

Vlerësimet klinike ishin dukshëm më të ulëta te minjtë e trajtuar sesa te kontrollet me EAE nga dita 15 deri në ditën 30, me P më të vogël se 0.01. Analiza e palcës kurrizore tregoi të njëjtën prirje, me më pak infiltrim inflamator, më pak demielinizim dhe më pak humbje aksonale te kafshët e trajtuara.

Pjesa dalluese ishte grupi i analizave të sinjalizimit. Trajtimi rriti aktivizimin e AMPK dhe shprehjen e SIRT1, si dhe frenoi aktivizimin e NF-kB, një rregullator qendror i inflamacionit. Në anën e imunitetit adaptiv, ai uli përgjigjen Th17 dhe forcoi përgjigjen Treg. Pra, zinxhiri i propozuar është: bluja e metilenit ndikon në AMPK dhe SIRT1, kjo ul sinjalizimin NF-kB, duke sjellë një zhvendosje nga Th17 inflamator drejt Treg rregullator, e më pas dëmtim më të lehtë të indeve dhe vlerësime më të ulëta.

Ky zinxhir është një interpretim, jo një sekuencë shkakësore e provuar. Studimi tregon se bari, ndryshimet e sinjalizimit dhe përmirësimi i sëmundjes ecin së bashku. Ai nuk provon se AMPK dhe SIRT1 ndërmjetësojnë të gjithë përfitimin, dhe teksti i indeksuar publikisht nuk e paraqet dozën e saktë në miligramë për kilogram, rrugën e administrimit, ditën e fillimit apo kohëzgjatjen me qartësi të mjaftueshme për ta riprodhuar skemën vetëm nga përmbledhja. Çdo shifër dozimi e cituar për këtë punim në një faqe shitjeje duhet trajtuar si e paverifikuar, përveçse nëse citon metodat nga teksti i plotë. Baza më e gjerë e provave te njerëzit për blunë e metilenit është vendi ku duhet kontrolluar nëse ky sinjal i hershëm imunitar u zhvillua ndonjëherë në të dhëna klinike.

Rezultati patologjik: çfarë treguan indet gjatë gjashtë muajve

Studimi me MP4 i vitit 2015 në PLoS ONE përdori minj femra C57BL/6 të imunizuar me 200 mikrogramë MP4 në adjuvantin e plotë të Freund-it, së bashku me toksinën e pertusisit në ditën e imunizimit dhe sërish 48 orë më vonë. Asnjë kafshë nuk mori blu metileni si bar. Pas fiksimit dhe përfshirjes në material mbështetës, prerjet tërthore të palcës kurrizore me trashësi një mikrometër u ngjyrosën me blu metileni për mikroskopi optike, ndërsa për hollësi më të imëta u përdor mikroskopia elektronike e traktit ventrolateral.

Mostrat e indeve u morën në tri faza: në kulmin akut me 7 minj, tre muaj pas fillimit me 5 minj dhe gjashtë muaj pas fillimit me 10 minj. Vlerësimet mesatare klinike në këto faza dukeshin pothuajse identike, afër 1.7 deri në 1.8 në shkallën nga 0 në 5. Indet tregonin një histori tjetër. Dëmtimi i izoluar i mielinës u rrit nga rreth 569,000 fibra për milimetër katror në kulmin akut në rreth 1,496,000 në gjashtë muaj, me dallim statistikisht domethënës në krahasimin midis fazës akute dhe asaj afatgjatë, me P të barabartë me 0.027. Dëmtimi i kombinuar i mielinës dhe aksoneve afërsisht u dyfishua deri në gjashtë muaj. Fibrat në proces rimielinizimi mbetën nën një për qind në çdo fazë, një hollësi që i bën më të përmbajtura shpresat për riparim.

Dëmtimi i aksoneve ndoqi një model në formë U-je: i lartë në kulmin akut, më i ulët në tre muaj dhe më i larti në gjashtë muaj. Ai lidhej me fryrjen e mitokondrive dhe me zvogëlimin e largësisë ndërmjet neurofilamenteve. Vlerësimi u krye pa njohur rezultatin klinik dhe fazën, çka e përforcon interpretimin se vlerësimet klinike nuk e pasqyronin plotësisht dëmtimin strukturor të vazhdueshëm.

Kjo mospërputhje është kontributi i vërtetë i studimit për një lexues të interesuar për MS. Një vlerësim i qëndrueshëm i paaftësisë nuk nënkuptonte inde të qëndrueshme. Ajo tregon gjithashtu pse ky punim nuk mund të mbështesë asnjë pretendim për trajtimin e MS me blu metileni. Ai testoi ndikimin e kohës, jo të trajtimit.

Pse asnjëri studim nuk vërteton përfitim te pacientët

Shiheni secilin punim si një përgjigje të mirë ndaj një pyetjeje të ngushtë, por jo si përgjigje ndaj pyetjes për pacientët.

Së pari, shkaku ndryshon. EAE shkaktohet qëllimisht me një antigjen dhe adjuvant të përcaktuar. MS te njerëzit zhvillohet spontanisht, me një repertor më të gjerë imunitar që përfshin qelizat T, qelizat B, imunitetin e lindur dhe qelizat gliale rezidente. Një përbërës që ndryshon një përgjigje të orientuar nga MOG te një mi nuk e ndryshon domosdoshmërisht atë përgjigje më të gjerë te njerëzit.

Së dyti, fenotipi ndryshon. Dobësia te miu që përparon nga bishti drejt gjymtyrëve të pasme është një tregues i lehtë për t’u matur. Ai e ngjesh heterogjenitetin e MS te njerëzit në një numër të vetëm motorik. Barnat shpesh ndryshojnë vlerësimet afatshkurtra të EAE pa ndryshuar ecurinë te njerëzit; prandaj EAE është një mjet për shqyrtim paraprak dhe studim mekanizmash, jo një klinikë në miniaturë.

Së treti, ekspozimi dhe koha e administrimit mbeten të paqarta. Dhënia e vazhdueshme e dozave në fazat e hershme të një eksperimenti 30-ditor te minjtë nuk është e njëjtë me përdorimin kronik nga goja te një person me sëmundje tashmë të zhvilluar, dhe asnjëri studim nuk mati nivelet e barit në sistemin nervor. Pa këtë lidhje, nuk ka urë nga një përqendrim në një pllakë laboratorike apo një dozë te një mi drejt një skeme përdorimi te njeriu.

Së katërti, dy punimet nuk e përsërisin njëri-tjetrin. Antigjene të ndryshme, pyetje të ndryshme, tregues vlerësimi të ndryshëm dhe, në njërin rast, asnjë trajtim. Citimi i tyre së bashku si dy studime pozitive të trajtimit të MS është një gabim kategorizimi.

Çfarë do të thotë kjo për lexuesit që peshojnë provat

Në këto punime nuk ka një protokoll të përcaktuar të blusë së metilenit për MS. Studimi i trajtimit mbështet kërkime të mëtejshme mbi AMPK, SIRT1, NF-kB dhe ekuilibrin Th17 ndaj Treg në EAE me MOG. Studimi patologjik na kujton se dëmtimi i indeve mund të përparojë ndërsa vlerësimet duken të pandryshuara, dhe se bluja e metilenit në një seksion metodash ndonjëherë nënkupton një kavanoz ngjyruesi, jo një dollap barnash. Lexuesit që ndjekin kërkimet e vazhdueshme për sklerozën multiple duhet ta mbajnë parasysh këtë dallim midis ngjyruesit dhe barit. Pyetjet për sigurinë, përfshirë rreziqet që lidhen me gjakun dhe ndërveprimet, duhen diskutuar me një mjek, së bashku me të dhënat e përgjithshme për sigurinë e blusë së metilenit, përpara se dikush të veprojë në bazë të titujve mbi gjetjet laboratorike.

Përfundimi mund të përmblidhet në një fjali. Njëri studim i cituar u dha blu metileni minjve me EAE të induktuar nga MOG dhe raportoi sëmundje më të lehtë me një zhvendosje imunitare anti-inflamatore, ndërsa studimi tjetër i cituar nuk administroi asnjë trajtim dhe e përdori blunë e metilenit vetëm për të ngjyrosur palcën kurrizore, duke dokumentuar gjashtë muaj grumbullimi të dëmtimit të mielinës dhe aksoneve; prandaj këto dy studime nuk vërtetojnë se bluja e metilenit ndihmon në MS te njerëzit.