Лабораторияда метилен көгүн аныктоо: инфракызыл спектрлер жана толуктоочу ыкмалар

Үч лаборатория бир эле көк порошокту алганын элестетиңиз. Биринчиси инфракызыл спектрин каттап, аны метилен көгү деп аныктайт. Экинчиси хроматография жүргүзүп, 0.4% Azure B бар экенин билдирет. Үчүнчүсү кристаллдарга рентген нурларын багыттап, дифракция аркылуу гидрат формасын аныктайт. Үчөө тең туура, бирок алардын эч бири калган эки суроого жооп берген жок. Бир жыйынтык үчөөнө тең жооп катары кабыл алынганда түшүнбөстүк башталат.

Бул макала ошол суроолорду өз-өзүнчө карайт. Инфракызыл идентификациялоо эталондук стандарт менен салыштырып, молекулалык иденттүүлүктү аныктайт. Хроматография курамды аныктайт. Дифракция катуу фазадагы форманы аныктайт. Идентификациялык салыштыруудан ийгиликтүү өтүү тазалык сертификаты болуп саналбайт.

Инфракызыл идентификациялоо бир суроого жакшы жооп берет

Метилен көгүнүн фармакопеялык идентификациялык сыноосу — бул чокулардын текшерүү тизмеси эмес, спектрди стандарт менен салыштыруу. Метилен көгү боюнча USP монографиясынын алдын ала көрүнүшүндө Identification A бөлүмү ATR оптикасы же калий бромидинен жасалган таблетка менен жүргүзүлгөн инфракызыл спектроскопияны көрсөтөт. Үлгү менен стандарт бирдей шарттарда даярдалып, алардын спектрлери бирдей шарттарда катталышы керек; үлгүнүн спектри USP эталондук стандартынын спектрине туура келүүгө тийиш. Диагностикалык толкун сандарынын эч кандай туруктуу тизмеси чечимди аныктабайт. Чечим спектрлерди бири-биринин үстүнө коюп салыштыруудан чыгат.

Мындай ыкма метилен көгүнүн FTIR спектрлеринин өзгөчөлүктөрүн эске алат. Эң күчтүү белгилер спектрдин «манжа изи» аймагында жайгашат. Адабияттардагы чечмелөөлөр негизги конъюгацияланган шакек тилкесин туруктуу түрдө 1590–1600 cm-1 чамасына жайгаштырат; бул жерде ароматтык көмүртек-көмүртек жана көмүртек-азот байланыштарынын созулуу термелүүлөрү өз ара байланышат. 1490 жана 1390 cm-1 чамасындагы башка тилкелер шакектин, көмүртек-азот жана көмүртек-суутек байланыштарынын деформациялык термелүүлөрүн чагылдырат. 1355 жана 1330 cm-1 чамасындагы тилкелер диметиламин тобунун көмүртек-азот байланыштарына жана метил топторунун деформацияларына байланыштуу. 1225–1250 cm-1 чамасындагы белгилер гетероциклдик каркаска таандык, ал эми 1170–1130 жана 1066 cm-1 чамасындагы тилкелер көмүртек-күкүрт байланыштарынын термелүүлөрүн чагылдырат; ароматтык C-H ийилүү термелүүлөрү 880 cm-1 чамасында байкалат. Созулуу термелүүлөрү жогорураак жайгашат: ароматтык C-H болжол менен 3040 cm-1, ал эми N-метил C-H болжол менен 2900–3000 cm-1 аралыгында. Жарыяланган чечмелөөлөрдүн майда-чүйдөсү айырмаланат, анткени фенотиазиний каркасы өз ара байланышкан система катары термелет. Ошондуктан ар бир чечмелөө таблицасын жалгыз туура вариант катары эмес, жарыяланган чечмелөөлөрдүн бири катары кабыл алыңыз.

Үлгүнү даярдоонун эки таасирине көңүл буруу керек: алар боёктун өзүн өзгөртпөй туруп, метилен көгүнүн IR спектрлерин өзгөртөт. Биринчиден, гидратталган материалда 3300–3500 cm-1 чамасында кең O-H тилкеси жана 1630–1640 cm-1 чамасында суунун ийилүү термелүүлөрү көрүнөт; ар башка гидрат формалары «манжа изи» тилкелерин өлчөнө тургандай жылдырат. Экинчиден, KBr таблеткасынын матрицасы гигроскопиялуу: сиңген ным дал ушул суу аймактарында тилкелерди пайда кылып, үлгүдөгү гидраттык суудай көрүнүшү мүмкүн. ATR аркылуу өлчөө KBr матрицасын колдонбойт, бирок ATR интенсивдүүлүктөрү толкун санына жараша өзгөргөн кирүү тереңдигине көз каранды. Ошондуктан бир эле порошоктун ATR спектрин жана өткөрүү режиминдеги спектрин түздөн-түз бири-биринин үстүнө коюп салыштырууга болбойт. Практикалык эреже фармакопеялык талаптан келип чыгат: үлгү менен эталондун бир эле ыкма аркылуу катталган спектрлерин салыштырып, кайсы ыкма колдонулганын документтештириңиз. Бул спектрлердин негизинде жаткан катиондун, туздун жана гидраттардын химиясы тууралуу метилен көгүнүн түзүлүшү жана касиеттери боюнча маалымдамадан караңыз.

Аналитикалык ыкманы тандоо таблицасы

Бул таблица ыкманы тандоого жардам берет. Ар бир сапты окуп, ыкма кайсы суроого жооп берерин, талапка жооп берген жыйынтык эмнени ырастарын жана эмнелер далилденбей каларын билиңиз.

Эмне үчүн инфракызыл спектрдин дал келиши тазалык сертификаты эмес

Идентификациялык дал келүү башка боёк болуп чыгуу мүмкүнчүлүгүн четке кагат. Бирок ал үлгүнүн толук курамын аныктабайт. Үч чектөө өзгөчө маанилүү.

Биринчиден, түзүлүшү жакын заттар инфракызыл аймакта окшош көрүнөт. Azure B метилен көгүнөн бир гана метил тобу менен айырмаланат, ошондуктан анын спектри метилен көгүнүн спектрине абдан окшош. Бир нече пайыз Azure B камтыган аралашманын спектри да метилен көгүнүн эталондук спектри менен жакшы дал келет. Бул аралашманы табуу — хроматографиянын милдети; ал метилен көгүндөгү аралашмалар жана сыноо ыкмалары боюнча колдонмодо каралган.

Экинчиден, инфракызыл спектроскопия материалды бүтүндөй өлчөйт жана аз өлчөмдөгү компоненттерге сезгичтиги чектелүү. Түзүлүшү жакын боёктордун, калдык эриткичтердин же органикалык эмес калдыктардын аз өлчөмдөрү негизги тилкелердин астында жашырынат. Кошумча чокулардын жоктугу аралашмалар жок экенин ишенимдүү далилдебейт.

Үчүнчүдөн, салыштыруунун баары эталондук стандартка көз каранды. Бузулган, гидратталуудан спектри жылган же туура эмес колдонулган стандарт салыштыруунун негизин өзгөртөт. ATR менен алынган үлгү спектрин KBr эталону менен салыштыруу сыяктуу ыкмалардын дал келбеген айкалышы да ушундай таасир берет. Ар бир корутунду менен кошо стандарттын партиясын, колдонулган ыкманы жана даярдоо жолун каттаңыз.

Аралашмалар дагы бир эскертүүнү талап кылат. Негизинен дал келген, бирок чокулардын капталында ийинчелер же интенсивдүүлүктө өзгөчөлүктөр бар спектрди эскертүүлөр менен «өттү» деп эсептөөгө болбойт. Бул — идентификациялоодон мурун үлгүнүн компоненттерин бөлүү керектигинин белгиси.

Толуктоочу ыкмалар практикада

Метилен көгүн HPLC менен талдоо инфракызыл ыкма бере албаган курам тууралуу жоопту берет. Учурдагы фармакопеялык ыкма трифторуксус кислотасын камтыган суу-ацетонитрил градиенти менен фенил тибиндеги колонканы колдонот жана аныктоону көрүнүүчү жарык тилкесинде эмес, 246 nm толкун узундугунда жүргүзөт. Иденттүүлүк эталондук стандарт менен кармалуу убактысынын дал келиши аркылуу аныкталат; ошол эле салыштыруу сандык аныктоого да негиз болот. Органикалык аралашмаларга сыноодо Azure B өзүнүн эталондук материалы менен аныкталат: метилен көгүнүн салыштырмалуу кармалуу убактысы 1.0 болгондо, Azure B көрсөткүчү 0.8 чамасында болот. Эки чокунун ортосунда жогорку ажыратуу жөндөмү талап кылынат. Толкун узундугунун тандалышына көңүл буруңуз: деметилденүү катарында жутулуу акырындап кызыл аймакты көздөй жылат — болжол менен 600 nm жуткан тионинден Azure C, Azure A жана Azure B аркылуу болжол менен 670 nm жуткан метилен көгүнө чейин. Ошондуктан 660 nm чамасына коюлган детектор катардын компоненттерине бирдей жооп бербейт жана айрым гомологдордун өлчөмүн төмөн көрсөтөт. Керек болгондо бүт катардын курамын толук аныктоо ар бир талдануучу зат үчүн жарактуулугу ырасталган стандарттарды колдонгон C18 LC-MS/MS ыкмасы менен жүргүзүлүшү керек.

Порошоктук дифракция жогорудагы эки ыкма жок кылган же эске албаган катуу фаза тууралуу суроого жооп берет: хроматография үчүн порошокту эритүү кристалл тууралуу маалыматты жок кылат, ал эми молекулалык термелүүлөр алыскы тартиптеги жайгашууну эмес, байланыштарды чагылдырат. Дифракциялык көрүнүштөр гидрат фазаларын жана кристаллдуулукту айырмалайт; метилен көгү көпчүлүк материалдарга караганда мындай кылдат текшерүүгө көбүрөөк муктаж. Рагер жана анын кесиптештеринин катуу фаза боюнча изилдөөсү беш өзүнчө гидрат түзүлүшүн аныктаган: пентагидрат, эки дигидрат, моногидрат жана аралык гидрат. Мүнөздөлгөн формалардын арасынан чыныгы тригидрат табылган эмес. Бул жерде лабораториядагы иштетүү шарттары маанилүү: нымдуулук жана температура гидраттын туруктуулугун өзгөртөт, ал эми катуу майдалоо фазаны өзгөртүшү же кристаллдуулукту төмөндөтүшү мүмкүн. Ошондуктан салыштырмалуу нымдуулукту жана температураны көзөмөлдөп, документтештириңиз жана майдалоону мүмкүн болушунча азайтыңыз. Гидраттын этикеткада көрсөтүлүшү жана анын таразага тартылган массага таасири метилен көгүнүн гидрат формалары жана этикеткалоо макаласында кеңири талкууланат.

UV-Vis жутулуу кошумча ролду аткарат. Белгилүү максимумдар эритменин күтүлгөн жүрүм-турумун ырастап, концентрацияны аныктоого мүмкүндүк берет. Бирок күтүлгөн толкун узундугунда жарык жуткан көк эритме метилен көгүнө туура келгени менен, анын дал өзү экенин далилдебейт, анткени түзүлүшү жакын боёктор жакын толкун узундуктарында жутат.

Сатып алардан мурун эмнени сураш керек

Бул айырмачылыктарды сатып алууда берилүүчү суроолорго айландырыңыз. Кайсы партия сыналганын, иденттүүлүк кайсы ыкма менен аныкталганын, HPLC аркылуу аралашмаларга сыноодо Azure B эталондук материалы колдонулганын жана гидрат формасы аныкталганын же жөн гана болжолдонгонун сураңыз. Эң башкысы, сертификат толук спецификацияны камтыйбы же тандалган сыноолорду ганабы — ушуну тактаңыз. Фармакопеялык талаптарга шайкештикти билдирген көптөгөн сатуучулар оор металлдарды гана текшеришет. Натыйжада иденттүүлүк, негизги заттын өлчөмү, органикалык аралашмалар, эриткичтер жана микробдук көрсөткүчтөр тууралуу суроолор жоопсуз калат.

Blupreme метилен көгүн өндүргөн фармацевтикалык ишкана менен өнөктөштүктө USP спецификациясын толугу менен текшерет. Бул иденттүүлүктү, тазалыкты, органикалык аралашмаларды, калдык эриткичтерди, элементтик аралашмаларды, күйгүзүүдөн калган калдыкты, микробдук чектерди жана бактериялык эндотоксиндерди камтыйт. Ар бир партиянын жалпыга ачык талдоо сертификаты Blupreme сапатты текшерүү барагында жарыяланат. Ошентип, сандык аныктоонун негизин жана аралашмалардын жыйынтыктарын болжолдобостон, түз окууга болот. 100% жакын жыйынтыктарда да эсептөөнүн негизи көрсөтүлүшү керек; бул 100 пайыздан жогору сандык аныктоо жыйынтыгы боюнча колдонмодо түшүндүрүлөт. Идентификациялык дал келүү текшерүүнү баштайт. Толук документтер аны жыйынтыктайт.