Metileno urdina eta esklerosi anizkoitza: animaliekin egindako ikerketek zer aztertu zuten

Esklerosi anizkoitzerako metileno urdinari buruz bilatzen baduzu, galdera berari erantzuten diotela diruditen artikuluak aurkituko dituzu. Ez da hala. Artikulu batean, metileno urdina eman zieten sagu gaixoei tratamendu gisa. Bestean, ez zuten inoiz animalia bakar bat ere harekin tratatu. Metileno urdina tindagai urdin gisa erabili zuten bizkarrezur-muinaren ebaki meheetan, patologoak mielina mikroskopioan ikusi ahal izateko.

Horixe da artikulu osoaren oinarrian dagoen ideia. Tindagaiak bi eginkizun ditu biologian, eta ez dute ezer partekatzen, botila izan ezik. Botika hautagai gisa, animalia bizi bati ematen zaio, eta galdera da ea gaixotasuna aldatzen den. Tindagai gisa, esperimentua amaitu ondoren ehun hil eta finkatuari aplikatzen zaio, eta galdera da zer itxura zuen ehunak. Bereizketa hori kontuan hartzen ez baduzu, patologiako metodoen atal bat tratamendu baten emaitza balitz bezala irakurriko duzu.

Zer den EAE, hitz errazetan

Entzefalomielitis autoimmune esperimentala, normalean EAE laburduraz ezaguna, esklerosi anizkoitzaren alderdi batzuk irudikatzeko animalia-eredu estandarra da. Ikertzaileak sagu sentikor bat immunizatzen du mielinaren proteina baten zati batekin eta adjuvante indartsu batekin. Ondoren, immunitate-sistemak animaliaren beraren nerbio-sistema zentralari eraso egiten dio. Saguak gorantz hedatzen den ahultasuna garatzen du; erraz puntuatzen da 0 eta 5 arteko eskalan, isats bigunetik atzeko gorputz-adarren paralisira.

Puntuatzeko erraztasun horrek azaltzen du zergatik den EAE hain erabilia, eta baita zergatik sor ditzakeen ondorio okerrak ere. Gizakien esklerosi anizkoitza berez sortzen da, jomuga multzo zabalagoa eta zehaztugabeagoa du, eta sintoma optikoak, sentsorialak, kognitiboak, zerebelosoak eta motorrak eragiten ditu, berrerortzeekin edo bilakaera progresiboarekin. EAEk zenbait mekanismo erreproduzitzen ditu baldintza kontrolatuetan, hala nola hantura, desmielinizazioa eta axoien lesioa. Ez du esklerosi anizkoitza miniaturan erreproduzitzen. Esparru orokorra ezagutu nahi duten irakurleek metileno urdinak zelula-mailan nola jarduten duela uste den berrikus dezakete, gaixotasun jakin bati buruzko edozein baieztapen epaitu aurretik.

Jarraian aztertutako bi artikuluek EAE antigeno desberdinak ere erabili zituzten, eta hori garrantzitsua da. Tratamendu-ikerketak MOG35-55 bidez induzitu zuen gaixotasuna; mielinako oligodendrozitoen glikoproteinaren peptido labur bat da. Patologia-ikerketak MP4 bidez induzitu zuen gaixotasuna; mielinaren proteina basikoaren eta proteolipido proteinaren segmentuen fusio bat da. Anduiaren eta antigenoaren aukeraketak lesioak non agertzen diren eta hanturak nola jokatzen duen aldatzen du; beraz, bi ikerketak ez dira esperimentu beraren bi errepikapen.

Mapa: eredutik galderara eta mugetara

Eduki taula hau zabalik. Artikulu honen oinarrizko erreferentzia da. Errenkada bakoitzak adierazten du ereduak zer galdera klinikori erantzun diezaiokeen, benetan zer neurtu zen eta non amaitzen den emaitzak gizakietara estrapolatzeko aukera.

Hurrengo titularra egiaztatzen duen edonork zutabe berak berrerabil ditzake, ikerketa preklinikoak nola irakurri azaltzen duen gidaren laguntzarekin: galdetu zer espezie eta antigeno erabili ziren, zein zen konposatuaren eginkizuna, zer ebaluazio-aldagai neurtu ziren eta emaitzak gaixotasunaren bilakaera ala ehunaren une jakin bateko irudia erakusten duen.

Tratamenduaren emaitza: zer aldatu zuen metileno urdina emateak

Journal of Neuroimmunology aldizkariko 2016ko tratamendu-ikerketak C57BL/6 sagu emeak erabili zituen, 8 eta 10 aste ingurukoak, sagu bakoitzeko 250 mikrogramo MOG35-55 erabiliz immunizatuak. Indukzioaren ondoren, EAE zuten animaliak ausaz banatu zituzten metileno urdinaren taldean edo tratamendurik gabeko EAE taldean, eta puntuazio klinikoen jarraipena egin zuten 30. egunaren ingurura arte.

Tratatutako saguen puntuazio klinikoak EAE kontrolenak baino nabarmen txikiagoak izan ziren 15. egunetik 30. egunera, P 0.01 baino txikiagoa izanik. Bizkarrezur-muinaren analisiak norabide bera adierazi zuen: tratatutako animaliek hanturazko infiltrazio gutxiago, desmielinizazio gutxiago eta axoi-galera gutxiago zuten.

Alderdi bereizgarria seinalizazioaren analisi multzoa izan zen. Tratamenduak AMPK aktibazioa eta SIRT1 adierazpena handitu zituen, eta NF-kB aktibazioa, hanturaren eragile nagusietako bat, murriztu zuen. Immunitate moldakorrari dagokionez, Th17 erantzuna murriztu eta Treg erantzuna indartu zuen. Proposatutako katea, beraz, hau da: metileno urdinetik AMPK eta SIRT1era, hortik NF-kB seinalizazio txikiagora, ondoren hanturazko Th17 erantzunetik Treg erregulatzailerantz aldatzera, hortik ehun-lesio arinagora eta, azkenik, puntuazio txikiagoetara.

Kate hori interpretazio bat da, ez frogatutako kausa-sekuentzia bat. Ikerketak erakusten du botika, seinale-aldaketak eta gaixotasunaren hobekuntza batera agertzen direla. Ez du frogatzen onura osoa AMPK eta SIRT1 bidez gertatzen denik; gainera, publikoki indexatutako testuak ez ditu kilogramoko miligramotan emandako dosi zehatza, emateko bidea, hasiera-eguna edo iraupena behar bezain argi azaltzen, laburpena bakarrik erabilita tratamendu-erregimena erreproduzitzeko. Salmenta-orri batean artikulu honi buruz aipatutako edozein dosi-zenbaki egiaztatu gabekotzat hartu, testu osoko metodoak aipatzen ez baditu. Gizakietan metileno urdinari buruz dagoen ebidentzia multzo zabalagoan egiaztatu behar da hasierako immunitate-seinale horrek inoiz datu klinikoetara iritsi ote zen.

Patologiaren emaitza: sei hilabeteko ehun-laginek zer erakutsi zuten

PLoS ONE aldizkariko 2015eko MP4 ikerketak C57BL/6 sagu emeak erabili zituen, Freund-en adjuvante osoan prestatutako 200 mikrogramo MP4 erabiliz immunizatuak; pertussis toxina ere eman zieten immunizazioaren egunean eta berriro 48 ordu geroago. Animalia bakar batek ere ez zuen metileno urdina botika gisa jaso. Finkatu eta inklusioa egin ondoren, bizkarrezur-muinaren mikrometro bateko zeharkako ebakiak metileno urdinarekin tindatu zituzten argi-mikroskopiarako, eta traktu bentrolateralaren mikroskopia elektronikoa erabili zuten xehetasun finagoak aztertzeko.

Ehun-laginak hiru fasetan hartu ziren: gailur akutuan, 7 sagurekin; hasieratik hiru hilabetera, 5 sagurekin; eta hasieratik sei hilabetera, 10 sagurekin. Fase horietako batez besteko puntuazio klinikoek ia berdinak ziruditen, 1.7 eta 1.8 ingurukoak 0 eta 5 arteko eskalan. Ehunak bestelako egoera bat erakutsi zuen. Mielinaren kalte isolatua milimetro karratuko 569,000 zuntz ingurutik igo zen gailur akutuan, sei hilabetera 1,496,000 ingurura iritsi arte; fase akutuaren eta epe luzekoaren arteko alderaketa esanguratsua izan zen, P 0.027 izanik. Mielinaren eta axoien kalte bateratua gutxi gorabehera bikoiztu egin zen sei hilabeterako. Birmielinizatzen ari ziren zuntzak ehuneko batetik behera mantendu ziren fase guztietan; datu horrek zuhurtzia eskatzen du konponketarako itxaropenei dagokienez.

Axoien lesioak U formako eredua jarraitu zuen: handia gailur akutuan, txikiagoa hiru hilabetera eta handiena sei hilabetera. Gainera, korrelazioa zuen mitokondrioen hanturarekin eta neurofilamentuen arteko tartearen murrizketarekin. Ebaluazioa puntuazioa eta fasea jakin gabe egin zen; horrek indartu egiten du puntuazio klinikoek etengabeko egitura-kaltea behar baino gutxiago islatzen zutela dioen interpretazioa.

Desadostasun hori da ikerketak esklerosi anizkoitzari buruz irakurtzen duenari egiten dion benetako ekarpena. Desgaitasun-puntuazio egonkor batek ez zuen esan nahi ehuna egonkor zegoenik. Horrek ere erakusten du zergatik ezin duen artikulu honek metileno urdinarekin esklerosi anizkoitza tratatzeari buruzko baieztapenik babestu. Denbora aztertu zuen, ez tratamendua.

Zergatik ez duen ikerketa batek ere pazienteentzako onurarik ezartzen

Pentsatu artikulu bakoitzak galdera mugatu bati ondo erantzuten diola, baina pazienteei buruzko galderari ez diola batere erantzuten.

Lehenik, kausa desberdina da. EAE nahita eragiten da antigeno eta adjuvante zehatzekin. Gizakien esklerosi anizkoitza berez garatzen da, immunitate-errepertorio zabalago batekin: T zelulak, B zelulak, berezko immunitatea eta glia egoiliarra barne hartzen ditu. Sagu batean MOGera bideratutako erantzuna aldatzen duen konposatu batek ez du zertan gizakien erantzun zabalago hori aldatu.

Bigarrenik, fenotipoa desberdina da. Sagu baten isatsetik atzeko gorputz-adarretara gorantz hedatzen den ahultasuna neurtzeko adierazle erosoa da. Gizakien esklerosi anizkoitzaren heterogeneotasuna funtzio motorreko zenbaki bakarrera murrizten du. Botikek maiz aldatzen dituzte epe laburreko EAE puntuazioak gizakien gaixotasunaren bilakaera aldatu gabe; horregatik, EAE baheketa egiteko eta mekanismoak aztertzeko tresna da, ez miniaturazko klinika bat.

Hirugarrenik, esposizioa eta denboraren eragina argitu gabe daude. Saguekin egindako 30 eguneko esperimentu batean metileno urdina hasieratik etengabe ematea ez da gaixotasuna dagoeneko garatuta duen pertsona baten aho bidezko erabilera kronikoa, eta bi ikerketetako batek ere ez zituen botikaren mailak neurtu nerbio-sisteman. Lotura hori gabe, ez dago plaka bateko kontzentraziotik edo sagu bati emandako dositik gizakien tratamendu-erregimen batera igarotzeko zubirik.

Laugarrenik, bi artikuluek ez dute elkar erreplikatzen. Antigeno desberdinak, galdera desberdinak, ebaluazio-aldagai desberdinak eta, kasu batean, inolako tratamendurik ez. Biak batera esklerosi anizkoitzaren tratamenduari buruzko bi ikerketa positibo gisa aipatzea kategoria-akats bat da.

Zer esan nahi duen horrek ebidentzia haztatzen duten irakurleentzat

Artikulu hauetan ez dago esklerosi anizkoitzerako metileno urdinaren protokolo ezarririk. Tratamendu-ikerketak MOG EAE ereduan AMPK, SIRT1, NF-kB eta Th17 eta Treg arteko oreka gehiago ikertzea babesten du. Patologia-ikerketak gogorarazten du ehun-lesioak aurrera egin dezakeela puntuazioak egonkor daudela dirudien bitartean, eta metodoen atal batean metileno urdina aipatzeak batzuetan tindagai-pote bat esan nahi duela, ez botika-armairu bat. Esklerosi anizkoitzari buruzko abian den ikerketaren jarraipena egiten duten irakurleek gogoan izan behar dute tindagaiaren eta botikaren arteko bereizketa hori. Segurtasunari buruzko galderak, odolarekin eta interakzioekin lotutako arriskuak barne, klinikari batekin aztertu behar dira, metileno urdinaren segurtasunari buruzko datu orokorrekin batera, inork laborategiko titularretan oinarrituta jokatu aurretik.

Ondorio nagusia esaldi bakarrean laburbil daiteke. Aipatutako ikerketa batek metileno urdina eman zien MOG EAE zuten saguei, eta gaixotasun arinagoa eta hanturaren aurkako immunitate-aldaketa bat jakinarazi zituen; beste ikerketak, berriz, ez zuen ezer eman, eta metileno urdina bizkarrezur-muina tindatzeko soilik erabili zuen, sei hilabetez pilatutako mielina- eta axoi-kaltea dokumentatzen zuen bitartean; beraz, bi ikerketek ez dute ezartzen metileno urdinak gizakien esklerosi anizkoitzean laguntzen duenik.