أزرق الميثيلين والتصلب المتعدد: ما الذي اختبرته الأبحاث على الحيوانات

ابحث عن أزرق الميثيلين للتصلب المتعدد وستجد أوراقًا بحثية تبدو وكأنها تجيب عن السؤال نفسه. لكنها لا تفعل ذلك. أعطت إحدى الأوراق أزرق الميثيلين لفئران مريضة بوصفه علاجًا. أما الأخرى فلم تعالج أي حيوان به على الإطلاق. بل استخدمت أزرق الميثيلين كصبغة زرقاء على شرائح رقيقة من الحبل الشوكي حتى يتمكن اختصاصي علم الأمراض من رؤية الميالين تحت المجهر.

هذه هي الفكرة التي يقوم عليها المقال كله. للصبغة دوران في علم الأحياء، ولا يشتركان في شيء سوى العبوة. عندما تُدرس بوصفها دواءً مرشحًا، تُعطى لحيوان حي ويكون السؤال هو ما إذا كان المرض يتغير. وعندما تُستخدم كصبغة، فإنها تُطبَّق على نسيج ميت ومثبّت بعد انتهاء التجربة، ويكون السؤال هو كيف بدا النسيج. إذا فاتك هذا الفرق، فقد تقرأ قسم طرائق علم الأمراض كما لو كان نتيجة علاجية.

ما هو EAE، بعبارات بسيطة

التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي، الذي يُختصر عادةً إلى EAE، هو النموذج الحيواني القياسي المستخدم لتمثيل جوانب من التصلب المتعدد. يُحصّن الباحث فأرًا قابلًا للإصابة بجزء من بروتين الميالين مع مادة مساعدة قوية. ثم يبدأ الجهاز المناعي بمهاجمة الجهاز العصبي المركزي للحيوان نفسه. ويصاب الفأر بضعف صاعد يسهل تقييمه على مقياس من 0 إلى 5، بدءًا من ارتخاء الذيل وصولًا إلى شلل الأطراف الخلفية.

هذه السهولة في التقييم تفسر شعبية EAE، كما تفسر أيضًا لماذا قد يكون مضللًا. ينشأ التصلب المتعدد لدى البشر تلقائيًا، ويشمل مجموعة أوسع وأقل تحديدًا من الأهداف، ويسبب أعراضًا بصرية وحسية ومعرفية ومخيخية وحركية ضمن مسارات انتكاسية أو مترقية. يعيد EAE إنتاج آليات مختارة مثل الالتهاب وإزالة الميالين وإصابة المحاور العصبية في ظروف مضبوطة. لكنه لا يعيد إنتاج التصلب المتعدد في صورة مصغرة. ويمكن للقراء الذين يريدون الإطار العام مراجعة كيفية الاعتقاد بأن أزرق الميثيلين يعمل على المستوى الخلوي قبل الحكم على أي ادعاء متعلق بمرض بعينه.

استخدمت الورقتان أدناه أيضًا مستضدات مختلفة في EAE، وهذا أمر مهم. استحثت دراسة العلاج المرض باستخدام MOG35-55، وهو ببتيد قصير من بروتين الميالين قليل التغصن السكري. أما دراسة علم الأمراض فاستحثت المرض باستخدام MP4، وهو اندماج لقطاعات من البروتين الأساسي للميالين والبروتين الشحمي البروتيني. تؤثر اختيارات السلالة والمستضد في مواضع ظهور الآفات وكيفية سلوك الالتهاب، ولذلك فالدراستان ليستا تكرارين للتجربة نفسها.

الخريطة: من النموذج إلى السؤال إلى الحدود

أبقِ هذا الجدول أمامك. فهو المرجع الأصلي لهذا المقال. يوضح كل صف السؤال السريري الذي يستطيع النموذج تناوله، وما الذي قيس فعليًا، وأين تتوقف إمكانية نقل النتائج إلى البشر.

يمكن لأي شخص يتحقق من العنوان التالي إعادة استخدام الأعمدة نفسها بمساعدة كيفية قراءة الدراسات قبل السريرية: اسأل عن النوع والمستضد، ودور المركب، ونقاط النهاية، وما إذا كانت النتيجة تمثل مسار المرض أم لقطة نسيجية في لحظة محددة.

نتيجة العلاج: ما الذي غيّره إعطاء أزرق الميثيلين

استخدمت دراسة العلاج المنشورة عام 2016 في Journal of Neuroimmunology إناث فئران C57BL/6 بعمر نحو 8 إلى 10 weeks، وحُصّنت بـ 250 micrograms من MOG35-55 لكل فأر. بعد استحثاث المرض، وُزعت حيوانات EAE عشوائيًا على مجموعة أزرق الميثيلين أو مجموعة EAE غير المعالجة، وتُوبعت الدرجات السريرية حتى نحو day 30.

كانت الدرجات السريرية أقل بدرجة ذات دلالة إحصائية لدى الفئران المعالجة مقارنةً بضوابط EAE من day 15 إلى day 30، عند P less than 0.01. وأشار تحليل الحبل الشوكي في الاتجاه نفسه، مع ارتشاح التهابي أقل، وإزالة ميالين أقل، وفقدان محاور عصبية أقل لدى الحيوانات المعالجة.

وكان الجزء المميز هو لوحة الإشارات. زاد العلاج تنشيط AMPK وتعبير SIRT1، وكبح تنشيط NF-kB، وهو مفتاح مركزي للالتهاب. وعلى جانب المناعة التكيفية، خفّض استجابة Th17 وعزّز استجابة Treg. لذلك فإن السلسلة المقترحة هي: أزرق الميثيلين إلى AMPK وSIRT1، ثم انخفاض إشارات NF-kB، ثم تحول من Th17 الالتهابي نحو Treg التنظيمي، ثم إصابة نسيجية أخف، ثم درجات أقل.

هذه السلسلة تفسير وليست تسلسلًا سببيًا مثبتًا. تُظهر الدراسة أن الدواء وتغيرات الإشارات وتحسن المرض تحركت معًا. لكنها لا تثبت أن AMPK وSIRT1 مسؤولان عن كامل الفائدة، كما أن النص المفهرس علنًا لا يعرض الجرعة الدقيقة بوحدة milligram per kilogram أو طريق الإعطاء أو يوم البدء أو المدة بوضوح كافٍ لإعادة تنفيذ النظام العلاجي اعتمادًا على الملخص وحده. تعامل مع أي رقم جرعة يُنسب إلى هذه الورقة في صفحة مبيعات على أنه غير متحقق منه ما لم يستشهد بطرائق النص الكامل. وقاعدة الأدلة البشرية الأوسع لأزرق الميثيلين هي المكان الذي ينبغي الرجوع إليه لمعرفة ما إذا كانت هذه الإشارة المناعية المبكرة قد تطورت يومًا إلى بيانات سريرية.

نتيجة علم الأمراض: ما الذي أظهرته الأنسجة خلال ستة أشهر

استخدمت دراسة MP4 المنشورة عام 2015 في PLoS ONE إناث فئران C57BL/6 حُصّنت بـ 200 micrograms من MP4 في مساعد فرويند الكامل، مع ذيفان السعال الديكي في يوم التحصين ثم مرة أخرى بعد 48 hours. لم يتلق أي حيوان أزرق الميثيلين كدواء. بعد التثبيت والتضمين، صُبغت مقاطع عرضية من الحبل الشوكي بسماكة 1 micrometer بأزرق الميثيلين للفحص بالمجهر الضوئي، مع استخدام المجهر الإلكتروني للحزمة البطنية الوحشية للحصول على تفاصيل أدق.

أُخذت عينات الأنسجة في ثلاث مراحل: ذروة حادة مع 7 mice، وبعد ثلاثة أشهر من البداية مع 5 mice، وبعد ستة أشهر من البداية مع 10 mice. بدت متوسطات الدرجات السريرية في تلك المراحل متطابقة تقريبًا، عند نحو 1.7 إلى 1.8 على مقياس من 0 إلى 5. لكن الأنسجة روت قصة مختلفة. ارتفع تلف الميالين المعزول من نحو 569,000 fibers per square millimeter عند الذروة الحادة إلى نحو 1,496,000 بعد ستة أشهر، وكان الفرق بين المرحلة الحادة والفترة الطويلة ذا دلالة إحصائية عند P equal to 0.027. وتضاعف تقريبًا الضرر المشترك للميالين والمحاور العصبية بحلول ستة أشهر. وظلت الألياف التي كانت تخضع لإعادة تكوين الميالين دون one percent في كل مرحلة، وهو تفصيل يفرض قدرًا من الحذر بشأن آمال الإصلاح.

اتبعت إصابة المحاور العصبية نمطًا على شكل U؛ كانت مرتفعة عند الذروة الحادة، وأقل بعد ثلاثة أشهر، والأعلى بعد ستة أشهر، كما ارتبطت بتورم الميتوكوندريا وبانخفاض التباعد بين الخيوط العصبية. جرى التقييم مع تعمية المقيمين عن الدرجة والمرحلة، مما يعزز الاستنتاج بأن الدرجات السريرية قللت من إظهار مقدار الضرر البنيوي المستمر.

هذا التباين هو الإسهام الحقيقي للدراسة بالنسبة إلى قارئ مهتم بالتصلب المتعدد. لم تكن الدرجة المستقرة للعجز تعني استقرار الأنسجة. كما يوضح ذلك لماذا لا يمكن لهذه الورقة أن تدعم أي ادعاء علاجي بشأن أزرق الميثيلين والتصلب المتعدد. فقد اختبرت الزمن، لا العلاج.

لماذا لا تثبت أي من الدراستين فائدة لدى المرضى

يمكن النظر إلى كل ورقة على أنها تجيب جيدًا عن سؤال ضيق، ولا تجيب إطلاقًا عن سؤال المريض.

أولًا، يختلف السبب. يُستحث EAE عمدًا باستخدام مستضد محدد ومادة مساعدة. أما التصلب المتعدد لدى البشر فيتطور تلقائيًا ضمن مجموعة مناعية أوسع تشمل الخلايا التائية والخلايا البائية والمناعة الفطرية والخلايا الدبقية المقيمة. وليس بالضرورة أن يؤدي مركب يغيّر استجابة منحازة إلى MOG في فأر إلى تغيير تلك الاستجابة البشرية الأوسع.

ثانيًا، يختلف النمط الظاهري. يُعد الضعف الصاعد من الذيل إلى الأطراف الخلفية لدى الفأر مقياسًا عمليًا. لكنه يختزل عدم تجانس التصلب المتعدد لدى البشر في رقم حركي واحد. كثيرًا ما تغيّر الأدوية درجات EAE قصيرة الأمد من دون أن تغيّر مسارات المرض لدى البشر، ولهذا يُستخدم EAE كأداة للفحص ودراسة الآليات، وليس كعيادة مصغرة.

ثالثًا، ما زال التعرض والتوقيت غير محسومين. الإعطاء المستمر والمبكر في تجربة على الفئران مدتها 30 day لا يعادل الاستخدام الفموي المزمن لدى شخص مصاب بمرض مستقر منذ مدة، ولم تقِس أي من الدراستين مستويات الدواء في الجهاز العصبي. من دون هذا الرابط، لا يوجد جسر يربط تركيزًا على طبق مختبري أو جرعة في فأر بنظام علاجي بشري.

رابعًا، لا تكرر الورقتان نتائج بعضهما بعضًا. مستضدات مختلفة، وأسئلة مختلفة، ونقاط نهاية مختلفة، وفي إحدى الحالتين لم يوجد أي علاج أصلًا. الاستشهاد بهما معًا بوصفهما دراستين إيجابيتين لعلاج التصلب المتعدد خطأ في التصنيف.

ما الذي يعنيه ذلك للقراء الذين يقيّمون الأدلة

لا يوجد في هاتين الورقتين بروتوكول مثبت لأزرق الميثيلين لعلاج التصلب المتعدد. تدعم دراسة العلاج إجراء مزيد من الأبحاث حول AMPK وSIRT1 وNF-kB والتوازن بين Th17 وTreg في MOG EAE. أما دراسة علم الأمراض فهي تذكير بأن إصابة الأنسجة قد تتقدم بينما تبدو الدرجات ثابتة، وأن ظهور أزرق الميثيلين في قسم الطرائق قد يعني أحيانًا وعاء صبغة لا خزانة أدوية. وعلى القراء الذين يتابعون الأبحاث الجارية حول التصلب المتعدد أن يضعوا في اعتبارهم هذا الفرق بين الصبغة والدواء. أما أسئلة السلامة، بما فيها مخاطر الدم والتداخلات، فينبغي مناقشتها مع طبيب إلى جانب بيانات السلامة العامة لأزرق الميثيلين قبل اتخاذ أي إجراء بناءً على عناوين نتائج المختبر.

الخلاصة يمكن اختصارها في جملة واحدة. أعطت إحدى الدراستين المستشهد بهما أزرق الميثيلين لفئران MOG EAE وأبلغت عن مرض أخف مع تحول مناعي مضاد للالتهاب، بينما لم تعطِ الدراسة الأخرى أي دواء واستخدمت أزرق الميثيلين فقط لصبغ الحبل الشوكي أثناء توثيق تراكم تلف الميالين والمحاور العصبية على مدى ستة أشهر، ولذلك لا تثبت الدراستان معًا أن أزرق الميثيلين يفيد البشر المصابين بالتصلب المتعدد. :::