ሜቲሊን ብሉን በላቦራቶሪ መለየት፦ የኢንፍራሬድ ስፔክትረሞች እና ተጨማሪ ዘዴዎች

ሦስት ላቦራቶሪዎች ተመሳሳይ ሰማያዊ ዱቄት እንደተቀበሉ ያስቡ። የመጀመሪያው የኢንፍራሬድ ስፔክትረም ይመዘግባል፣ ዱቄቱም ሜቲሊን ብሉ መሆኑን ይገልጻል። ሁለተኛው የክሮማቶግራፊ ምርመራ ያደርጋል፣ 0.4% Azure B እንዳለበትም ሪፖርት ያቀርባል። ሦስተኛው በክሪስታሎቹ ላይ የኤክስሬይ ዲፍራክሽን ምርመራ ያደርጋል፣ የሃይድሬት ቅርጹንም ይለያል። ሦስቱም ትክክል ናቸው፣ ነገር ግን አንዳቸውም የሌሎቹን ሁለት ጥያቄዎች አልመለሱም። ውዥንብር የሚጀምረው አንድ ውጤት ሦስቱንም እንደሚመልስ ሲተረጎም ነው።

ይህ ጽሑፍ እነዚህን ጥያቄዎች ይለያል። የኢንፍራሬድ መለያ ምርመራ ከማጣቀሻ ስታንዳርድ ጋር በማነጻጸር ሞለኪውላዊ ማንነትን ያረጋግጣል። ክሮማቶግራፊ ስብጥርን ያረጋግጣል። ዲፍራክሽን በጠጣር ሁኔታ ያለውን ቅርጽ ያረጋግጣል። የመለያ ምርመራን ያለፈ መመሳሰል የንጽሕና ማረጋገጫ አይደለም።

የኢንፍራሬድ መለያ ምርመራ አንድ ጥያቄን በጥሩ ሁኔታ ይመልሳል

በፋርማኮፒያ የተደነገገው የሜቲሊን ብሉ መለያ ምርመራ ስፔክትረምን ከስታንዳርድ ጋር ማነጻጸር እንጂ የፒኮች ዝርዝርን አንድ በአንድ ማረጋገጥ አይደለም። በUSP የሜቲሊን ብሉ ሞኖግራፍ ቅድመ እይታ መሠረት፣ መለያ ምርመራ A የATR ኦፕቲክስን ወይም የፖታሲየም ብሮማይድ ፔሌትን በመጠቀም የኢንፍራሬድ ስፔክትሮስኮፒ እንዲደረግ ይገልጻል። የናሙናው ስፔክትረም ከUSP ማጣቀሻ ስታንዳርድ ስፔክትረም ጋር መመሳሰል አለበት፤ ናሙናውና ስታንዳርዱም በተመጣጣኝ ሁኔታዎች ተዘጋጅተው ስፔክትረሞቻቸው መመዝገብ አለባቸው። ውሳኔውን የሚወስነው ቋሚ የመለያ ሞገድ ቁጥሮች ዝርዝር አይደለም። ስፔክትረሞቹን አንዱ በሌላው ላይ ደርቦ ማነጻጸር ነው።

ይህ የዘዴ ምርጫ የሜቲሊን ብሉ FTIR ስፔክትረሞችን ባህሪ ያንጸባርቃል። እጅግ ጠንካራዎቹ ምልክቶች በጣት አሻራ ክልል ውስጥ ይገኛሉ። በጽሑፎች የቀረቡ የባንድ ትርጓሜዎች ዋናውን የኮንጁጌትድ ቀለበት ባንድ በ1590 እስከ 1600 cm-1 አካባቢ ያስቀምጣሉ፤ በዚህ ክልል የአሮማቲክ ካርቦን-ካርቦን እና ካርቦን-ናይትሮጅን የመዘርጋት ንዝረቶች እርስ በእርስ ተጣምረው ይከሰታሉ። በ1490 እና 1390 cm-1 አካባቢ ያሉ ተጨማሪ ባንዶች የቀለበት፣ የካርቦን-ናይትሮጅን እና የካርቦን-ሃይድሮጅን ቅርጽ ለውጥ ባህሪያትን ያሳያሉ። በ1355 እና 1330 cm-1 አካባቢ ያሉ ባንዶች ከዲሜቲልአሚኖ ካርቦን-ናይትሮጅን ትስስሮች እና ከሜቲል ቡድን ቅርጽ ለውጦች ጋር ይያያዛሉ። በ1225 እስከ 1250 cm-1 አካባቢ ያሉ ምልክቶች የሄትሮሳይክሊክ መዋቅሩ ናቸው፤ በ1170 እስከ 1130 እና 1066 cm-1 አካባቢ ያሉ ባንዶች ደግሞ የካርቦን-ሰልፈር ባህሪን ያሳያሉ፣ የአሮማቲክ C-H መታጠፍም በ880 cm-1 አካባቢ ይታያል። የመዘርጋት ንዝረቶች በከፍተኛ ሞገድ ቁጥሮች ይታያሉ፦ የአሮማቲክ C-H በ3040 cm-1 አካባቢ፣ የN-ሜቲል C-H ደግሞ በግምት ከ2900 እስከ 3000 cm-1 መካከል። የፌኖቲያዚኒየም መሠረታዊ መዋቅር እንደ ተጣመረ ሥርዓት ስለሚንቀጠቀጥ፣ የታተሙ የባንድ ትርጓሜዎች በዝርዝር ይለያያሉ። ስለዚህ ማንኛውንም አንድ የትርጓሜ ሰንጠረዥ ብቸኛው ትክክለኛ ትርጓሜ እንደሆነ ሳይሆን፣ ሪፖርት የተደረገ ትርጓሜ እንደሆነ ይውሰዱት።

ማቅለሚያውን ሳይቀይሩ የሜቲሊን ብሉ IR ስፔክትረሞችን ስለሚቀይሩ፣ ሁለት የናሙና ዝግጅት ተጽዕኖዎች ትኩረት ይፈልጋሉ። በመጀመሪያ፣ የሃይድሬት ውሃ ያለው ቁስ በ3300 እስከ 3500 cm-1 አካባቢ ሰፊ የO-H ባንድ፣ እንዲሁም በ1630 እስከ 1640 cm-1 አካባቢ የውሃ መታጠፍ ንዝረት ያሳያል፤ የተለያዩ የሃይድሬት ቅርጾችም በጣት አሻራ ባንዶች ላይ ሊለካ የሚችል መፈናቀል ያስከትላሉ። በሁለተኛ ደረጃ፣ የKBr ፔሌት ማትሪክስ እርጥበት የመሳብ ባህሪ አለው፤ የተሳበው እርጥበት በእነዚያው የውሃ ክልሎች ባንዶችን ይፈጥራል፣ ከናሙናው የመጣ የሃይድሬት ውሃ እንደሆነም ሊታሰብ ይችላል። በATR ናሙና መለካት የKBr ማትሪክስን ያስቀራል፣ ነገር ግን የATR ጥንካሬዎች በሞገድ ቁጥር ላይ በሚመረኮዘው የመግባት ጥልቀት መሠረት ይለወጣሉ። ስለዚህ የአንድ ዱቄት ATR ስፔክትረም እና የብርሃን ማስተላለፍ ስፔክትረም በቀጥታ አንዱ በሌላው ላይ ተደርበው ሊነጻጸሩ አይችሉም። ተግባራዊው ደንብ ከፋርማኮፒያው መስፈርት ይመነጫል፦ በተመሳሳይ ዘዴ የተመዘገቡ የናሙና እና የማጣቀሻ ስፔክትረሞችን ያነጻጽሩ፣ የትኛው ዘዴ እንደተጠቀመም ይመዝግቡ። ከእነዚህ ስፔክትረሞች ጀርባ ያለውን የካቲዮን፣ የጨው እና የሃይድሬቶች ኬሚስትሪ ለማወቅ፣ የሜቲሊን ብሉ መዋቅር እና ባህሪያት ማጣቀሻን ይመልከቱ።

የትንተና ዘዴ መምረጫ ሰንጠረዥ

ይህ ሰንጠረዥ የመምረጫ መሣሪያ ነው። አንድ ዘዴ የትኛውን ጥያቄ እንደሚመልስ፣ ምርመራውን ያለፈ ውጤት ምን እንደሚያረጋግጥ እና ምን ሳይረጋገጥ እንደሚቀር ለማወቅ እያንዳንዱን ረድፍ ከግራ ወደ ቀኝ ያንብቡ።

የኢንፍራሬድ መመሳሰል ለምን የንጽሕና ማረጋገጫ አይደለም

የመለያ መመሳሰል የተሳሳተ ማቅለሚያ መሆኑን ያስወግዳል። ነገር ግን በናሙናው ውስጥ ያለውን ሁሉ አይዘረዝርም። ሦስት ዋና ውስንነቶች አሉ።

በመጀመሪያ፣ በመዋቅር ቅርብ የሆኑ ውህዶች በኢንፍራሬድ ይመሳሰላሉ። Azure B ከሜቲሊን ብሉ የሚለየው በአንድ የሜቲል ቡድን ብቻ ነው፣ ስለዚህ ስፔክትረሙ የሜቲሊን ብሉን በጣም ይመስላል። ጥቂት በመቶ Azure B ያለበት ድብልቅ እንኳን ከሜቲሊን ብሉ ማጣቀሻ ጋር ተደርቦ ሲነጻጸር በጥሩ ሁኔታ ይመሳሰላል። ያንን ባዕድ ንጥረ ነገር መለየት የክሮማቶግራፊ ሥራ ነው፤ ይህም በየሜቲሊን ብሉ ባዕድ ንጥረ ነገሮች እና የምርመራ ዘዴዎች መመሪያ ተብራርቷል።

በሁለተኛ ደረጃ፣ የኢንፍራሬድ ስፔክትሮስኮፒ ናሙናውን በአጠቃላይ የሚመረምር ዘዴ ሲሆን፣ በትንሽ መጠን ያሉ ክፍሎችን የመለየት ችሎታው ውስን ነው። አነስተኛ መጠን ያላቸው ተዛማጅ ማቅለሚያዎች፣ ቀሪ መሟሟት አስቻይ ፈሳሾች ወይም ኢንኦርጋኒክ ቅሪቶች በዋናዎቹ ባንዶች ሥር ሊሸፈኑ ይችላሉ። ተጨማሪ ፒኮች አለመኖራቸው ባዕድ ንጥረ ነገሮች እንደሌሉ የሚያሳይ ደካማ ማስረጃ ነው።

በሦስተኛ ደረጃ፣ ሙሉውን ንጽጽር የሚመራው ማጣቀሻ ስታንዳርዱ ነው። የተበላሸ፣ በሃይድሬት ለውጥ ምክንያት ስፔክትረሙ የተፈናቀለ ወይም በትክክል ያልተያዘ ስታንዳርድ የውሳኔውን መሠረት ይቀይራል። ያልተመጣጠኑ ዘዴዎችን ማነጻጸርም ተመሳሳይ ችግር ይፈጥራል፤ ለምሳሌ፣ የATR ናሙና ስፔክትረምን ከKBr ማጣቀሻ ጋር ማነጻጸር። ከእያንዳንዱ ውሳኔ ጋር የስታንዳርዱን የምርት ዙር፣ ዘዴውን እና የዝግጅት ሂደቱን ይመዝግቡ።

ድብልቆች የመጨረሻ ጥንቃቄን ይጠይቃሉ። በአብዛኛው የሚመሳሰል፣ ነገር ግን በፒኮች ጎን ትከሻ የሚመስሉ ቅርጾች ወይም ያልተለመዱ የጥንካሬ ልዩነቶች ያሉት ስፔክትረም፣ ማስታወሻዎች ተጨምረውበት ያለፈ ውጤት ተብሎ መወሰድ የለበትም። ማንነቱን ከመለየት በፊት የናሙናውን ክፍሎች መለያየት እንዳለበት የሚያመለክት ምልክት ነው።

ተጨማሪ ዘዴዎች በተግባር

የሜቲሊን ብሉ HPLC ኢንፍራሬድ ሊሰጠው የማይችለውን የስብጥር መልስ ይሰጣል። አሁን በፋርማኮፒያ የተደነገገው ዘዴ የፊኒል አይነት ኮለምን፣ ትራይፍሉኦሮአሴቲክ አሲድ ከያዘ እና የውሃና የአሴቶናይትራይል መጠን በሂደቱ የሚለዋወጥ ድብልቅ ጋር ይጠቀማል። ልኬቱም በሚታየው ብርሃን ክልል ሳይሆን በ246 nm ይደረጋል። ማንነት የሚረጋገጠው የመቆያ ጊዜው ከማጣቀሻ ስታንዳርዱ ጋር በመመሳሰሉ ነው፤ ይኸው ንጽጽር የይዘት መጠኑንም ለመወሰን ይጠቅማል። የኦርጋኒክ ባዕድ ንጥረ ነገሮች ምርመራ Azure Bን በራሱ ማጣቀሻ ቁስ ይለያል፤ የሜቲሊን ብሉ አንጻራዊ መቆያ 1.0 ሲሆን፣ የAzure B በ0.8 አካባቢ ነው። ዘዴው በሁለቱ ፒኮች መካከል ከፍተኛ የመለያየት ብቃት ይጠይቃል። የሞገድ ርዝመቱን ምርጫ ልብ ይበሉ፦ ሜቲል ቡድኖች የሚወገዱበት ተከታታይ ማቅለሚያዎች መምጠጥ ከ600 nm አካባቢ ካለው ቲዮኒን፣ በAzure C፣ Azure A እና Azure B በኩል፣ እስከ 670 nm አካባቢ ያለው ሜቲሊን ብሉ ድረስ በተከታታይ ወደ ቀይ ክልል ይፈናቀላል። ስለዚህ በ660 nm አካባቢ ቋሚ የሆነ መለኪያ ለተከታታዩ አባላት እኩል ምላሽ አይሰጥም፣ የአንዳንድ ሆሞሎጎችንም መጠን ከእውነቱ ያነሰ ያሳያል። የሙሉው ተከታታይ ስብጥር ዝርዝር ምርመራ ሲያስፈልግ፣ ለእያንዳንዱ የሚመረመር ንጥረ ነገር ተስማሚነታቸው የተረጋገጠ ስታንዳርዶች ያሉት የC18 LC-MS/MS ዘዴ መጠቀም ይገባል።

የዱቄት ዲፍራክሽን ከላይ ያሉት ሁለቱ ዘዴዎች የሚያጠፉትን ወይም ችላ የሚሉትን የጠጣር ሁኔታ ጥያቄ ይመልሳል፦ ለክሮማቶግራፊ ዱቄቱን ማሟሟት የክሪስታል መረጃን ያጠፋል፣ ሞለኪውላዊ ንዝረቶችም የረጅም ርቀት የክሪስታል አደረጃጀትን ሳይሆን ትስስሮችን ያሳያሉ። የዲፍራክሽን ንድፎች የሃይድሬት ፌዞችን እና ክሪስታላዊነትን ይለያሉ፣ ሜቲሊን ብሉም ይህንን ጥልቅ ምርመራ ከአብዛኞቹ ቁሶች ይበልጥ ይፈልጋል። ራገር እና ባልደረቦቹ በጠጣር ሁኔታ ላይ ባደረጉት ጥናት አምስት የተለያዩ የሃይድሬት መዋቅሮችን ለይተዋል፤ እነሱም አንድ ፔንታሃይድሬት፣ ሁለት ዳይሃይድሬቶች፣ አንድ ሞኖሃይድሬት እና አንድ መካከለኛ ሃይድሬት ናቸው። ባህሪያቸው ከተመረመሩት ቅርጾች መካከል እውነተኛ ትራይሃይድሬት አልተገኘም። እዚህ የላቦራቶሪ አያያዝ አስፈላጊ ነው፦ እርጥበት እና ሙቀት የሃይድሬት መረጋጋትን ይቀይራሉ፣ ከመጠን ያለፈ መፍጨትም ፌዙን ሊቀይር ወይም ክሪስታላዊነቱን ሊያዳክም ይችላል። ስለዚህ አንጻራዊ እርጥበትን እና ሙቀትን ይቆጣጠሩ፣ ይመዝግቡ፣ መፍጨትንም በተቻለ መጠን ይቀንሱ። የሃይድሬት መለያ መግለጫ እና በተመዘነው ክብደት ላይ ያለው ተጽዕኖ በየሜቲሊን ብሉ ሃይድሬት ቅርጾች እና መለያ መግለጫ የበለጠ ተብራርቷል።

የUV-Vis መምጠጥ ደጋፊ ሚና አለው። የታወቁት ከፍተኛ መምጠጥ ነጥቦች የመፍትሄውን የሚጠበቅ ባህሪ ያረጋግጣሉ፣ የክምችት ልኬትንም ያስችላሉ። ነገር ግን በሚጠበቀው የሞገድ ርዝመት የሚመጥ ሰማያዊ መፍትሄ ከሜቲሊን ብሉ ባህሪ ጋር የሚስማማ ቢሆንም፣ ሜቲሊን ብሉ መሆኑን አያረጋግጥም፤ ምክንያቱም ተዛማጅ ማቅለሚያዎች በአቅራቢያው የሞገድ ርዝመቶች ይመጣሉ።

ከመግዛትዎ በፊት ምን መጠየቅ አለብዎት

እነዚህን ልዩነቶች ወደ ግዥ ጥያቄዎች ይቀይሩ። የትኛው የምርት ዙር እንደተመረመረ፣ ማንነትን ያረጋገጠው የትኛው ዘዴ እንደሆነ፣ የHPLC ባዕድ ንጥረ ነገሮች ምርመራ የAzure B ማጣቀሻ ቁስን እንደተጠቀመ እና የሃይድሬት ቅርጹ ተመርምሮ እንደተለየ ወይም በግምት እንደተወሰደ ይጠይቁ። ከሁሉም በላይ፣ ማረጋገጫው ሙሉውን የመስፈርት ዝርዝር ወይም የተመረጡ ምርመራዎችን ብቻ እንደሚሸፍን ይጠይቁ። ከፋርማኮፒያ ጋር ተስማሚ ነው የሚሉ ብዙ ሻጮች ከባድ ብረቶችን ብቻ ይመረምራሉ። ይህም የማንነት፣ የይዘት መጠን፣ የኦርጋኒክ ባዕድ ንጥረ ነገሮች፣ የመሟሟት አስቻይ ፈሳሾች እና የረቂቅ ሕዋሳት ጥያቄዎችን ሳይመልስ ይቀራል።

Blupreme ሜቲሊን ብሉን ለመድኃኒት አጠቃቀም ከሚያመርት አምራች ጋር በአጋርነት፣ ሙሉውን የUSP መስፈርት ዝርዝር ይመረምራል። ይህም ማንነትን፣ ንጽሕናን፣ ኦርጋኒክ ባዕድ ንጥረ ነገሮችን፣ ቀሪ መሟሟት አስቻይ ፈሳሾችን፣ ኤለመንታዊ ባዕድ ንጥረ ነገሮችን፣ ከማቃጠል በኋላ የሚቀር ቅሪትን፣ የረቂቅ ሕዋሳት ገደቦችን እና የባክቴሪያ ኤንዶቶክሲኖችን ይሸፍናል። ለእያንዳንዱ የምርት ዙር ለሕዝብ የሚቀርበው የትንተና ማረጋገጫ በBlupreme የጥራት ምርመራ ላይ ይታተማል። ስለዚህ የይዘት መጠን ምርመራውን መሠረት እና የባዕድ ንጥረ ነገሮች ውጤቶችን ከመገመት ይልቅ በቀጥታ ማንበብ ይቻላል። ከ100 በመቶ በላይ የይዘት መጠን ውጤት መመሪያ እንደሚያብራራው፣ ወደ 100% የሚጠጉ ውጤቶችም የስሌታቸው መሠረት መገለጽ አለበት። የማንነት መመሳሰል ምርመራውን ይጀምራል። ሙሉው መዝገብ ያጠናቅቀዋል።