Laboratoriyada metilen ko‘kini aniqlash: infraqizil spektrlar va qo‘shimcha usullar

Tasavvur qiling, uchta laboratoriya bir xil ko‘k kukunni oladi. Birinchisi infraqizil spektrni qayd etib, uni metilen ko‘ki deb e’lon qiladi. Ikkinchisi xromatografiya o‘tkazib, 0.4% Azure B borligini bildiradi. Uchinchisi kristallarda rentgen nurlari difraksiyasini o‘rganib, gidrat shaklini belgilaydi. Uchalasining ham xulosasi to‘g‘ri, ammo hech biri qolgan ikkita savolga javob bermagan. Chalkashlik bitta natija uchalasining ham javobi sifatida talqin qilinganda boshlanadi.

Ushbu maqola bu savollarni bir-biridan ajratadi. Infraqizil identifikatsiya standart namuna bilan solishtirish orqali molekulyar ayniyatni tasdiqlaydi. Xromatografiya tarkibni aniqlaydi. Difraksiya qattiq holatdagi shaklni aniqlaydi. Identifikatsiya tekshiruvidan muvaffaqiyatli o‘tish tozalik sertifikati degani emas.

Infraqizil identifikatsiya bitta savolga yaxshi javob beradi

Metilen ko‘ki uchun farmakopeyadagi identifikatsiya sinovi cho‘qqilar ro‘yxatini tekshirish emas, balki spektrni standart bilan solishtirishdir. USP metilen ko‘ki monografiyasining ochiq ko‘rinishi bo‘yicha A identifikatsiya sinovida ATR optikasi yoki kaliy bromid tabletkasi yordamida infraqizil spektroskopiya qo‘llanadi. Namuna spektri USP standart namunasining spektriga mos kelishi kerak; namuna va standart bir xil sharoitlarda tayyorlanib, ularning spektrlari qayd etilishi lozim. Diagnostik to‘lqin sonlarining qat’iy belgilangan ro‘yxati xulosani hal qilmaydi. Buni spektrlarning ustma-ust mosligi hal qiladi.

Bu yondashuv metilen ko‘kining FTIR spektrlari xususiyatlarini aks ettiradi. Eng kuchli belgilar spektral barmoq izi sohasida joylashgan. Adabiyotdagi talqinlar asosiy kon’yugatsiyalangan halqa tasmasini odatda 1590 dan 1600 cm-1 gacha bo‘lgan sohada joylashtiradi; bu yerda aromatik uglerod-uglerod va uglerod-azot bog‘larining cho‘zilish tebranishlari o‘zaro bog‘lanadi. 1490 va 1390 cm-1 yaqinidagi boshqa tasmalar halqa, uglerod-azot va uglerod-vodorod deformatsion tebranishlariga xosdir. 1355 va 1330 cm-1 yaqinidagi tasmalar dimetilamino guruhining uglerod-azot bog‘lari hamda metil guruhlarining deformatsiyalarini o‘z ichiga oladi. 1225 dan 1250 cm-1 gacha bo‘lgan belgilar geterotsiklik tuzilishga tegishli, 1170 dan 1130 gacha va 1066 cm-1 yaqinidagi tasmalar esa uglerod-oltingugurt bog‘lariga xos; aromatik C-H bukilish tebranishlari 880 cm-1 yaqinida kuzatiladi. Cho‘zilish tebranishlari yuqoriroq sohada paydo bo‘ladi: aromatik C-H taxminan 3040 cm-1 da, N-metil C-H esa taxminan 2900 va 3000 cm-1 oralig‘ida. Nashr etilgan talqinlar tafsilotlarda farqlanadi, chunki fenotiazin skeleti o‘zaro bog‘langan tizim sifatida tebranadi. Shu sababli har qanday bitta talqin jadvalini yagona talqin emas, balki adabiyotda keltirilgan talqin sifatida qabul qiling.

Namuna tayyorlashdagi ikki ta’sirga e’tibor berish kerak, chunki ular bo‘yoqning o‘zini o‘zgartirmasdan metilen ko‘kining IR spektrlarini o‘zgartiradi. Birinchidan, gidratlangan materialda 3300 dan 3500 cm-1 gacha bo‘lgan sohada keng O-H tasmasi va 1630 dan 1640 cm-1 gacha bo‘lgan sohada suvning bukilish tebranishi kuzatiladi; turli gidrat shakllari esa barmoq izi sohasidagi tasmalarni o‘lchash mumkin bo‘lgan darajada siljitadi. Ikkinchidan, KBr tabletkasining matritsasi gigroskopik: yutilgan namlik aynan shu suv sohalarida tasmalar hosil qiladi va namunaning gidrat suvi kabi ko‘rinishi mumkin. ATR orqali spektr olish KBr matritsasidan foydalanishni talab qilmaydi, ammo ATR intensivliklari to‘lqin soniga bog‘liq kirib borish chuqurligiga qarab o‘zgaradi. Shu bois bir xil kukunning ATR spektri va o‘tkazish spektrini bevosita ustma-ust solishtirib bo‘lmaydi. Amaliy qoida farmakopeya talabidan kelib chiqadi: namuna va standartning bir xil usulda qayd etilgan spektrlarini solishtiring hamda qaysi usul qo‘llanganini hujjatlashtiring. Ushbu spektrlar asosidagi kation, tuz va gidratlar kimyosi haqida metilen ko‘kining tuzilishi va xossalari ma’lumotnomasiga qarang.

Tahlil usulini tanlash jadvali

Bu jadval usul tanlash uchun xizmat qiladi. Har bir qatorni o‘qib, usul qaysi savolga javob berishini, talablarga mos natija nimani tasdiqlashini va nimalar isbotlanmay qolishini bilib oling.

Nega infraqizil moslik tozalik sertifikati emas

Identifikatsiyadagi moslik noto‘g‘ri bo‘yoq bo‘lishini istisno qiladi. U namunadagi barcha tarkibiy qismlarni aniqlab bermaydi. Uchta cheklov ayniqsa muhim.

Birinchidan, yaqin qarindosh moddalar infraqizil sohada bir-biriga o‘xshaydi. Azure B metilen ko‘kidan bitta metil guruhi bilan farq qiladi, shuning uchun uning spektri metilen ko‘ki spektriga juda o‘xshash. Tarkibida bir necha foiz Azure B bo‘lgan aralashma ham metilen ko‘ki standart spektriga yaxshi mos tushadi. Bu aralashmani aniqlash xromatografiya vazifasidir; bu haqda metilen ko‘ki aralashmalari va sinov usullari qo‘llanmasida batafsil yozilgan.

Ikkinchidan, infraqizil spektroskopiya namunaning umumiy hajmini tekshiradigan usul bo‘lib, kam miqdordagi tarkibiy qismlarga sezgirligi cheklangan. Oz miqdordagi o‘xshash bo‘yoqlar, qoldiq erituvchilar yoki noorganik qoldiqlar asosiy tasmalar ostida yashirinadi. Qo‘shimcha cho‘qqilar yo‘qligi aralashmalar yo‘qligiga kuchsiz dalildir.

Uchinchidan, butun solishtirish standart namunaga bog‘liq. Buzilgan, gidratlanish tufayli spektri siljigan yoki noto‘g‘ri ishlov berilgan standart baholash mezonini o‘zgartiradi. Bir-biriga mos kelmaydigan usullar juftligi ham shunday ta’sir qiladi, masalan, ATR namuna spektrini KBr standart spektriga qarab baholash. Har bir xulosa bilan birga standart partiyasini, usulni va tayyorlash tartibini qayd eting.

Aralashmalar yana bir ehtiyot chorasi zarurligini ko‘rsatadi. Asosan mos keladigan, ammo yon bo‘rtmalari yoki intensivlik og‘ishlari bo‘lgan spektrni izohlar bilan ijobiy natija deb qabul qilib bo‘lmaydi. Bu namunani aniqlashdan oldin uning tarkibiy qismlarini ajratish kerakligini bildiradi.

Amaliyotda qo‘shimcha usullar

Metilen ko‘kining HPLC tahlili infraqizil usul bera olmaydigan tarkib haqidagi javobni beradi. Amaldagi farmakopeya usulida tarkibida triftorsirka kislotasi bo‘lgan suv-atsetonitril gradienti bilan fenil turidagi kolonka qo‘llanadi va deteksiya ko‘rinadigan sohada emas, 246 nm da bajariladi. Ayniyat standart namuna bilan ushlanish vaqtining mosligi orqali aniqlanadi; shu solishtirish miqdoriy aniqlash uchun ham xizmat qiladi. Organik aralashmalar sinovida Azure B o‘z standart namunasi yordamida aniqlanadi: metilen ko‘kining nisbiy ushlanish qiymati 1.0 bo‘lganda, Azure B niki taxminan 0.8 bo‘ladi va ikki cho‘qqi o‘rtasida yuqori ajratish darajasi talab etiladi. To‘lqin uzunligi tanloviga e’tibor bering: demetillanish qatorida yutilish tobora qizil tomonga siljiydi — taxminan 600 nm dagi tionindan Azure C, Azure A va Azure B orqali taxminan 670 nm dagi metilen ko‘kigacha. Shu sababli taxminan 660 nm ga sozlangan detektor qatorning turli moddalariga turlicha javob beradi va ayrim gomologlar miqdorini past ko‘rsatadi. Zarur bo‘lganda, butun qatorning to‘liq profilini aniqlash har bir tahlil qilinadigan modda uchun yaroqliligi tasdiqlangan standartlar bilan C18 LC-MS/MS usulida bajarilishi kerak.

Kukun difraksiyasi yuqoridagi ikkala usul yo‘qotadigan yoki e’tiborga olmaydigan qattiq holat haqidagi savolga javob beradi: kukunni xromatografiya uchun eritish kristall haqidagi ma’lumotni yo‘q qiladi, molekulyar tebranishlar esa uzoq masofali joylashuvni emas, bog‘larni aks ettiradi. Difraksiya manzaralari gidrat fazalari va kristallilikni farqlaydi; metilen ko‘ki ko‘pchilik materiallarga qaraganda bunday sinchkov tekshiruvga ko‘proq muhtoj. Rager va hamkasblarining qattiq holat bo‘yicha tadqiqotlari beshta alohida gidrat tuzilishini, jumladan pentagidrat, ikkita digidrat, monogidrat va oraliq gidratni aniqladi; tavsiflangan shakllar orasida haqiqiy trigidrat topilmadi. Bu yerda laboratoriyada namuna bilan ishlash sharoitlari muhim: namlik va harorat gidrat barqarorligini o‘zgartiradi, kuchli maydalash esa fazani o‘zgartirishi yoki kristallilikni kamaytirishi mumkin. Shuning uchun nisbiy namlik va haroratni nazorat qilib, hujjatlashtiring hamda maydalashni imkon qadar kamaytiring. Gidratni yorliqda ko‘rsatish va uning tortilgan massaga ta’siri metilen ko‘kining gidrat shakllari va yorliqlanishi maqolasida batafsil muhokama qilingan.

UV-Vis yutilishi qo‘shimcha vazifani bajaradi. Odatiy maksimumlar eritmaning kutilgan xatti-harakatini tasdiqlaydi va konsentratsiyani aniqlashga imkon beradi. Ammo kutilgan to‘lqin uzunligida nur yutadigan ko‘k eritma metilen ko‘kiga mos keladi, xolos, uning ayniyatini isbotlamaydi, chunki o‘xshash bo‘yoqlar ham yaqin sohada nur yutadi.

Xarid qilishdan oldin nimalarni so‘rash kerak

Bu farqlarni xaridga oid savollarga aylantiring. Qaysi partiya sinovdan o‘tkazilganini, ayniyat qaysi usul bilan tasdiqlanganini, HPLC aralashmalar sinovida Azure B standart namunasi ishlatilganmi va gidrat shakli aniqlanganmi yoki shunchaki taxmin qilinganmi, deb so‘rang. Eng muhimi, sertifikat to‘liq spetsifikatsiyani qamrab oladimi yoki faqat ayrim sinovlarnimi, deb so‘rang. Farmakopeyaga muvofiqlikni da’vo qiladigan ko‘plab sotuvchilar faqat og‘ir metallarni tekshiradi. Natijada ayniyat, asosiy modda miqdori, organik aralashmalar, erituvchilar va mikrobiologik ko‘rsatkichlar haqidagi savollar javobsiz qoladi.

Blupreme metilen ko‘kini ishlab chiqaruvchi farmatsevtika korxonasi bilan hamkorlikda ayniyat, tozalik, organik aralashmalar, qoldiq erituvchilar, element aralashmalari, kuydirishdan qolgan qoldiq, mikrobiologik chegaralar va bakterial endotoksinlarni qamrab oluvchi to‘liq USP spetsifikatsiyasi bo‘yicha sinov o‘tkazadi. Har bir partiyaning ochiq tahlil sertifikati Blupreme sifat sinovlari sahifasida e’lon qilinadi. Shu sababli miqdoriy aniqlashning hisoblash asosi va aralashmalar natijalarini taxmin qilish o‘rniga bevosita o‘qish mumkin. 100% ga yaqin natijalar uchun ham hisoblash asosi ko‘rsatilishi kerak; bu 100 foizdan yuqori miqdoriy natijalar qo‘llanmasida tushuntirilgan. Ayniyatning mosligi tekshiruvni boshlaydi. To‘liq hujjatlar esa uni yakunlaydi.