మిథిలీన్ బ్లూ రంజనం: సూక్ష్మదర్శిని పద్ధతులు మరియు నిజమైన చిత్రాల అట్లాస్

మిథిలీన్ బ్లూ రంజనం, బ్రైట్-ఫీల్డ్ సూక్ష్మదర్శినిలో సాధారణంగా అస్పష్టంగా కనిపించే కణ లక్షణాలను సులభంగా గుర్తించేలా చేస్తుంది. చెంప కణంలోని కేంద్రకాన్ని గుర్తించడానికి లేదా సూక్ష్మజీవుల బాహ్యరేఖలను, అమరికను పరిశీలించడానికి ఇది విద్యార్థులకు తోడ్పడుతుంది. అయితే, నీలంగా కనిపించే వస్తువు కేవలం ఒక పరిశీలన మాత్రమే. ఆ జీవిని గుర్తించడం, దానిని కొలవడం, అది వ్యాధిని సూచిస్తుందో లేదో నిర్ణయించడం వేర్వేరు పనులు.

ముఖచిత్రం వ్యత్యాస సూత్రాన్ని చూపిస్తుంది. దిగువ అట్లాస్‌లో, స్వతంత్రంగా వివరాలు నమోదు చేసిన నమూనాల నిజమైన ఛాయాచిత్రాలు వాటి అసలు మూల సమాచారంతో ఉన్నాయి.

మిథిలీన్ బ్లూ ఏమి వెల్లడిస్తుంది?

మిథిలీన్ బ్లూ ఒక క్షార రంజకం: దాని రంగుగల అయాన్ ధన ఆవేశాన్ని కలిగి ఉంటుంది. నమూనాల రంజనం గురించి OpenStax వివరించినట్లుగా, క్షార రంజకాలు ఋణ ఆవేశం ఉన్న కణ పదార్థంతో పరస్పర చర్య జరిపి, లేత నేపథ్యానికి భిన్నంగా కణాలు స్పష్టంగా కనిపించేలా చేయగలవు. తగిన విధంగా తయారుచేసిన నమూనాల్లో, మిథిలీన్ బ్లూ న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలు అధికంగా ఉండే ప్రాంతాలను, రంజకాన్ని బంధించే ఇతర నిర్మాణాలను స్పష్టంగా చూపిస్తుంది.

సరళ రంజనంలో, ఒకే రంజకం వ్యత్యాసాన్ని అందిస్తుంది. అందువల్ల, వేర్వేరు జీవులు ఒకే రకమైన జీవి కాకపోయినా నీలంగా కనిపించవచ్చు. మొదట ఉపయోగపడే ప్రశ్నలు వర్ణనాత్మకమైనవి: ఆ వస్తువులు గుండ్రంగా ఉన్నాయా లేక పొడవుగా ఉన్నాయా, విడివిడిగా ఉన్నాయా లేక గుంపులుగా ఉన్నాయా, సమానంగా రంగు పట్టాయా లేక లోపల భిన్న భాగాలు కనిపిస్తున్నాయా? రంగును వర్గీకరణ ఫలితంగా అర్థం చేసుకునే ముందు సరళ రంజనం మరియు గ్రామ్ రంజనం మధ్య తేడాను చూడండి.

వ్యత్యాసం మరియు విభేదన సామర్థ్యం వేర్వేరు. వ్యత్యాసం ఒక వస్తువును దాని పరిసరాల నుంచి వేరుగా గుర్తించడంలో సహాయపడుతుంది; విభేదన సామర్థ్యం దగ్గరగా ఉన్న వివరాలను విడివిడిగా చూపిస్తుంది. మరింత ముదురుగా ఉన్న చిత్రంలో మరిన్ని నిర్మాణాలు విడివిడిగా కనిపిస్తాయని హామీ లేదు. అలాగే, ప్రతి ముదురు కణికను కణాంగంగా పేర్కొనడం సముచితం కాదు.

సహజ నమూనా తయారీలు, రంజనం చేసిన తడి మౌంట్‌లు మరియు స్మియర్‌లు

రంజనం చేయని, లేదా సహజ, తడి నమూనా తయారీ అదనపు రంజకం లేకుండా నమూనాను చూపిస్తుంది; అయినప్పటికీ, అసలు పరిసరాల నుంచి తొలగించడం వల్ల కూడా నమూనా మారుతుంది. రంజనం చేసిన తడి మౌంట్‌లో, పదార్థం కవర్‌స్లిప్ కింద ద్రవంలో ఉన్నప్పుడే అభికర్మకాన్ని కలుపుతారు. స్థిరీకరించిన స్మియర్‌లో పదార్థాన్ని స్లైడ్‌పై పరచి, తదుపరి ప్రాసెసింగ్‌కు ముందు నిర్దిష్ట స్థిరీకరణ పద్ధతిని ఉపయోగిస్తారు. OpenStax నమూనా తయారీ అవలోకనం తడి మౌంట్‌లను స్థిరీకరణ నుంచి వేరుచేసి, స్థిరీకరించిన జీవుల్లో సాధారణ కదలిక లేదా జీవక్రియను ఇక ఎందుకు చూడలేమో వివరిస్తుంది.

ఈ నమూనా తయారీలు వేర్వేరు ప్రశ్నలకు సమాధానమిస్తాయి:

తరగతి గది పోలిక కోసం, బోధనా విధానానికి అనుగుణంగా విడిగా తయారుచేసి రంజనం చేసిన నమూనాను పరిశీలించే ముందు, రంజనం చేయని నమూనా పరిశీలనను నమోదు చేయండి. ప్రకాశం మరియు చిత్రాన్ని తీసే సెట్టింగ్‌లు పోల్చదగిన విధంగా ఉంచండి. రెండు వేర్వేరు కణాలను ఛాయాచిత్రాల్లో చూపిస్తే, వాటిని ఉదాహరణలుగా వర్ణించండి; ఒకే కణం యొక్క ముందు-తరువాత రికార్డుగా కాదు.

సూక్ష్మదర్శిని అట్లాస్: రంజనం చేసిన మూడు నిజమైన నమూనాలు

ఈ అట్లాస్ బహిరంగ వినియోగ లైసెన్సులు కలిగిన మూడు సూక్ష్మచిత్రాల స్వతంత్ర ఎంపిక మరియు వ్యాఖ్యానం. మూలకర్తలు నమూనాలను, రంజకాలను గుర్తించారు. మేము వారి నమూనాల ప్రామాణికతను స్వతంత్రంగా ధృవీకరించలేదు. చిత్రాలను కత్తిరించకుండా, అదనపు లక్షణాలు లేదా రంగు మార్పులు లేకుండా, నాణ్యత నష్టం లేని WebP మార్పిడులుగా పునరుత్పత్తి చేశాము.

చిత్రం 1: మానవ చెంప కణాలు

నమూనా: మానవ చెంప కణాలు. రంజకం: మిథిలీన్ బ్లూ. మాగ్నిఫికేషన్: 400×, ఛాయాగ్రాహకుడు పేర్కొన్నది. స్కేల్ బార్: అందుబాటులో లేదు; మూలం కాలిబ్రేట్ చేసిన పిక్సెల్ పరిమాణాన్ని ఇవ్వలేదు. Fritzmann2002 తీసిన ఛాయాచిత్రం, 2017, మానవ చెంప కణాలు (మిథిలీన్ బ్లూ రంజనం) నుంచి, CC BY-SA 4.0 లైసెన్సుతో. ఈ పునరుత్పత్తికి అదే లైసెన్సు వర్తిస్తుంది.

విడిగా ఉన్న ఒక కణంతో ప్రారంభించండి: చుట్టూ ఉన్న నీలి కణద్రవ్యం నుంచి దాని ముదురు కేంద్రకాన్ని వేరుగా గుర్తించడం సులభం. తరువాత దాని కింద ఒకదానిపై మరొకటి పడిన కణాలను పరిశీలించండి. ఇలా అతివ్యాప్తి చెందడం వల్ల కణ సరిహద్దును అనుసరించడం కష్టమవుతుంది; ఒక చోట మరింత ముదురు ప్రాంతం కూడా ఏర్పడవచ్చు. ప్రతి ముదురు మచ్చను కేంద్రకంగా లెక్కించడానికి కాకుండా, బాహ్యరేఖలను అనుసరించడం సాధన చేయడానికి ఈ చిత్రాన్ని ఉపయోగించండి. చెంప కణాల పరిశీలన మార్గదర్శిని ఈ నమూనాకు సంబంధించిన అభ్యాసాన్ని మరింత వివరిస్తుంది.

చిత్రం 2: ఉల్లిపాయ కణాలు

నమూనా: మూలం గుర్తించిన ప్రకారం ఉల్లిపాయ కణాలు. రంజకం: మిథిలీన్ బ్లూ. మాగ్నిఫికేషన్: అసలు ఫైలు పేరులో “200x” ఉంది; దీనిని స్వతంత్రంగా ధృవీకరించలేదు. స్కేల్ బార్: అందుబాటులో లేదు; కాలిబ్రేషన్ ఇవ్వలేదు. Alvy16 తీసిన ఛాయాచిత్రం, 2019, ఉల్లిపాయ కణం 200x నుంచి, CC BY 4.0 లైసెన్సుతో.

పొడవైన విభాగాలు క్రమబద్ధమైన పొరగా అమరి ఉన్నాయి. వాటి పొడవైన ఉమ్మడి సరిహద్దులను చిత్రం 1లోని క్రమరహిత బాహ్యరేఖలతో పోల్చండి. స్పష్టంగా కనిపించే ముదురు పదార్థాన్ని, వీక్షణ క్షేత్రంలోని అసమాన ప్రకాశాన్ని కూడా గమనించండి. ప్రతి ముదురు నిక్షేపం ఏమిటో ఈ ఛాయాచిత్రం నిర్ధారించదు. రంగు పట్టిన ప్రతిదానికీ ఒక పేరు పెట్టే బదులు, ఉపయోగకరమైన పరిశీలన రికార్డులో తయారీ లేదా చిత్రీకరణ వల్ల ఏర్పడిన ఆర్టిఫాక్ట్‌లను, అనిశ్చితిని ఎందుకు చేర్చాలో ఇది చూపిస్తుంది.

చిత్రం 3: మూలం Candida spp.గా గుర్తించిన ఈస్ట్

నమూనా: ఛాయాగ్రాహకురాలు పేర్కొన్న ప్రకారం Candida spp. రంజకం: మిథిలీన్ బ్లూతో సరళ పాజిటివ్ రంజనం. మాగ్నిఫికేషన్: అందుబాటులో లేదు. స్కేల్ బార్: అందుబాటులో లేదు; కాలిబ్రేట్ చేసిన పిక్సెల్ పరిమాణాన్ని ఇవ్వలేదు. Wikimedia వినియోగదారు Martunia.g అనే Marta తీసిన ఛాయాచిత్రం, 2021, మిథిలీన్ బ్లూతో పాజిటివ్ రంజనం 2 నుంచి, CC BY 4.0 లైసెన్సుతో.

దట్టమైన నీలి గుంపులను, తక్కువ సాంద్రత ఉన్న అంచులతో పోల్చండి. వస్తువులు తక్కువగా ఒకదానిపై మరొకటి పడిన చోట ఒక్కొక్కదాని బాహ్యరేఖను అనుసరించడం సులభం. Candida అనే పేరు మూల రికార్డు నుంచి వచ్చింది; ఈ ఛాయాచిత్రంపై చేసిన జాతి గుర్తింపు నుంచి కాదు. ఈ చిత్రం జీవనసామర్థ్య ఫలితాన్ని కూడా ఇవ్వదు. ఈస్ట్ జీవనసామర్థ్య మరియు శ్వాసక్రియ పరీక్షలకు వాటికంటూ ప్రత్యేక పరిస్థితులు, నియంత్రణలు మరియు వ్యాఖ్యానం అవసరం.

స్కేల్‌ను సరిగ్గా అర్థం చేసుకోవడం

ఈ చిత్రాలు దృశ్య పోలికకు ఉపయోగపడతాయి; మైక్రోమీటర్లలో కొలతలు తీసుకోవడానికి లేదా చిత్రాల మధ్య కణాల వాస్తవ పరిమాణాలను పోల్చడానికి కాదు. పేర్కొన్న మాగ్నిఫికేషన్ ఆధారంగా లేని కెమెరా కాలిబ్రేషన్‌ను తిరిగి పొందలేము. చిత్రం ప్రదర్శన పరిమాణాన్ని మార్చితే, అది ఎంత పెద్దగా కనిపిస్తుందో కూడా మారుతుంది.

మీ స్వంత చిత్రాల కోసం, తెలిసిన ప్రమాణాన్ని మరియు సంబంధిత ఆప్టికల్ అమరికను ఉపయోగించి కొలత కాలిబ్రేషన్‌ను నిర్ధారించండి. మైక్రోమెట్రీపై Nikon మార్గదర్శిని, స్టేజ్ మైక్రోమీటర్ ద్వారా చిత్రం లేదా రెటికిల్‌లోని ఏకపక్ష విభాగాలను భౌతిక పొడవులుగా ఎలా మారుస్తారో వివరిస్తుంది. ఆబ్జెక్టివ్ లెన్స్, కెమెరా అమరిక మరియు కాలిబ్రేషన్‌ను నమోదు చేసి, ఆ డేటా నుంచి స్కేల్ బార్‌ను జోడించండి. పాఠ్యపుస్తకంలోని సగటు కణ పరిమాణం ఆధారంగా స్కేల్ బార్‌ను ఊహించవద్దు.

సీసాలోని ద్రావణం ఆ పద్ధతికి సరిపోతుందా?

మిథిలీన్ బ్లూ అని లేబుల్ ఉన్న సీసా, పూర్తి ప్రయోగశాల నిర్దేశం కాదు. దాని సాంద్రత మరియు యూనిట్లు, ద్రావకం, అదనపు పదార్థాలు, ఉద్దేశించిన ఉపయోగం, బ్యాచ్ పత్రాలు మరియు సూచనలను తనిఖీ చేయండి. అభికర్మకం యొక్క భద్రతా సమాచార పత్రం ప్రమాదాలను వివరిస్తుంది; ఉద్దేశించిన నమూనా తయారీకి దాన్ని ఎలా ఉపయోగించాలో పద్ధతి సూచనలు నిర్దేశిస్తాయి.

ఒక స్పష్టమైన ఉదాహరణ Merck వారి Löffler మిథిలీన్ బ్లూ ద్రావణం. తయారీదారు దీనిని సూక్ష్మదర్శిని అభికర్మకంగా గుర్తించి, ఆమ్ల-నిరోధక రంజనంలో ప్రతిరంజకంగా దాని పాత్రను వివరిస్తారు. దీనికి పేర్కొన్న మండే స్వభావం కూడా, నిర్వహణ లేదా వేడి చేయడాన్ని ప్రణాళిక చేసేటప్పుడు “ఒక నీలి ద్రవం” అనే సమాచారం ఎందుకు సరిపోదో చూపిస్తుంది. ఆ లక్షణాలు ఆ మిశ్రమానికి వర్తిస్తాయి; ప్రతి సజల మిథిలీన్ బ్లూ ద్రావణానికి అవి స్వయంచాలకంగా వర్తించవు.

అలాగే, ఇయోసిన్ మిథిలీన్ బ్లూ అగార్ నిర్దిష్టంగా రూపొందించిన కల్చర్ మాధ్యమం. అది నమూనాకు సాధారణ మిథిలీన్ బ్లూ కలిపి తయారుచేసే స్లైడ్ రంజకం కాదు. వేరొక చిత్రీకరణ లక్ష్యం కోసం, సూక్ష్మదర్శిని పరిశీలనలో మిథిలీన్ బ్లూకు ప్రత్యామ్నాయాలను పోల్చండి.

ప్రారంభస్థాయి సూక్ష్మదర్శిని కిట్ కోసం, దానికి పత్రబద్ధం చేసిన విద్యా పద్ధతి, తెలిసిన సిద్ధం చేసిన స్లైడ్‌లు మరియు నిర్దేశించిన అభికర్మకంతో ప్రారంభించండి. సీసా లేబుల్ పోయినా లేదా దాని కూర్పును నిర్ధారించలేకపోయినా, దాని స్థానంలో తగిన పత్రబద్ధ అభికర్మకాన్ని ఉపయోగించండి. కళ్లకు రక్షణను ఉపయోగించండి; వాస్తవంగా ఉపయోగిస్తున్న మిశ్రమానికి ఇచ్చిన నిర్వహణ సూచనలను పాటించండి. మానవ పదార్థం మరియు తెలియని పర్యావరణ నమూనాలకు బోధనా ప్రయోగశాల యొక్క నమూనా నిర్వహణ, పారవేత విధానాలు అవసరం; రంజనం ఆ విధానాలకు ప్రత్యామ్నాయం కాదు.

నిర్ధారణకు ముందు పరిశీలనను రాయండి

“గుంపులుగా ఉన్న నీలి అండాకార వస్తువులు” అనేది చిత్రం ఆధారంగా సమర్థించగల వర్ణన. “ఒక నిర్దిష్ట సంక్రమణ” అని చెప్పడానికి, చిత్రం అందించని ఆధారాలు అవసరం. నమూనా మూలం, తయారీ, రంజన ప్రతిచర్య మరియు గుర్తింపు పద్ధతిని నోట్‌బుక్‌లో వేర్వేరుగా నమోదు చేయండి. ఈ తేడాను పాటించడం వల్ల సాధారణ తరగతి గది చిత్రం ఉపయోగకరంగా మారుతుంది; ఆకర్షణీయమైన సూక్ష్మచిత్రం సమర్థించలేని వాదనకు ఆధారంగా మారకుండా నిరోధిస్తుంది.