Test redukcije metilenskog plavog u tečnosti buraga

Diplomirana veterinarka zove sa farme, držeći plavu epruvetu u ruci. Pre deset minuta dodala je metilensko plavo u tečnost buraga, a plava boja je i dalje prisutna. Pita da li bi kravi trebalo da da još boje.

To pitanje otkriva pogrešno shvatanje. U testu redukcije metilenskog plavog u tečnosti buraga, boja se dodaje u epruvetu, nikada životinji. Celokupno ispitivanje odvija se u epruveti. Merenje brzine nestajanja plave boje govori nešto o mikrobima u tom uzorku, a ne o lečenju koje je životinji potrebno.

Zabuna je razumljiva jer se metilensko plavo pojavljuje u tri različita veterinarska konteksta. Ovaj članak ih razdvaja i pokazuje kako tumačiti vreme redukcije zajedno sa pH, protozoama, kvalitetom uzorkovanja i kliničkim znacima.

Šta test zapravo meri

Metilensko plavo je plavo u oksidovanom stanju, a gotovo bezbojno u redukovanom stanju. Sveža tečnost buraga zdrave životinje ima snažnu redukcionu sposobnost jer anaerobne bakterije aktivno fermentišu hranu. Kada se mala količina boje umeša u takvu tečnost, bakterijski metabolizam uklanja boju u roku od nekoliko minuta.

Dakle, princip rada je jednostavan: aktivna anaerobna flora brzo uklanja plavu boju, dok je neaktivna ili oštećena flora uklanja sporo. Kratko vreme znači veću redukcionu sposobnost tog uzorka. Produženo vreme ukazuje na smanjenu mikrobnu aktivnost, pod uslovom da je uzorak pravilno prikupljen i obrađen.

Test ne meri direktno redoks potencijal buraga. Studija metoda ispitivanja kod goveda, koja je uporedila test redukcije sa direktnim merenjima u milivoltima, nije utvrdila linearnu korelaciju između vremena redukcije i izmerenog redoks potencijala. Zaključak je bio da ta dva rezultata ne treba smatrati međusobno zamenljivim očitavanjima iste promenljive. Celokupno poređenje sažeto je na PubMed-u. Test redukcije posmatrajte kao funkcionalno ispitivanje mikrobne populacije, a ne kao jeftinu elektrodu.

Merck/MSD opis jednostavne indigestije kod preživara svrstava produženo vreme redukcije u isti obrazac nalaza kao abnormalan pH buraga i smanjen broj protozoa. Nijedna pojedinačna vrednost ne postavlja dijagnozu. Dijagnozu daje obrazac nalaza.

Standardni postupak uz životinju

Protokoli se donekle razlikuju između škola, pa zabeležite tačne zapremine i temperaturu koje koristite i poredite rezultate samo u okviru tog protokola. Jedna verzija koja se često podučava glasi:

1. Prikupite najmanje 10 do 20 mL sveže tečnosti buraga, uz što manje pljuvačke, izlaganja vazduhu i hlađenja. Testirajte bez odlaganja.
2. Pripremite metilensko plavo koncentracije 0.03 procenta, što je 0.3 mg po mL.
3. Dodajte boju u količini od 5 procenata zapremine tečnosti. To je 1.0 mL boje na 20 mL tečnosti, ili 0.5 mL boje na 10 mL tečnosti. U oba slučaja odnos tečnosti i boje iznosi 20 prema 1.
4. Sačuvajte drugu epruvetu sa netretiranom tečnošću iz istog uzorka kao kontrolu boje.
5. Blago promešajte, odmah pokrenite štopericu i održavajte epruvetu blizu telesne temperature, oko 37 do 39 stepeni Celsius, u zavisnosti od lokalnog protokola.
6. Zabeležite vreme do trenutka kada boja u testiranoj epruveti odgovara kontroli. Tanak plavi prsten na površini u dodiru sa vazduhom može ostati jer kiseonik tu ponovo oksiduje boju. Ne čekajte da taj prsten nestane.

Redoks hemija metilenskog plavog objašnjava zašto je kiseonik ovde važan. Snažno mućkanje, široko otvorena epruveta ili dugo odlaganje omogućavaju ulazak kiseonika i zadržavaju plavu boju duže nego što bi to bio slučaj u samom buragu. Detalji tehnike prikupljanja tečnosti buraga bez kontaminacije važni su iz istog razloga. Pljuvačka razblažuje uzorak i povećava pH, pa pri uzorkovanju želudačnom sondom mnogi kliničari odbacuju prvi deo uzorka kada raspoloživa zapremina to dozvoljava.

Šta mere različita zapažanja

Vreme redukcije odgovara samo na jedno pitanje. Pregled procene buraga u nastavku pokazuje šta doprinosi svako zapažanje uz životinju. Koristite ceo red, a ne jednu ćeliju.

Suština je u tabeli. Produženo vreme redukcije zajedno sa tromim protozoama, abnormalnim pH i slabim kontrakcijama ukazuje na stvarno smanjenje mikrobne aktivnosti. Izolovano produženo vreme kod živahne životinje koja preživa i ima pokretljive protozoe ukazuje na problem sa uzorkom, a ne sa buragom. Ponovite uzorkovanje pre nego što preduzmete mere.

Tumačenje vremena uz pH i anamnezu

Ishrana određuje polazne vrednosti. Obroci bogati koncentratima brzo fermentišu i mogu ukloniti boju za oko minut, dok pri ishrani senom to može trajati nekoliko minuta, čak i kod zdravih životinja. Zato kratko vreme samo po sebi ne dokazuje bolje zdravlje. Ono dokazuje da je više fermentabilnog supstrata došlo u dodir sa aktivnim mikrobima.

Teško preopterećenje žitaricama narušava taj jednostavan trend. Početna fermentacija ugljenih hidrata može biti intenzivna, a zatim oštećenje izazvano kiselinom potiskuje normalnu floru i protozoe, pa se vreme redukcije produžava. Zato jedno pravilo koje se podučava kaže da test nije validan kada je pH buraga ispod približno 5.5. U tom trenutku flora koja se ispituje već je promenjena.

Praktičan vodič kroz obrasce nalaza:

• Normalan pH uz redukciju u roku od oko 6 minuta ukazuje na funkcionalno aktivnu floru.
• Normalan pH uz izrazito produženu redukciju ukazuje na neaktivnost usled anoreksije, dejstva antimikrobnih lekova ili narušenog kvaliteta uzorka.
• Visok pH uz produženu redukciju često sledi nakon dugotrajne anoreksije sa malo supstrata, ali treba razmotriti kontaminaciju pljuvačkom pri uzorkovanju sondom.
• Nizak pH uz smanjenu aktivnost protozoa izaziva sumnju na disbiozu povezanu sa ugljenim hidratima. Ovde pomažu smernice za tumačenje pH buraga. Vrednosti ispod 5.5 uz depresiju opšteg stanja ne ukazuju na jednostavnu indigestiju, već na preopterećenje žitaricama i tešku acidozu.

Uvek zabeležite nedavnu oralnu primenu tetraciklina, jonofore u hrani, dugotrajnu sistemsku primenu antimikrobnih lekova, nagle promene obroka, trajanje anoreksije i unos vode. MSD priručnik posebno upozorava da oralni tetraciklini mogu znatno smanjiti aktivnost mikroflore buraga. Jonofori namerno menjaju bakterijske populacije. Bez tih anamnestičkih podataka, produženo vreme ne može se protumačiti.

Kvalitet uzorkovanja zaslužuje jednaku pažnju. Kontrolisana istraživanja pokazala su da uzorci uzeti želudačnom sondom imaju viši pH i niže koncentracije isparljivih masnih kiselina nego uzorci uzeti kanilom od istih životinja, uglavnom zbog pljuvačke. Vreme redukcije značajno se produžilo 60 minuta nakon prikupljanja pri svakoj ispitanoj zapremini, a mali uzorci bili su najviše pogođeni. Prikupite najmanje 10 mL, testirajte u roku od 30 minuta, obavite test redukcije na početku ispitivanja, održavajte uzorak toplim i svedite dodir sa vazduhom na minimum.

Tri primene koje se ne smeju pomešati

Ista boja, tri različita sistema.

Prvo, ispitivanje tečnosti buraga opisano ovde. Uzorak je prikupljena tečnost buraga. Boja koncentracije 0.03 procenta dodaje se in vitro. Krajnji pokazatelj je vreme do gubitka boje. Svrha je procena mikrobne redukcione aktivnosti.

Drugo, metilensko plavo dato živom preživaru. Ustaljeni primer je intravenska terapija toksikoze izazvane nitratima ili nitritima uz methemoglobinemiju, pri kojoj lek obnavlja funkcionalni hemoglobin. Važe pravila o dozi, formulaciji, reziduama i karenci. Ta odluka nema nikakve veze sa merenjem vremena u epruveti. Ako se boja koristi kao in vivo obeleživač u određenom postupku, princip se zasniva na tome kuda boja putuje, a ne na tome koliko je brzo mikrobi buraga redukuju.

Treće, redukcioni test mleka. Uzorak je mleko. Boja se dodaje u uzorak mleka. Brz gubitak plave boje uglavnom ukazuje na veću mikrobnu aktivnost i slabiju održivost mleka, dok spora redukcija ukazuje na bolji kvalitet. Test pripada mikrobiologiji hrane i ispitivanju kvaliteta mleka, a ne medicini buraga, i ne predstavlja određivanje broja bakterija.

Jasno navođenje naziva sprečava greške: vreme redukcije u tečnosti buraga, sistemska terapija metilenskim plavim ili njegova upotreba kao obeleživača i redukcioni test mleka. Bezbednosno pravilo staje u jednu rečenicu. Boja za ispitivanje buraga ostaje u laboratorijskoj epruveti, a ta epruveta se odbacuje. Nikada se ne daje životinji radi izvođenja testa.

Sažeto pravilo za poziv sa farme

Standardizujte koncentraciju boje na 0.03 procenta i odnos na 1 deo boje prema 20 delova tečnosti, testirajte svežu tečnost blizu telesne temperature u poređenju sa netretiranom kontrolom i tumačite vreme u minutima zajedno sa pH, pokretljivošću protozoa, kvalitetom uzorkovanja, ishranom, lekovima, kontrakcijama, apetitom, izmetom i hidratacijom. Izolovan broj nikada ne postavlja dijagnozu indigestije. Usklađen obrazac nalaza je postavlja.