Da li metilensko plavo izaziva rak? Toksikološki dokazi

Metilensko plavo je u dugotrajnim eksperimentima na životinjama pokazalo signale pojave tumora i pozitivne rezultate u nekoliko laboratorijskih testova genetičkog oštećenja. Ti nalazi zaslužuju pažnju. Oni ne utvrđuju verovatnoću da će osoba razviti rak nakon određene izloženosti.

IARC procena objavljena 2016. svrstala je metilensko plavo u Grupu 3, što znači da njegova karcinogenost kod ljudi nije mogla da se klasifikuje. Radna grupa nije imala podatke o raku kod ljudi i ocenila je dokaze iz studija na životinjama kao ograničene. Grupa 3 ne znači da je dokazano bezopasno. Isto tako, nalaz kod životinja ne čini svaku izloženost kod ljudi dokazanim uzrokom raka.

Tri pitanja koja zahtevaju odvojene odgovore

Karcinogenost se odnosi na razvoj tumora. Dugotrajna studija na životinjama može da otkrije obrasce pojave tumora nakon definisane izloženosti. Genotoksičnost se odnosi na oštećenje genetičkog materijala ili povezane ćelijske događaje. Pozitivan test mutacija predstavlja signal upozorenja, ali ne meri direktno broj slučajeva raka kod ljudi. Rizik za ljude odnosi se na verovatnoću štete pri stvarnim uslovima izloženosti.

Ova pitanja zahtevaju različita merenja. Brojanje bakterijskih mutanata, ispitivanje krvnih ćelija miševa i dijagnostikovanje tumora pri nekropsiji nisu međusobno zamenljive krajnje tačke. Isto tako, eksperiment lečenja koji pokazuje da supstanca oštećuje ćelije raka ne utvrđuje da li ponovljena izloženost može da pokrene nastanak tumora u zdravom tkivu. Posebna rasprava o metilenskom plavom u istraživanjima raka obrađuje tvrdnje o lečenju.

Poređenje studija: stvarne hronične izloženosti

Centralni eksperiment koristio je metilensko plavo trihidrat, primenjeno u 0.5% vodenoj metilcelulozi oralnom gavažom, odnosno odmerenom primenom kroz sondu u želudac. Svaka dozna grupa u hroničnoj studiji sadržala je 50 mužjaka i 50 ženki svake vrste. Primena je sprovođena pet dana nedeljno tokom dve godine, prema izveštaju o studiji Auerbacha i saradnika.

Tabela zadržava NTP zaključke specifične za pojedine vrste. Količine su miligrami ispitivanog materijala po kilogramu telesne mase životinje na danima doziranja, a ne preporuke za ljude. Životinje sa nultom dozom dobijale su nosač.

Model	Dozne grupe, mg/kg	Put primene i trajanje	Zaključak NTP-a i relevantan nalaz
Mužjaci pacova F344/N	0, 5, 25, 50	Oralna gavaža; pet dana/nedelja; dve godine	Određeni dokazi: povećan broj adenoma ćelija Langerhansovih ostrvaca pankreasa i kombinovanih adenoma/karcinoma.
Ženke pacova F344/N	0, 5, 25, 50	Isti raspored	Nema dokaza o karcinogenoj aktivnosti u ovim uslovima.
Mužjaci miševa B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Oralna gavaža; pet dana/nedelja; dve godine	Određeni dokazi: povećan broj karcinoma tankog creva i kombinovanih adenoma/karcinoma. Maligni limfom je takođe možda bio povezan.
Ženke miševa B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Isti raspored	Neodređeni dokazi: marginalno povećanje malignog limfoma.

„Određeni dokazi” su kategorija NTP-a za pozitivan eksperimentalni nalaz manje snage od „jasnih dokaza”. „Neodređeni” opisuje nesiguran nalaz. Ove kategorije izražavaju snagu dokaza, a ne procentualni rizik niti rang jačine karcinogenog dejstva.

Rezultat kod mužjaka pacova nije pokazivao ravnomerno rastući obrazac. Adenom ili karcinom Langerhansovih ostrvaca pankreasa javio se kod 4/50 kontrolnih životinja i kod 9/50, 14/50 i 8/50 životinja pri rastućim dozama. Objavljeni rad navodi statističku značajnost samo za srednju dozu. Zbog toga jednostavno pravolinijsko tumačenje nije tačno; to ne utvrđuje da je najviša doza imala zaštitno dejstvo. Adenom je benigni tumor, dok je karcinom maligni. Kombinovana krajnja tačka ne sme se opisivati kao da je svaki evidentirani tumor bio rak.

Zašto različiti sažeci zvuče protivrečno

Aktuelne informacije o propisivanju leka PROVAYBLUE navode nalaze u pankreasu mužjaka pacova, ali ne opisuju neoplastične nalaze povezane sa lekom kod miševa. Istraživački rad navodi da povećanja neoplazmi kod miševa nisu bila statistički značajna, uz napomenu da su postojali pozitivni trendovi. NTP je ipak dodelio kategorije za miševe prikazane iznad.

IARC analiza studija na životinjama pojašnjava važnu statističku razliku: nalazi u crevima mužjaka miševa pokazali su značajne trendove u odnosu na dozu, ali pojedinačne dozirane grupe nisu bile značajne u poređenjima parova sa kontrolnim grupama. Testiranje ukupnog obrasca kroz više doza razlikuje se od zasebnog testiranja svake grupe. Čitaoci treba da zadrže izvor i njegovu formulaciju umesto da sve ove nalaze sažmu kao „miševi su razvili rak” ili „studija na miševima bila je negativna”. Nijedan od tih izvora ne daje izmerenu stopu raka kod ljudi.

Poređenje studija: krajnje tačke genetičkog oštećenja

Odeljak o genetičkoj toksikologiji u NTP Technical Report 540 opisuje drugačiji skup eksperimenata. S9 je laboratorijska mešavina koja sadrži jetrene enzime i koristi se za modelovanje metaboličke aktivacije. Njeno prisustvo ne pretvara test na ćelijama u studiju izloženosti celog organizma.

Sistem testiranja	Stvarni uslovi izloženosti	Merena krajnja tačka i rezultat
Testovi bakterijskih mutacija, druga testirana serija	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; sa i bez S9 iz jetre pacova	Povećan broj mutacija u testiranim sojevima.
Kultivisane ćelije jajnika kineskog hrčka	Testiranje razmene sestrinskih hromatida uključivalo je 0.17–2.5 µg/mL bez S9, do 5 µg/mL sa S9; testiranje hromozomskih aberacija koristilo je 4.7–22 µg/mL	Pozitivni rezultati za razmenu i hromozomske aberacije.
Mužjaci miševa, akutni eksperiment	Jedna intraperitonealna injekcija: 25, 50 ili 150 mg/kg; uzorci nakon 48 sati	Nije zabeleženo povećanje mikronukleusnih eritrocita u koštanoj srži ili krvi.
Mužjaci i ženke miševa, ponovljeni eksperiment	Oralna gavaža: 25, 50, 100 ili 200 mg/kg; pet dana/nedelja tokom tri meseca	Nije zabeleženo povećanje mikronukleusnih eritrocita u perifernoj krvi.

Mikronukleus je malo dodatno jedarno telo koje može da odražava lom hromozoma ili gubitak hromozoma tokom deobe ćelije. Negativan test krvnih ćelija daje odgovor na to konkretno pitanje u tim uzorkovanim ćelijama. Ne može da isključi svaku vrstu oštećenja DNK u svakom organu. Obrnuto, pozitivan test na kultivisanim ćelijama ne govori koju su koncentraciju dostigla tkiva neke osobe.

Informacije o propisivanju takođe beleže ovaj ukupni obrazac: pozitivni testovi na bakterijama i kultivisanim ćelijama, negativni testovi mikronukleusa kod miševa. Jednostavno označavanje metilenskog plavog kao „genotoksičnog” ili „negenotoksičnog” odbacuje informacije važne za tumačenje.

Šta ovo znači za izloženost kod ljudi

Studije ne daju validiran dnevni prag bezbedan u pogledu raka za ljude. Deljenje doze za pacove faktorom telesne mase ne bi razrešilo razlike u apsorpciji, metabolizmu, putu primene, učestalosti izlaganja ili trajanju tokom života. Time bi se dobila preračunata količina, a ne dokaz bezbednosti.

Dvogodišnji eksperiment sa gavažom i kratkotrajna intravenska primena pod medicinskim nadzorom ispituju različita pitanja. Ta razlika sprečava direktnu numeričku ekstrapolaciju; ne poništava nalaze kod životinja. Korisna procena počinje tačnim jedinjenjem i formulacijom, količinom, putem primene, učestalošću, trajanjem i razlogom upotrebe. „Nekoliko kapi” ne navodi ni koncentraciju ni izmerenu zapreminu.

Ako je metilensko plavo primenjeno iz medicinskog razloga, sami nalazi o tumorima ne mogu da odrede da li su koristi tog tretmana nadmašile njegove rizike. Ako se razmatra ponovljena izborna upotreba, neizmeren dugoročni rizik od raka ne treba opisivati kao nula. Neposrednija pitanja, uključujući interakcije sa lekovima i podložnost hemolizi, obrađena su u tekstu o neželjenim dejstvima i kontraindikacijama.

Za dalje čitanje koristite biblioteku istraživanja kako biste razlikovali studije na ljudima od eksperimenata na životinjama i ćelijama. Ključno pitanje za svaki rad jeste kakvu je izloženost ispitivao i koji je ishod zaista merio.