Testi i reduktimit të blusë së metilenit për lëngun ruminal

Një veterinere e sapodiplomuar telefonon nga një fermë me një epruvetë blu në dorë. Ajo i shtoi blu metileni lëngut ruminal dhjetë minuta më parë dhe ngjyra blu është ende aty. Pyet nëse duhet t’i japë më shumë ngjyrues lopës.

Kjo pyetje zbulon një mënyrë të gabuar të të kuptuarit të testit. Në testin e reduktimit të blusë së metilenit për lëngun ruminal, ngjyruesi shtohet në epruvetë, kurrë në kafshë. E gjithë analiza kryhet në epruvetë. Matja e kohës që duhet për zhdukjen e ngjyrës blu jep informacion për mikrobet në atë mostër, jo për ndonjë trajtim që i nevojitet kafshës.

Ngatërrimi është i kuptueshëm, sepse bluja e metilenit përdoret në tri kontekste të veçanta veterinare. Ky artikull i dallon ato dhe tregon si të interpretohet koha e reduktimit së bashku me pH-në, protozoarët, cilësinë e marrjes së mostrës dhe shenjat klinike.

Çfarë mat në të vërtetë testi

Bluja e metilenit është blu kur oksidohet dhe pothuajse pa ngjyrë kur reduktohet. Lëngu ruminal i freskët nga një kafshë e shëndetshme ka aftësi të fortë reduktuese, sepse bakteret anaerobe po fermentojnë në mënyrë aktive ushqimin. Kur përzieni një sasi të vogël ngjyruesi me këtë lëng, metabolizmi bakterial e zhduk ngjyrën brenda pak minutash.

Pra, parimi praktik është i thjeshtë: flora anaerobe aktive e zhduk shpejt ngjyrën blu, ndërsa flora joaktive ose e dëmtuar e zhduk ngadalë. Një kohë e shkurtër nënkupton kapacitet më të madh reduktues në atë mostër. Një kohë e zgjatur tregon aktivitet mikrobik të ulur, me kusht që mostra të jetë marrë dhe trajtuar siç duhet.

Testi nuk e mat drejtpërdrejt potencialin redoks të rumenit. Një studim mbi metodat te gjedhët, që krahasoi testin e reduktimit me matje të drejtpërdrejta në milivolt, nuk gjeti korrelacion linear midis kohës së reduktimit dhe potencialit redoks të matur dhe arriti në përfundimin se këto dy matje nuk duhen trajtuar si rezultate të këmbyeshme të së njëjtës ndryshore. Krahasimi i plotë përmblidhet në PubMed. Mendojeni testin e reduktimit si një analizë funksionale të popullatës mikrobike, jo si një elektrodë të lirë.

Përshkrimi nga Merck/MSD i dispepsisë së thjeshtë te ripërtypësit e vendos kohën e zgjatur të reduktimit në të njëjtin kuadër me pH-në jonormale të rumenit dhe numrin e ulur të protozoarëve. Asnjë vlerë e vetme nuk e përcakton diagnozën. Atë e përcakton tabloja e përgjithshme.

Një procedurë standarde pranë kafshës

Protokollet ndryshojnë pak nga një shkollë në tjetrën, prandaj shënoni vëllimet dhe temperaturën e saktë që përdorni dhe krahasoni rezultatet vetëm brenda atij protokolli. Një version që mësohet gjerësisht është:

Merrni të paktën 10 deri në 20 mL lëng ruminal të freskët, duke minimizuar pështymën, ekspozimin ndaj ajrit dhe ftohjen. Kryeni testin pa vonesë.
Përgatitni blu metileni 0.03 për qind, që është 0.3 mg për mL.
Shtoni ngjyrues në masën 5 për qind të vëllimit të lëngut. Kjo do të thotë 1.0 mL ngjyrues në 20 mL lëng, ose 0.5 mL ngjyrues në 10 mL lëng. Të dyja japin të njëjtin raport lëng me ngjyrues prej 20 me 1.
Mbani një epruvetë të dytë me lëng pa ngjyrues nga e njëjta mostër si kontroll për ngjyrën.
Përzieni lehtë, nisni menjëherë kronometrin dhe mbajeni epruvetën pranë temperaturës së trupit, rreth 37 deri në 39 gradë Celsius, sipas protokollit vendor.
Shënoni kohën derisa ngjyra në epruvetën e testit të përputhet me atë të kontrollit. Në sipërfaqen në kontakt me ajrin mund të mbetet një unazë e hollë blu, sepse oksigjeni e rioksidon ngjyruesin aty. Mos prisni zhdukjen e asaj unaze.

Kimia redoks e blusë së metilenit shpjegon pse oksigjeni ka rëndësi këtu. Tundja e fortë, një epruvetë me grykë të gjerë të pambuluar ose një vonesë e gjatë lejon hyrjen e oksigjenit dhe e mban ngjyruesin blu më gjatë sesa do ta mbante vetë lëngu ruminal. Për të njëjtën arsye, rëndësi kanë hollësitë e teknikës së marrjes së lëngut ruminal pa ndotje. Pështyma e hollon mostrën dhe rrit pH-në, prandaj, kur përdorin sondë gastrike, shumë klinicistë e hedhin pjesën e parë nëse vëllimi i marrë e lejon.

Çfarë matin vëzhgimet e ndryshme

Koha e reduktimit i përgjigjet vetëm një pyetjeje. Vlerësimi i rumenit më poshtë tregon çfarë sjell secili vëzhgim pranë kafshës. Përdorni të gjithë rreshtin, jo vetëm një qelizë.

Vëzhgimi	Çfarë mat	Gjetja tipike pranë kafshës	Faktorët e zakonshëm që shtrembërojnë interpretimin
Koha e reduktimit të blusë së metilenit	Aktiviteti funksional reduktues i baktereve anaerobe në mostër	Te gjedhët shpesh 2 deri në 6 minuta; te delet dhe dhitë shpesh më shpejt, ku 6 minuta përdoren si prag praktik për aktivitet të mjaftueshëm dhe kohët mbi 10 minuta janë dukshëm jonormale	Mostër e ftohtë, e testuar me vonesë, e ekspozuar ndaj ajrit ose e holluar me pështymë; pak substrat pas anoreksisë së zgjatur; antimikrobikë oralë; krahasim mes raporteve të ndryshme të ngjyruesit ose temperaturave të ndryshme
pH-ja e rumenit	Mjedisi kimik, ngarkesa acide ose alkaline	Te gjedhët e ushqyer me foragjere të trasha shpesh rreth 6.0 deri në 7.2; tekstet për ripërtypësit e vegjël shpesh japin rreth 6.5 deri në 7.5; dieta dhe koha që ka kaluar nga ushqyerja e ndryshojnë vlerën	Ndotja me pështymë rrit pH-në në mostrat e marra me sondë gastrike; humbja e dioksidit të karbonit pas marrjes së mostrës; ushqyerja me drithëra ul pH-në
Numri dhe lëvizshmëria e protozoarëve	Integriteti i popullatës së ciliatëve, sidomos i formave të mëdha të ndjeshme ndaj çrregullimeve	Shumë organizma me madhësi të ndryshme dhe me lëvizje të fuqishme të orientuara në një pikë të freskët e të ngrohtë	Ftohja ngadalëson lëvizjen; acidoza e rëndë mund t’i eliminojë protozoarët; vonesa bën që një mostër normale të duket me aktivitet të ngadalësuar
Era, ngjyra dhe konsistenca	Karakteri i fermentimit dhe ndotja	Lëng me erë lehtësisht aromatike, ngjyrë kafe në të gjelbër dhe pak viskoz	Erë kalbëzimi ose e thartë në disbiozë të rëndë; lëng ujshëm ose me shumë pështymë pas marrjes jo të mirë të mostrës
Kontraktimet e rumenit dhe oreksi	Funksioni i parastomakëve dhe marrja e ushqimit në nivelin e kafshës së plotë	Kontraktime të rregullta dhe ripërtypje e qëndrueshme te një kafshë vigjilente	Ndryshim i fundit i racionit, dhimbje, dehidratim, sëmundje sistemike

Thelbi është tabela. Një kohë e zgjatur reduktimi, së bashku me protozoarë me lëvizje të ngadalësuar, pH jonormale dhe kontraktime të dobëta, tregon një ulje reale të aktivitetit mikrobik. Një kohë e zgjatur e vetme te një kafshë vigjilente që ripërtyp, me protozoarë që lëvizin fuqishëm, të orienton drejt mostrës, jo drejt rumenit. Përsëritni marrjen e mostrës përpara se të veproni.

Interpretimi i kohës së bashku me pH-në dhe anamnezën

Dieta përcakton vlerën bazë. Racionet e pasura me ushqime të koncentruara fermentohen shpejt dhe mund ta zhdukin ngjyruesin për rreth një minutë, ndërsa dietat me sanë mund të kërkojnë disa minuta, edhe te kafshët e shëndetshme. Prandaj, një kohë e shkurtër nuk dëshmon vetvetiu shëndet më të mirë. Ajo dëshmon se më shumë substrat i fermentueshëm ka hasur mikrobe aktive.

Mbingarkesa e rëndë me drithëra e prish këtë prirje të thjeshtë. Fermentimi fillestar i karbohidrateve mund të jetë intensiv, pastaj dëmtimi nga aciditeti frenon florën normale dhe protozoarët, dhe reduktimi zgjatet. Për këtë arsye, një rregull që mësohet thotë se testi nuk është i vlefshëm kur pH-ja e rumenit është nën rreth 5.5. Në atë pikë, flora që po testohet ka ndryshuar.

Një udhëzues praktik për interpretimin e tablosë:

pH-ja normale me reduktim brenda rreth 6 minutash sugjeron florë funksionalisht aktive.
pH-ja normale me reduktim dukshëm të zgjatur sugjeron pasivitet nga anoreksia, efekti antimikrobik ose një mostër me cilësi të cenuar.
pH-ja e lartë me reduktim të zgjatur shpesh shfaqet pas anoreksisë së zgjatur me pak substrat, por merrni parasysh ndotjen me pështymë gjatë marrjes me sondë.
pH-ja e ulët me aktivitet të zvogëluar të protozoarëve ngre shqetësimin për disbiozë të lidhur me karbohidratet. Udhëzimet për interpretimin e pH-së së rumenit ndihmojnë këtu. Vlerat nën 5.5 me plogështi sistemike e largojnë interpretimin nga dispepsia e thjeshtë dhe e orientojnë drejt mbingarkesës me drithëra dhe acidozës së rëndë.

Shënoni gjithmonë përdorimin e fundit të tetraciklinave orale, jonoforët në ushqim, përdorimin e zgjatur të antimikrobikëve sistemikë, ndryshimet e menjëhershme të racionit, kohëzgjatjen e anoreksisë dhe marrjen e ujit. Manuali MSD paralajmëron posaçërisht se tetraciklinat orale mund ta ulin ndjeshëm aktivitetin e mikroflorës ruminale. Jonoforët i ndryshojnë qëllimisht popullatat bakteriale. Pa këtë anamnezë, një kohë e zgjatur nuk mund të interpretohet.

Cilësia e marrjes së mostrës meriton të njëjtën peshë. Studimet e kontrolluara kanë gjetur se mostrat e marra me sondë gastrike kishin pH më të lartë dhe përmbajtje më të ulët të acideve yndyrore të avullueshme sesa mostrat e marra me kanulë nga të njëjtat kafshë, kryesisht për shkak të pështymës. Koha e reduktimit u zgjat ndjeshëm 60 minuta pas marrjes së mostrës për çdo vëllim të testuar, dhe mostrat e vogla u prekën më shumë. Merrni të paktën 10 mL, testojeni brenda 30 minutash, kryeni testin e reduktimit në fillim, mbajeni mostrën të ngrohtë dhe minimizoni kontaktin me ajrin.

Tri përdorime që nuk duhen ngatërruar

I njëjti ngjyrues, tri sisteme të ndryshme.

Së pari, analiza e lëngut ruminal e përshkruar këtu. Mostra është lëngu ruminal i marrë nga kafsha. Ngjyruesi shtohet in vitro në përqendrim 0.03 për qind. Pika përfundimtare është koha deri në çngjyrosje. Qëllimi është vlerësimi i aktivitetit reduktues mikrobik.

Së dyti, bluja e metilenit e administruar te një ripërtypës i gjallë. Shembulli i njohur është terapia intravenoze për toksikozën nga nitratet ose nitritet me methemoglobinemi, ku medikamenti rikthen hemoglobinën funksionale. Zbatohen rregullat për dozën, formulimin, mbetjet dhe periudhën e pezullimit për produktet shtazore. Ai vendim nuk ka asnjë lidhje me matjen e kohës në një epruvetë. Nëse ngjyruesi përdoret si gjurmues in vivo në një procedurë të caktuar, parimi është rruga që ndjek ngjyruesi, jo shpejtësia me të cilën e reduktojnë mikrobet e rumenit.

Së treti, testi i reduktimit në qumësht. Mostra është qumështi. Ngjyruesi shtohet në mostrën e qumështit. Humbja e shpejtë e ngjyrës blu përgjithësisht tregon aktivitet më të madh mikrobik dhe cilësi më të dobët të ruajtjes, ndërsa reduktimi i ngadaltë tregon cilësi më të mirë. Ai i përket mikrobiologjisë ushqimore dhe testimit të cilësisë së qumështit, jo mjekësisë së rumenit, dhe nuk është numërim bakterial.

Përdorimi i emërtimeve të qarta parandalon gabimet: koha e reduktimit në lëngun ruminal, terapia sistemike me blu metileni ose përdorimi si gjurmues, dhe testi i reduktimit në qumësht. Rregulli i sigurisë përmblidhet në një fjali. Ngjyruesi për analizën e rumenit mbetet në epruvetën laboratorike dhe ajo epruvetë hidhet. Ai nuk i administrohet kurrë kafshës për të kryer testin.

Një rregull i përmbledhur për telefonatën nga ferma

Standardizoni ngjyruesin në 0.03 për qind dhe raportin në 1 pjesë ngjyrues me 20 pjesë lëng, testoni lëng të freskët pranë temperaturës së trupit kundrejt një kontrolli pa ngjyrues dhe interpretoni minutat së bashku me pH-në, lëvizshmërinë e protozoarëve, cilësinë e marrjes së mostrës, dietën, medikamentet, kontraktimet, oreksin, feçet dhe hidratimin. Një numër i izoluar nuk e diagnostikon kurrë dispepsinë. Një tablo me gjetje që përputhen mes tyre e bën këtë.