Spôsobuje metylénová modrá rakovinu? Toxikologické dôkazy

Metylénová modrá vykázala signály nádorového bujnenia v dlhodobých pokusoch na zvieratách a pozitívne výsledky vo viacerých laboratórnych testoch genetického poškodenia. Tieto zistenia si zaslúžia pozornosť. Nestanovujú však pravdepodobnosť, že sa u človeka po konkrétnej expozícii vyvinie rakovina.

Hodnotenie IARC zverejnené v roku 2016 zaradilo metylénovú modrú do skupiny 3, čo znamená, že jej karcinogenitu pre ľudí nebolo možné klasifikovať. Pracovná skupina nemala k dispozícii údaje o rakovine u ľudí a dôkazy zo zvierat považovala za obmedzené. Skupina 3 neznamená preukázanú neškodnosť. Rovnako ani nález u zvierat neznamená, že každá expozícia človeka je preukázanou príčinou rakoviny.

Tri otázky, ktoré potrebujú samostatné odpovede

Karcinogenita sa týka vzniku nádorov. Dlhodobá štúdia na zvieratách môže odhaliť vzorce výskytu nádorov po definovanej expozícii. Genotoxicita sa týka poškodenia genetického materiálu alebo súvisiacich bunkových dejov. Pozitívny test mutácií predstavuje varovný signál, ale priamo nevyjadruje počet prípadov rakoviny u ľudí. Riziko pre človeka sa týka pravdepodobnosti poškodenia za skutočných podmienok expozície.

Tieto otázky vyžadujú odlišné merania. Počítanie bakteriálnych mutantov, skúmanie krvných buniek myší a diagnostikovanie nádorov pri pitve nie sú navzájom zameniteľné cieľové ukazovatele. Rovnako ani liečebný experiment, ktorý ukazuje, že látka poškodzuje rakovinové bunky, neurčuje, či opakovaná expozícia môže iniciovať nádory v zdravom tkanive. Samostatná diskusia o metylénovej modrej vo výskume rakoviny sa venuje tvrdeniam týkajúcim sa liečby.

Porovnanie štúdií: skutočné chronické expozície

V hlavnom experimente sa použil trihydrát metylénovej modrej podávaný v 0.5% vodnej metylcelulóze orálnou sondou, teda odmeraným podaním cez trubicu do žalúdka. Každá dávková skupina v chronickej štúdii obsahovala 50 samcov a 50 samíc každého druhu. Podávanie prebiehalo päť dní v týždni počas dvoch rokov podľa správy zo štúdie Auerbacha a kolegov.

Tabuľka zachováva závery NTP špecifické pre jednotlivé druhy. Množstvá sú miligramy testovaného materiálu na kilogram telesnej hmotnosti zvieraťa v dňoch dávkovania, nie odporúčania pre ľudí. Zvieratá s nulovou dávkou dostávali vehikulum.

Model	Dávkové skupiny, mg/kg	Spôsob podania a trvanie	Záver NTP a relevantný nález
Samce potkanov F344/N	0, 5, 25, 50	Orálna sonda; päť dní/týždeň; dva roky	Určité dôkazy: zvýšil sa výskyt adenómov buniek pankreatických ostrovčekov a kombinovaný výskyt adenómu/karcinómu.
Samice potkanov F344/N	0, 5, 25, 50	Rovnaký režim	Za týchto podmienok neboli zistené dôkazy karcinogénnej aktivity.
Samce myší B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Orálna sonda; päť dní/týždeň; dva roky	Určité dôkazy: zvýšil sa výskyt karcinómu tenkého čreva a kombinovaný výskyt adenómu/karcinómu. Súvisieť mohol aj malígny lymfóm.
Samice myší B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Rovnaký režim	Nejednoznačné dôkazy: hraničné zvýšenie výskytu malígneho lymfómu.

„Určité dôkazy“ sú kategóriou NTP pre pozitívny experimentálny nález s menšou silou dôkazov než „jasné dôkazy“. „Nejednoznačné“ označuje neistý nález. Tieto kategórie vyjadrujú silu dôkazov, nie percentuálne riziko ani poradie podľa sily karcinogénneho účinku.

Výsledok u samcov potkanov nevykazoval rovnomerný nárast s dávkou. Adenóm alebo karcinóm pankreatických ostrovčekov sa vyskytol u 4/50 kontrolných zvierat a u 9/50, 14/50 a 8/50 zvierat pri vzostupných dávkach. Publikovaná práca uvádza štatistickú významnosť iba pri strednej dávke. Jednoduchý lineárny výklad je preto nepresný; zároveň to nepreukazuje, že najvyššia dávka mala ochranný účinok. Adenóm je nezhubný nádor, zatiaľ čo karcinóm je zhubný. Kombinovaný cieľový ukazovateľ sa nesmie opisovať tak, akoby každý započítaný nádor bol rakovinou.

Prečo rôzne zhrnutia znejú protichodne

Aktuálne informácie o predpisovaní lieku PROVAYBLUE uvádzajú pankreatické nálezy u samcov potkanov, ale pri myšiach neuvádzajú žiadne neoplastické nálezy súvisiace s liekom. Výskumná práca uvádza, že zvýšenie neoplastických nálezov u myší nebolo štatisticky významné, pričom zaznamenáva pozitívne trendy. NTP napriek tomu priradilo myšiam kategórie uvedené vyššie.

Analýza štúdií na zvieratách od IARC objasňuje dôležité štatistické rozlíšenie: črevné nálezy u samcov myší vykazovali významné trendy v závislosti od dávky, ale jednotlivé dávkované skupiny neboli významné pri párových porovnaniach s kontrolami. Testovanie celkového vzorca naprieč dávkami sa líši od samostatného testovania každej skupiny. Čitatelia by mali zachovať zdroj a jeho formuláciu namiesto zredukovania všetkých týchto zistení na tvrdenie „u myší sa vyvinula rakovina“ alebo „štúdia na myšiach bola negatívna“. Žiadne z nich neposkytuje nameranú mieru rakoviny u ľudí.

Porovnanie štúdií: ukazovatele genetického poškodenia

Časť o genetickej toxikológii v technickej správe NTP 540 opisuje inú skupinu experimentov. S9 je laboratórna zmes obsahujúca pečeňové enzýmy, ktorá sa používa na modelovanie metabolickej aktivácie. Jej prítomnosť nemení bunkový test na štúdiu expozície celého organizmu.

Testovací systém	Skutočné podmienky expozície	Meraný cieľový ukazovateľ a výsledok
Bakteriálne testy mutácií, druhá testovaná šarža	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; s potkanou pečeňovou S9 aj bez nej	Zvýšený počet mutácií v testovaných kmeňoch.
Kultivované bunky vaječníkov čínskeho škrečka	Testovanie výmeny sesterských chromatíd zahŕňalo 0.17–2.5 µg/mL bez S9, až 5 µg/mL so S9; testovanie chromozómových aberácií použilo 4.7–22 µg/mL	Pozitívne výsledky výmeny a chromozómových aberácií.
Samce myší, akútny experiment	Jednorazová intraperitoneálna injekcia: 25, 50 alebo 150 mg/kg; vzorky po 48 hodinách	Bez zvýšenia počtu mikronukleovaných erytrocytov v kostnej dreni alebo krvi.
Samce a samice myší, opakovaný experiment	Orálna sonda: 25, 50, 100 alebo 200 mg/kg; päť dní/týždeň počas troch mesiacov	Bez zvýšenia počtu mikronukleovaných erytrocytov v periférnej krvi.

Mikrojadro je malé dodatočné jadrové teliesko, ktoré môže odrážať zlomenie chromozómu alebo stratu chromozómu počas delenia bunky. Negatívny test krvných buniek odpovedá na túto konkrétnu otázku v skúmaných bunkách. Nemôže vylúčiť každý druh poškodenia DNA v každom orgáne. Naopak, pozitívny test na kultivovaných bunkách nehovorí, akú koncentráciu dosiahli tkanivá človeka.

Informácie o predpisovaní uvádzajú aj tento celkový vzorec: pozitívne bakteriálne testy a testy na kultivovaných bunkách, negatívne testy mikrojadier u myší. Označiť metylénovú modrú jednoducho za „genotoxickú“ alebo „negenotoxickú“ znamená vynechať informácie dôležité pre interpretáciu.

Čo to znamená pre expozíciu človeka

Tieto štúdie neposkytujú validovanú dennú hranicu bezpečnú z hľadiska rakoviny pre ľudí. Prepočet dávky u potkana podľa telesnej hmotnosti by nevyriešil rozdiely v absorpcii, metabolizme, spôsobe podania, frekvencii expozície ani celoživotnom trvaní. Výsledkom by bolo prepočítané množstvo, nie dôkaz bezpečnosti.

Dvojročný experiment s podávaním sondou a krátkodobá intravenózna liečba pod lekárskym dohľadom skúmajú odlišné otázky. Tento rozdiel bráni priamemu číselnému prepočtu; nevymazáva však nálezy zo štúdií na zvieratách. Užitočné hodnotenie začína presným určením zlúčeniny a formulácie, množstva, spôsobu podania, frekvencie, trvania a dôvodu použitia. „Niekoľko kvapiek“ neuvádza ani koncentráciu, ani odmeraný objem.

Ak bola metylénová modrá podaná zo zdravotného dôvodu, samotné nálezy nádorov nedokážu určiť, či prínosy tejto liečby prevážili nad jej rizikami. Ak sa zvažuje opakované voliteľné používanie, nemerané dlhodobé riziko rakoviny by sa nemalo opisovať ako nulové. Bezprostrednejším otázkam vrátane liekových interakcií a náchylnosti na hemolýzu sa venuje článok o vedľajších účinkoch a kontraindikáciách.

Na ďalšie čítanie použite knižnicu výskumu, ktorá pomáha rozlíšiť štúdie na ľuďoch od experimentov na zvieratách a bunkách. Základnou otázkou pri každej práci je, akú expozíciu skúmala a aký výsledok skutočne merala.