ليبارٽري ۾ ميٿيلين بلو جي سڃاڻپ: انفراريڊ طيف ۽ ضمني طريقا

تصور ڪريو ته ٽن ليبارٽرين کي ساڳيو نيرو پائوڊر ملي ٿو. پهرين انفراريڊ طيف رڪارڊ ڪري ان کي ميٿيلين بلو قرار ڏئي ٿي. ٻي ڪروميٽوگرافي ڪري ٿي ۽ 0.4% Azure B جي رپورٽ ڏئي ٿي. ٽين ڪرسٽلن مان ايڪس ري جو حيود ڪرائي هائيڊريٽ جي هڪ صورت جو نالو ٻڌائي ٿي. ٽيئي درست آهن، پر انهن مان ڪنهن به ٻين ٻن سوالن جا جواب نه ڏنا آهن. مونجهارو تڏهن شروع ٿئي ٿو جڏهن هڪ نتيجي کي ٽنهي سوالن جو جواب سمجهيو وڃي ٿو.

هي مضمون انهن سوالن کي الڳ ڪري ٿو. انفراريڊ سڃاڻپ هڪ حوالياتي معيار سان ڀيٽ ڪري ماليڪيولي سڃاڻپ قائم ڪري ٿي. ڪروميٽوگرافي جزوي ترڪيب قائم ڪري ٿي. حيود ٺوس حالت جي صورت قائم ڪري ٿو. سڃاڻپ جي مطابقت واري جاچ ۾ پاس ٿيڻ پاڪائيءَ جي سند ناهي.

انفراريڊ سڃاڻپ هڪ سوال جو سٺو جواب ڏئي ٿي

ميٿيلين بلو لاءِ دواسازيءَ جي سرڪاري معيارنامي ۾ ڏنل سڃاڻپ جي جاچ، طيف کي معيار سان ڀيٽڻ آهي، چوٽين جي چيڪ لسٽ نه. USP ميٿيلين بلو مونوگراف جي ڏيک موجب، سڃاڻپ A ۾ انفراريڊ اسپيڪٽروسڪوپيءَ جو حوالو آهي، جنهن لاءِ يا ته ATR آپٽڪس يا پوٽاشيم برومائيڊ جي پيليٽ استعمال ڪئي وڃي ٿي. نموني جو طيف USP جي حوالياتي معيار جي طيف سان مطابقت رکڻ گهرجي، ۽ نمونو ۽ معيار هڪجهڙين حالتن ۾ تيار ۽ رڪارڊ ٿيل هجن. تشخيصي موجي انگن جي ڪا مقرر فهرست فيصلو نٿي ڪري. طيفن کي هڪ ٻئي مٿان رکي ڪيل ڀيٽ فيصلو ڪري ٿي.

هي طريقيڪار ميٿيلين بلو جي FTIR طيفن جي رويي کي ظاهر ڪري ٿو. سڀ کان نمايان خاصيتون فنگرپرنٽ واري خطي ۾ هونديون آهن. علمي ادب ۾ ڏنل نسبتون بنيادي ڪنجوگيٽيڊ حلقن واري بئنڊ کي مسلسل 1590 کان 1600 cm-1 جي ويجهو رکن ٿيون، جتي اروميٽڪ ڪاربان-ڪاربان ۽ ڪاربان-نائٽروجن جي ڇڪجڻ جا ارتعاشي نمونا پاڻ ۾ ڳنڍجن ٿا. 1490 ۽ 1390 cm-1 جي ويجهو وڌيڪ بئنڊ حلقن، ڪاربان-نائٽروجن، ۽ ڪاربان-هائيڊروجن جي شڪل بدلجڻ واري نوعيت رکن ٿا. 1355 ۽ 1330 cm-1 جي ويجهو بئنڊ ڊائيميٿيل امينو جي ڪاربان-نائٽروجن بندن ۽ ميٿيل جي شڪل بدلجڻ سان لاڳاپيل آهن. 1225 کان 1250 cm-1 جي ويجهو خاصيتون هيٽروسائڪلي ڍانچي سان تعلق رکن ٿيون، جڏهن ته 1170 کان 1130 ۽ 1066 cm-1 جي ويجهو بئنڊ ڪاربان-سلفر جي نوعيت رکن ٿا؛ اروميٽڪ C-H جو مڙڻ 880 cm-1 جي ويجهو ٿئي ٿو. ڇڪجڻ جا ارتعاشي نمونا وڌيڪ موجي انگن تي ظاهر ٿين ٿا: اروميٽڪ C-H لڳ ڀڳ 3040 cm-1 تي ۽ N-ميٿيل C-H لڳ ڀڳ 2900 ۽ 3000 cm-1 جي وچ ۾. شايع ٿيل نسبتُن جي تفصيلن ۾ فرق آهي، ڇاڪاڻ ته فينوٿيازينيئم ڍانچو هڪ باهمي ڳنڍيل نظام طور ارتعاش ڪري ٿو؛ تنهنڪري ڪنهن به هڪ نسبتي جدول کي رپورٽ ٿيل تشريح سمجهو، واحد ممڪن تشريح نه.

تياريءَ جا ٻه اثر ڌيان لائق آهن، ڇاڪاڻ ته اهي رنگ ڏيندڙ مادّي کي بدلائڻ کان سواءِ ميٿيلين بلو جا IR طيف بدلائين ٿا. پهريون، هائيڊريٽ ٿيل مادو 3300 کان 3500 cm-1 جي چوڌاري هڪ وسيع O-H بئنڊ ۽ 1630 کان 1640 cm-1 جي ويجهو پاڻيءَ جي مڙڻ واري بئنڊ ڏيکاري ٿو، ۽ هائيڊريٽ جون مختلف صورتون فنگرپرنٽ بئنڊن جي جاءِ ۾ ماپڻ جوڳو فرق آڻين ٿيون. ٻيو، KBr پيليٽ جو ميٽرڪس نمي جذب ڪندڙ آهي: جذب ٿيل نمي بلڪل انهن ئي پاڻيءَ وارن خطَن ۾ بئنڊ پيدا ڪري ٿي ۽ نموني جي هائيڊريٽ واري پاڻيءَ وانگر نظر اچي سگهي ٿي. ATR سان نمونو وٺڻ KBr ميٽرڪس کان پاسو ڪري ٿو، پر ATR جون شدتون موجي انگ تي دارومدار رکندڙ داخل ٿيڻ جي کوٽائيءَ سان بدلجن ٿيون، تنهنڪري ساڳئي پائوڊر جي ATR طيف ۽ ٽرانسميشن طيف کي سڌي طرح هڪ ٻئي مٿان رکي نٿو سگهجي. عملي اصول سرڪاري معيارنامي جي گهرج مان نڪري ٿو: نموني ۽ حوالياتي معيار کي ساڳئي ٽيڪنڪ سان رڪارڊ ڪري ڀيٽيو، ۽ استعمال ڪيل ٽيڪنڪ لکيت ۾ درج ڪريو. انهن طيفن جي پٺيان مثبت آئن، لوڻ، ۽ هائيڊريٽن جي بنيادي ڪيميا لاءِ ميٿيلين بلو جي بناوت ۽ خاصيتن جو حوالو ڏسو.

تجزياتي طريقي جي چونڊ جو جدول

هي جدول چونڊ جو اوزار آهي. هر قطار کي پڙهي ڏسو ته طريقو ڪهڙي سوال جو جواب ڏئي ٿو، پاس ٿيندڙ نتيجو ڇا ثابت ڪري ٿو، ۽ ڇا اڃا اڻثابت رهي ٿو.

انفراريڊ مطابقت پاڪائيءَ جي سند ڇو ناهي

سڃاڻپ جي مطابقت غلط رنگ ڏيندڙ مادّي کي رد ڪري ٿي. اها نموني جي سڀني جزن جي فهرست نٿي ڏئي. ٽي حدون سڀ کان اهم آهن.

پهريون، ويجها لاڳاپيل مادا انفراريڊ ۾ هڪجهڙا نظر اچن ٿا. Azure B، ميٿيلين بلو کان رڳو هڪ ميٿيل گروپ جي فرق سان مختلف آهي، تنهنڪري ان جو طيف ميٿيلين بلو جي طيف سان تمام گهڻو مشابهت رکي ٿو. ڪجهه سيڪڙو Azure B رکندڙ ملاوٽ به ميٿيلين بلو جي حوالياتي طيف سان چڱيءَ طرح ٺهڪي اچي ٿي. ان ناخالصيءَ کي ڳولڻ ڪروميٽوگرافيءَ جو ڪم آهي، جنهن جي وضاحت ميٿيلين بلو جي ناخالصين ۽ جاچ جي طريقن واري رهنمائي ۾ ٿيل آهي.

ٻيو، انفراريڊ اسپيڪٽروسڪوپي مجموعي نموني جي ٽيڪنڪ آهي، جنهن جي ننڍن جزن لاءِ حساسيت محدود آهي. لاڳاپيل رنگ ڏيندڙ مادن، بچيل محللن، يا غير نامياتي باقيات جا ننڍا مقدار مکيه بئنڊن هيٺ لڪي وڃن ٿا. اضافي چوٽين جو نه هجڻ، ناخالصين جي نه هجڻ جو ڪمزور ثبوت آهي.

ٽيون، حوالياتي معيار سڄي ڀيٽ جو بنياد آهي. خراب ٿيل، هائيڊريشن سبب بدليل، يا غلط سنڀاليل معيار فيصلي جو بنياد بدلائي ڇڏي ٿو. ٽيڪنڪن جو غير موزون جوڙو به ائين ڪري ٿو، جهڙوڪ ATR نموني جي طيف کي KBr حوالياتي طيف سان پرکڻ. هر فيصلي سان گڏ معيار جو لاٽ، ٽيڪنڪ، ۽ تياريءَ جو طريقو رڪارڊ ڪريو.

ملاوٽون هڪ آخري احتياط به گهرن ٿيون. گهڻو ڪري ٺهڪندڙ طيف، جنهن ۾ چوٽين جي پاسن تي اڀار يا شدت جون غير معمولي صورتون هجن، حاشين سان پاس ٿيل نتيجو ناهي. اهو سڃاڻپ کان اڳ نموني جا جزا الڳ ڪرڻ جو اشارو آهي.

عملي طور ضمني طريقا

ميٿيلين بلو جي HPLC جزوي ترڪيب جو اهو جواب ڏئي ٿي جيڪو انفراريڊ نٿو ڏئي سگهي. موجوده سرڪاري معيارنامي وارو طريقو فينائل قسم جو ڪالم استعمال ڪري ٿو، جنهن ۾ ٽرائي فلورو ايسٽڪ ايسڊ رکندڙ پاڻي-ايسيٽونائٽرائيل جو تدريجي ميلاپ هوندو آهي، ۽ ڳولڻ 246 nm تي ڪيو ويندو آهي، نه ڏسڻ ۾ ايندڙ روشنيءَ جي بئنڊ ۾. سڃاڻپ حوالياتي معيار سان برقرار رهڻ جي وقت جي مطابقت مان ملي ٿي؛ ساڳي ڀيٽ مقدار جي جاچ به مهيا ڪري ٿي. نامياتي ناخالصين جي جاچ Azure B کي ان جي پنهنجي حوالياتي مادّي سان سڃاڻي ٿي، جنهن جو نسبتي برقرار رهڻ لڳ ڀڳ 0.8 آهي، جڏهن ته ميٿيلين بلو لاءِ 1.0 آهي، ۽ ٻنهي چوٽين جي وچ ۾ اعليٰ الڳائپ گهري ٿي. موجي ڊيگهه جي چونڊ تي ڌيان ڏيو: ڊي ميٿيليشن جو سلسلو بتدريج ڳاڙهي طرف وڌيڪ جذب ڪري ٿو، لڳ ڀڳ 600 nm تي ٿائونين کان، Azure C، Azure A، ۽ Azure B مان گذرندي، لڳ ڀڳ 670 nm تي ميٿيلين بلو تائين. تنهنڪري لڳ ڀڳ 660 nm تي مقرر ڪيل ڊٽيڪٽر سڄي سلسلي لاءِ هڪجهڙو ردعمل نٿو ڏئي ۽ ڪجهه هم سلسلي مرڪبن جا مقدار گهٽ ڏيکاري ٿو. ضرورت پوڻ تي سڄي سلسلي جي مڪمل پروفائيلنگ C18 LC-MS/MS طريقي سان ڪرڻ گهرجي، جنهن ۾ هر تجزئي هيٺ ايندڙ مادّي لاءِ اهل قرار ڏنل معيار هجن.

پائوڊر حيود ٺوس حالت واري ان سوال جو جواب ڏئي ٿو، جنهن جي ڄاڻ مٿيان ٻئي طريقا يا ته ختم ڪن ٿا يا نظرانداز ڪن ٿا: ڪروميٽوگرافيءَ لاءِ پائوڊر کي ڳارڻ سان ڪرسٽل جي ڄاڻ ختم ٿي وڃي ٿي، ۽ ماليڪيولي ارتعاش بندن بابت ٻڌائين ٿا، نه ڊگهي فاصلي واري ترتيب بابت. حيود جا نمونا هائيڊريٽ فيزن ۽ ڪرسٽليت کي الڳ سڃاڻن ٿا، ۽ ميٿيلين بلو کي اڪثر ٻين مادن کان وڌيڪ اهڙي جاچ جي ضرورت آهي. Rager ۽ ساٿين جي ٺوس حالت بابت ڪم پنج الڳ هائيڊريٽ بناوتون سڃاتيون، جن ۾ هڪ پينٽاهائيڊريٽ، ٻه ڊائي هائيڊريٽ، هڪ مونو هائيڊريٽ، ۽ هڪ وچولي هائيڊريٽ شامل هئا، ۽ پرکيل صورتن ۾ ڪو حقيقي ٽرائي هائيڊريٽ نه مليو. هتي ليبارٽريءَ ۾ سنڀال اهم آهي: نمي ۽ گرمي پد هائيڊريٽ جي استحڪام کي بدلائين ٿا، ۽ شديد پيهڻ فيز بدلائي يا ڪرسٽليت گهٽائي سگهي ٿو؛ تنهنڪري نسبتي نمي ۽ گرمي پد کي ڪنٽرول ڪري رڪارڊ ڪريو ۽ پيهڻ گهٽ ۾ گهٽ رکو. هائيڊريٽ جي ليبلنگ ۽ توريل وزن تي ان جي اثر بابت وڌيڪ بحث ميٿيلين بلو جي هائيڊريٽ صورتن ۽ ليبلنگ ۾ آهي.

UV-Vis جذب مددگار ڪردار ادا ڪري ٿو. سڃاتل وڌ ۾ وڌ جذب جا نقطا محلول جي متوقع رويي جي تصديق ڪن ٿا ۽ ڪنسنٽريشن بابت ڪم ممڪن بڻائين ٿا، پر متوقع موجي ڊيگهه تي جذب ڪندڙ نيرو محلول ميٿيلين بلو سان مطابقت ته رکي ٿو، ان کي ثابت نٿو ڪري، ڇاڪاڻ ته لاڳاپيل رنگ ڏيندڙ مادا به ويجهي موجي ڊيگهه تي جذب ڪن ٿا.

خريد ڪرڻ کان اڳ ڇا پڇجي

انهن فرقن کي خريداريءَ جي سوالن ۾ بدلايو. پڇو ته ڪهڙي لاٽ جي جاچ ٿي، ڪهڙي ٽيڪنڪ سڃاڻپ قائم ڪئي، ڇا HPLC ناخالصيءَ جي جاچ ۾ Azure B جو حوالياتي مادو استعمال ٿيو، ۽ ڇا هائيڊريٽ جي صورت جي جاچ ڪئي وئي يا رڳو فرض ڪئي وئي. سڀ کان اهم، پڇو ته سند مڪمل وضاحتي معيار ڍڪي ٿي يا رڳو چونڊيل جاچون. سرڪاري معيارنامي سان مطابقت جي دعويٰ ڪندڙ ڪيترائي وڪرو ڪندڙ رڳو ڳرن ڌاتن جي جاچ ڪن ٿا، جنهن سان سڃاڻپ، مقدار جي جاچ، نامياتي ناخالصين، محللن، ۽ خردجاندارن بابت سوال اڻجواب رهجي وڃن ٿا.

Blupreme، ميٿيلين بلو جي هڪ دواسازي ٺاهيندڙ سان ڀائيواري ۾، مڪمل USP وضاحتي معيار جي جاچ ڪري ٿو، جنهن ۾ سڃاڻپ، پاڪائي، نامياتي ناخالصيون، بچيل محلل، عنصري ناخالصيون، ساڙڻ کان پوءِ بچيل باقيات، خردجاندارن جون حدون، ۽ بيڪٽيريائي اينڊوٽوڪسن شامل آهن. هر بيچ لاءِ تجزيي جي عوامي سند Blupreme جي معيار جي جاچ تي شايع ڪئي وڃي ٿي، تنهنڪري مقدار جي جاچ جو بنياد ۽ ناخالصين جا نتيجا اندازي بدران سڌو پڙهي سگهجن ٿا. 100% جي ويجهو نتيجن لاءِ به حساب جو بنياد بيان ٿيڻ گهرجي، جيئن 100 سيڪڙو کان مٿي مقدار جي جاچ واري رهنمائي وضاحت ڪري ٿي. سڃاڻپ جي مطابقت جاچ جي شروعات ڪري ٿي. مڪمل رڪارڊ ان کي مڪمل ڪري ٿو.