Articol
Testul de reducere a albastrului de metilen pentru lichidul ruminal
O absolventă sună de la o fermă, cu o eprubetă albastră în mână. A adăugat albastru de metilen în lichidul ruminal acum zece minute, iar culoarea albastră este încă prezentă. Întreabă dacă ar trebui să îi administreze vacii mai mult colorant.
Această întrebare dezvăluie o înțelegere greșită a principiului testului. În testul de reducere a albastrului de metilen pentru lichidul ruminal, colorantul se adaugă în eprubetă, niciodată în animal. Întreaga analiză are loc în eprubetă. Măsurarea vitezei cu care dispare culoarea albastră oferă informații despre microbii din acea probă, nu despre un tratament de care ar avea nevoie animalul.
Confuzia este de înțeles, deoarece albastrul de metilen apare în trei contexte veterinare distincte. Acest articol le delimitează și arată cum se interpretează timpul de reducere împreună cu pH-ul, protozoarele, calitatea recoltării și semnele clinice.
Ce măsoară de fapt testul
Albastrul de metilen este albastru în forma oxidată și aproape incolor în forma redusă. Lichidul ruminal proaspăt de la un animal sănătos are un caracter puternic reducător, deoarece bacteriile anaerobe fermentează activ furajele. Când se amestecă o cantitate mică de colorant cu un astfel de lichid, metabolismul bacterian elimină culoarea în câteva minute.
Prin urmare, principiul de lucru este simplu: flora anaerobă activă elimină rapid culoarea albastră, iar flora inactivă sau afectată o elimină lent. Un timp scurt înseamnă o capacitate reducătoare mai mare în acea probă. Un timp prelungit indică o activitate microbiană diminuată, cu condiția ca proba să fi fost recoltată și manipulată corect.
Testul nu măsoară direct potențialul redox ruminal. Un studiu privind metodele de evaluare la bovine, care a comparat testul de reducere cu măsurători directe în milivolți, nu a găsit o corelație liniară între timpul de reducere și potențialul redox măsurat și a concluzionat că cele două nu trebuie considerate măsurători interschimbabile ale aceleiași variabile. Comparația completă este rezumată pe PubMed. Priviți testul de reducere ca pe o analiză funcțională a populației microbiene, nu ca pe un electrod ieftin.
Descrierea Merck/MSD a indigestiei simple la rumegătoare include timpul de reducere prelungit în același tablou cu pH-ul ruminal anormal și numărul redus de protozoare. Nicio valoare izolată nu stabilește diagnosticul. Tabloul de ansamblu îl stabilește.
O procedură standard la fața locului
Protocoalele diferă ușor între instituțiile de învățământ, așa că notați volumele și temperatura exacte folosite și comparați rezultatele numai în cadrul aceluiași protocol. O variantă predată pe scară largă este:
- Recoltați cel puțin 10 până la 20 mL de lichid ruminal proaspăt, reducând la minimum contaminarea cu salivă, expunerea la aer și răcirea. Efectuați testul prompt.
- Pregătiți albastru de metilen în concentrație de 0.03 procente, adică 0.3 mg per mL.
- Adăugați colorant în proporție de 5 procente din volumul lichidului. Aceasta înseamnă 1.0 mL de colorant la 20 mL de lichid sau 0.5 mL de colorant la 10 mL de lichid. Ambele variante dau același raport lichid-colorant de 20 la 1.
- Păstrați o a doua eprubetă cu lichid netratat din aceeași probă, ca martor de culoare.
- Amestecați ușor, porniți imediat cronometrul și mențineți eprubeta la o temperatură apropiată de cea corporală, în jur de 37 până la 39 de grade Celsius, în funcție de protocolul local.
- Notați timpul până când culoarea din eprubeta de test corespunde celei din eprubeta martor. La suprafața de contact cu aerul poate persista un inel albastru subțire, deoarece oxigenul reoxidează colorantul în acea zonă. Nu așteptați dispariția acestui inel.
Chimia redox a albastrului de metilen explică de ce contează oxigenul aici. Agitarea energică, o eprubetă cu deschidere largă sau o întârziere îndelungată permit pătrunderea oxigenului și mențin colorantul albastru mai mult decât s-ar întâmpla în rumen. Detaliile privind tehnica de recoltare a lichidului ruminal fără contaminare contează din același motiv. Saliva diluează proba și crește pH-ul, astfel că, atunci când folosesc o sondă gastrică, mulți clinicieni aruncă prima porțiune dacă volumul permite.
Ce măsoară diferitele observații
Timpul de reducere răspunde la o singură întrebare. Evaluarea ruminală de mai jos arată ce informații aduce fiecare observație făcută la fața locului. Folosiți întregul rând, nu o singură celulă.
| Observație | Ce măsoară | Constatare tipică la fața locului | Factori frecvenți care pot denatura interpretarea |
|---|---|---|---|
| Timpul de reducere a albastrului de metilen | Activitatea reducătoare funcțională a bacteriilor anaerobe din probă | La bovine, adesea 2 până la 6 minute; la ovine și caprine, adesea mai rapid, cu 6 minute folosite ca prag practic pentru o activitate adecvată, iar timpii de peste 10 minute fiind clar anormali | Probă rece, testată cu întârziere, aerată sau diluată cu salivă; substrat redus după anorexie prelungită; antimicrobiene administrate oral; comparații între rapoarte de colorant sau temperaturi diferite |
| pH-ul ruminal | Mediul chimic, încărcarea acidă sau alcalină | La bovinele hrănite cu furaje grosiere, adesea în jur de 6.0 până la 7.2; lucrările despre rumegătoarele mici citează adesea aproximativ 6.5 până la 7.5; rația și timpul scurs de la hrănire modifică valoarea | Contaminarea cu salivă crește pH-ul probelor recoltate prin sondă gastrică; pierderea dioxidului de carbon după recoltare; hrănirea cu cereale scade pH-ul |
| Numărul și motilitatea protozoarelor | Integritatea populației de ciliate, în special a formelor mari, sensibile la perturbări | Numeroase organisme de dimensiuni diferite, cu mișcări direcționale viguroase într-o picătură proaspătă și caldă | Răcirea încetinește mișcarea; acidoza severă poate elimina protozoarele; întârzierea face ca o probă normală să pară puțin activă |
| Mirosul, culoarea și consistența | Caracterul fermentației și contaminarea | Lichid ușor aromat, brun-verzui, ușor vâscos | Miros putrid sau acru în disbioza severă; lichid apos sau cu multă salivă după o recoltare necorespunzătoare |
| Contracțiile ruminale și apetitul | Funcția prestomacelor și aportul alimentar la nivelul întregului animal | Contracții regulate și rumegare constantă la un animal vioi | Schimbare recentă a rației, durere, deshidratare, boală sistemică |
Ideea esențială este în tabel. Un timp de reducere prelungit, împreună cu protozoare puțin active, pH anormal și contracții slabe, indică o diminuare reală a activității microbiene. Un timp prelungit izolat la un animal vioi, care rumegă și are protozoare viguroase, indică mai degrabă o problemă a probei decât a rumenului. Repetați recoltarea înainte de a interveni.
Interpretarea timpului împreună cu pH-ul și anamneza
Rația stabilește nivelul de referință. Rațiile bogate în concentrate fermentează rapid și pot elimina culoarea în aproximativ un minut, în timp ce rațiile pe bază de fân pot necesita câteva minute, chiar și la animale sănătoase. Așadar, un timp scurt nu dovedește în sine o stare de sănătate mai bună. El arată că o cantitate mai mare de substrat fermentescibil a întâlnit microbi activi.
Supraîncărcarea severă cu cereale întrerupe această tendință simplă. Fermentația inițială a carbohidraților poate fi intensă, apoi afectarea produsă de acid suprimă flora normală și protozoarele, iar timpul de reducere se prelungește. De aceea, o regulă didactică precizează că testul nu este valid când pH-ul ruminal este sub aproximativ 5.5. În acel moment, flora testată s-a modificat.
Un ghid practic pentru interpretarea tabloului:
- Un pH normal cu reducere în aproximativ 6 minute sugerează o floră activă funcțional.
- Un pH normal cu reducere mult prelungită sugerează inactivitate din cauza anorexiei, a efectului antimicrobienelor sau a unei probe compromise.
- Un pH ridicat cu reducere prelungită apare adesea după anorexie prelungită, cu puțin substrat disponibil, dar luați în considerare contaminarea cu salivă la recoltarea prin sondă.
- Un pH scăzut cu activitate protozoară redusă ridică suspiciunea de disbioză asociată carbohidraților. Recomandările privind interpretarea pH-ului ruminal sunt utile aici. Valorile sub 5.5, însoțite de alterarea stării generale, indică mai degrabă supraîncărcare cu cereale și acidoză severă decât indigestie simplă.
Notați întotdeauna administrarea orală recentă de tetracicline, ionoforii din furaje, tratamentele sistemice prelungite cu antimicrobiene, schimbările bruște ale rației, durata anorexiei și consumul de apă. Manualul MSD avertizează în mod explicit că tetraciclinele administrate oral pot diminua substanțial activitatea microflorei ruminale. Ionoforii modifică în mod intenționat populațiile bacteriene. Fără această anamneză, un timp prelungit nu poate fi interpretat.
Calitatea recoltării merită aceeași importanță. Cercetările controlate au constatat că probele recoltate prin sondă gastrică aveau un pH mai ridicat și concentrații mai mici de acizi grași volatili decât probele recoltate prin canulă de la aceleași animale, în mare parte din cauza salivei. La 60 de minute după recoltare, timpul de reducere se prelungise semnificativ pentru toate volumele testate, probele mici fiind cele mai afectate. Recoltați cel puțin 10 mL, testați în decurs de 30 de minute, efectuați testul de reducere la începutul evaluării, mențineți proba caldă și reduceți la minimum contactul cu aerul.
Trei utilizări care nu trebuie confundate
Același colorant, trei sisteme diferite.
În primul rând, analiza lichidului ruminal descrisă aici. Proba este lichidul ruminal recoltat. Colorantul se adaugă in vitro în concentrație de 0.03 procente. Criteriul final este timpul până la decolorare. Scopul este evaluarea activității reducătoare microbiene.
În al doilea rând, albastrul de metilen administrat unui rumegător viu. Exemplul consacrat este tratamentul intravenos al toxicozei cu nitrați sau nitriți însoțite de methemoglobinemie, în care medicamentul restabilește hemoglobina funcțională. Se aplică reguli privind doza, formularea, reziduurile și timpul de așteptare. Această decizie nu are nicio legătură cu cronometrarea unei eprubete. Dacă colorantul este folosit ca trasor in vivo într-o anumită procedură, principiul urmărește traseul colorantului, nu viteza cu care microbii ruminali îl reduc.
În al treilea rând, testul de reducere pentru lapte. Proba este laptele. Colorantul se adaugă în proba de lapte. Dispariția rapidă a culorii albastre indică, în general, o activitate microbiană mai mare și o capacitate de păstrare mai slabă, în timp ce reducerea lentă indică o calitate mai bună. Testul aparține microbiologiei alimentare și testării calității laptelui, nu medicinei ruminale, și nu reprezintă o numărătoare bacteriană.
Folosirea unor denumiri explicite previne erorile: timpul de reducere în lichidul ruminal, tratamentul sistemic cu albastru de metilen sau utilizarea ca trasor și testul de reducere pentru lapte. Regula de siguranță încape într-o singură propoziție. Colorantul destinat analizei ruminale rămâne în eprubeta de laborator, iar eprubeta se aruncă. Nu se administrează niciodată animalului pentru efectuarea testului.
O regulă concisă pentru consultația la fermă
Standardizați colorantul la 0.03 procente și 1 parte colorant la 20 de părți lichid, testați lichid proaspăt la o temperatură apropiată de cea corporală folosind un martor netratat și interpretați minutele împreună cu pH-ul, motilitatea protozoarelor, calitatea recoltării, rația, medicamentele, contracțiile, apetitul, fecalele și hidratarea. O valoare izolată nu stabilește niciodată diagnosticul de indigestie. Un tablou concordant îl stabilește.