Azul de metileno e fígado gordo: o que mostraram os estudos experimentais

Fígado gordo é uma designação para vários problemas diferentes. Numa pessoa, o fator desencadeante é o consumo intenso e prolongado de álcool. Noutra, é o excesso de nutrientes, com resistência à insulina e maior aporte de gordura ao fígado. Ao microscópio, ambos os casos podem mostrar simples acumulação de gordura, mas as causas a montante são diferentes. Essa diferença determina o que qualquer experiência pode demonstrar.

A literatura sobre azul de metileno e fígado gordo é reduzida e, quanto a esta questão, inteiramente pré-clínica. Três estudos em ratos e ratinhos são os mais citados, e nem todos apontam na mesma direção. Um estudo com alimentação à base de etanol corrigiu uma alteração redox, mas deixou a gordura hepática inalterada. Um estudo com dieta rica em gordura reduziu a gordura hepática em paralelo com uma alteração da sinalização. Um estudo em animais saudáveis encontrou resultados opostos de peroxidação lipídica no fígado e no rim. Lidos em conjunto, mostram por que razão três parâmetros devem permanecer separados: alteração redox, ativação da sinalização e acumulação de gordura no tecido.

Três parâmetros que são fáceis de confundir

Uma medida redox descreve a transferência de eletrões. A razão hepática de NAD+ para NADH indica se o ambiente celular está relativamente oxidado ou reduzido. A oxidação do etanol converte NAD+ em NADH, pelo que o consumo crónico de álcool reduz essa razão. Um corante que aceite eletrões pode fazê-la subir novamente. Isso é química, não é prova de menor acumulação de gordura.

Uma medida de sinalização descreve a regulação. A SIRT1 é uma enzima reguladora dependente de NAD+ que modifica proteínas envolvidas na função mitocondrial e no metabolismo dos lípidos. A AMPK atua como sensor de baixa energia que favorece a oxidação de combustíveis e limita a síntese de lípidos quando está ativada. Quando um artigo relata ativação hepática de SIRT1 pelo azul de metileno, está a relatar uma alteração reguladora. Ainda não está a relatar um resultado num doente.

Uma medida histológica ou bioquímica descreve o próprio fígado. Exemplos comuns incluem o teor de triglicéridos por grama de tecido, a coloração Oil Red O da gordura neutra, a avaliação com hematoxilina e eosina da balonização e da lesão e a atividade plasmática da ALT. Apenas esta terceira classe responde à questão de saber se a esteatose hepática melhorou com azul de metileno nessa experiência.

Manter estas classes separadas evita a interpretação errada mais comum: um resultado redox ou de sinalização favorável não equivale a menos fígado gordo.

Modelo com etanol: redox corrigido, gordura inalterada

O resultado negativo mais claro provém de um estudo de alimentação crónica com etanol em ratos Wistar machos. Os animais receberam etanol como parte de uma dieta líquida, aumentando até 36 por cento da energia total, com controlos alimentados de forma pareada a receberem glucose em substituição da energia fornecida pelo etanol. Um grupo com etanol e um grupo de controlo receberam também azul de metileno a 130 mg por litro de dieta, cerca de 42 mg por kg por dia, do dia 5 ao dia 30.

O estado redox foi estimado a partir de pares de metabolitos padrão: lactato para piruvato no citosol e 3-hidroxibutirato para acetoacetato nas mitocôndrias. No início da alimentação com uma dose elevada de etanol, os grupos com etanol apresentaram grandes alterações, com a razão citosólica de NAD+ para NADH reduzida em cerca de 62 por cento e a mitocondrial em cerca de 71 por cento, além de valores mais elevados de glicerol 3-fosfato. O azul de metileno reverteu em grande medida essas alterações e repôs o glicerol 3-fosfato para valores próximos dos controlos, sem alterar a ingestão de etanol, o aumento de peso corporal ou o etanol sérico.

A gordura hepática contou uma história diferente. No dia 12, antes de uma acumulação importante de gordura, os triglicéridos não diferiam entre os grupos. No dia 27, os grupos com etanol apresentavam grandes aumentos de triglicéridos, independentemente do azul de metileno. No dia 30, os lípidos totais aumentaram cerca de 89 por cento e os triglicéridos cerca de 196 por cento nos animais alimentados com etanol, novamente sem efeito do corante. A infiltração adiposa centrolobular tinha o mesmo aspeto com ou sem tratamento. Os autores concluíram que a alteração redox induzida pelo etanol não é a causa principal do fígado gordo após alimentação prolongada neste modelo. Compreender como os resultados em animais e células se traduzem em risco humano ajuda neste caso: um mecanismo pode ser real e, ainda assim, não controlar o resultado.

Este é o estudo a citar quando alguém afirma que qualquer correção redox tem necessariamente de eliminar a gordura hepática. Neste desenho experimental, isso não aconteceu.

Modelo metabólico: sinalização e menos gordura, em ratinhos

Um quadro diferente surge num estudo em hepatócitos e ratinhos com dieta rica em gordura centrado na SIRT1 e na AMPK. Em células HepG2, células AML-12 e hepatócitos primários de rato, o azul de metileno aumentou a razão de NAD+ para NADH, aumentou a proteína SIRT1, reduziu a acetilação do regulador PGC-1alpha, aumentou o conteúdo de DNA mitocondrial e o consumo de oxigénio e ativou a AMPK, com aumentos subsequentes de CPT-1 e PPARalpha. Quando a SIRT1 foi silenciada, perdeu-se a ativação da AMPK, o que liga esta cadeia à SIRT1 nesse sistema celular. O corante também contrariou sinais lipogénicos do agonista de LXR T0901317 e da exposição ao palmitato, incluindo a indução de SREBP-1c, FAS e ACC.

A componente animal utilizou ratinhos C57BL/6 machos alimentados com uma dieta de 60 por cento de gordura durante 8 semanas, com azul de metileno administrado por via oral quatro vezes por semana durante as últimas 4 semanas, a 3 ou 10 mg por kg por dia. Os ratinhos tratados apresentaram menos coloração Oil Red O, menos triglicéridos hepáticos, menos balonização e degeneração adiposa na histologia e ALT plasmática mais baixa do que os ratinhos não tratados com dieta rica em gordura. O trabalho farmacocinético no mesmo artigo encontrou uma biodisponibilidade oral próxima de 31 a 35 por cento, com absorção intestinal quase completa, mas metabolismo substancial, e a razão tecido-plasma mais elevada no fígado, o que torna um efeito hepático pelo menos plausível em termos de distribuição.

Trata-se de um verdadeiro sinal antiesteatótico, mas os seus limites são estreitos. É uma experiência curta em ratinhos, com 9 a 10 animais por grupo, uma única dieta, duas doses e quatro semanas de tratamento. Avalia características de esteatose metabólica e esteato-hepatite, não doença relacionada com o álcool, e não avalia cirrose, reversão da fibrose nem qualquer resultado em seres humanos. O papel das medidas mitocondriais e redox na interpretação destes resultados é assinalá-las como suporte de uma hipótese, não como uma dose ou protocolo.

Retrato de tecido saudável: mesma dose, órgãos opostos

Um terceiro estudo é frequentemente usado em alegações sobre o fígado onde não se enquadra. Numa experiência de 30 dias em ratos Wistar fêmeas saudáveis, cinco animais receberam 1 mM de azul de metileno na água de beber e cinco serviram de controlos. A superóxido dismutase, a catalase e a glutationa reduzida não se alteraram no fígado nem no rim. A peroxidação lipídica aumentou ligeiramente no fígado e diminuiu no rim. A ALT sérica e a creatinina diminuíram, sem alteração do azoto ureico no sangue.

A interpretação rigorosa é de especificidade tecidular em animais saudáveis, não de tratamento de uma doença. A mesma exposição pareceu ligeiramente pró-oxidante segundo um marcador no fígado e ligeiramente protetora segundo o mesmo marcador no rim, enquanto as defesas antioxidantes padrão permaneceram estáveis. Com cinco animais por grupo e sem modelo de doença, este artigo alerta contra a classificação do azul de metileno como antioxidante hepático geral. Também mostra por que razão as alterações das enzimas hepáticas precisam de um contexto de doença definido antes de significarem melhoria.

Comparação das três experiências no fígado

A tabela torna visível o ponto principal. Corante azul semelhante, biologia diferente. O estudo com etanol separa o sucesso redox da ausência de redução de gordura. O estudo da dieta reúne melhoria da sinalização e da gordura num único modelo. O estudo em animais saudáveis mostra que os marcadores redox podem deslocar-se em direções opostas consoante o órgão.

Por que razão não resulta daqui uma alegação de tratamento

Nenhum destes estudos incluiu pessoas com fígado gordo. As doses, vias e durações diferem entre os artigos e não se convertem num regime humano por simples escalonamento. Os pequenos tamanhos dos grupos, sobretudo três animais por ponto temporal redox no trabalho com etanol e cinco por grupo no trabalho em animais saudáveis, deixam uma incerteza substancial. Sexo, estirpe, composição da dieta e momento do tratamento relativamente à lesão também diferem. E os dois modelos de doença representam causas a montante diferentes, pelo que o resultado positivo com a dieta não corrige o resultado negativo com etanol, nem o inverso.

Para qualquer pessoa com doença hepática diagnosticada, a leitura mais urgente é de precaução e não terapêutica. A visão geral das precauções renais e hepáticas relativas ao azul de metileno explica por que razão a disfunção de órgãos altera as questões de segurança, mesmo quando um artigo em animais parece favorável. Leve ao médico o diagnóstico, análises recentes, o produto e a via exatos e a lista completa de medicamentos, e pergunte que evidência sustenta esse produto para esse objetivo numa pessoa com esse grau de disfunção.

Em resumo: o azul de metileno alterou o estado redox hepático num modelo com etanol sem reduzir a gordura acumulada, ativou a SIRT1 e a AMPK enquanto reduzia a gordura num modelo metabólico em ratinhos e mostrou efeitos redox específicos de cada órgão em ratos saudáveis. Trata-se de um conjunto de pistas para investigação, não de um tratamento estabelecido para fígado gordo.