Straipsnis
Metileno mėlynojo redukcijos mėginys didžiojo prieskrandžio skysčiui
Absolventė skambina iš ūkio, rankoje laikydama mėgintuvėlį su mėlynu skysčiu. Prieš dešimt minučių ji į didžiojo prieskrandžio skystį įpylė metileno mėlynojo, tačiau mėlyna spalva vis dar neišnyko. Ji klausia, ar turėtų duoti karvei daugiau dažiklio.
Šis klausimas atskleidžia klaidingą supratimą. Atliekant metileno mėlynojo redukcijos mėginį didžiojo prieskrandžio skysčiui, dažiklis pilamas į mėgintuvėlį, o ne duodamas gyvūnui. Visas tyrimas vyksta mėgintuvėlyje. Matuojant, kaip greitai išnyksta mėlyna spalva, sužinoma apie tame mėginyje esančius mikroorganizmus, o ne apie gyvūnui reikalingą gydymą.
Ši painiava suprantama, nes metileno mėlynasis naudojamas trijuose skirtinguose veterinarijos kontekstuose. Šiame straipsnyje jie atskiriami ir paaiškinama, kaip vertinti redukcijos trukmę kartu su pH, pirmuonimis, mėginio kokybe ir klinikiniais požymiais.
Ką iš tikrųjų matuoja šis mėginys
Oksiduotas metileno mėlynasis yra mėlynas, o redukuotas – beveik bespalvis. Šviežias sveiko gyvūno didžiojo prieskrandžio skystis pasižymi stipriomis redukuojančiomis savybėmis, nes anaerobinės bakterijos aktyviai fermentuoja pašarą. Į tokį skystį įmaišius nedidelį kiekį dažiklio, dėl bakterijų metabolizmo spalva išnyksta per kelias minutes.
Taigi veikimo principas paprastas: aktyvi anaerobinė mikroflora mėlyną spalvą panaikina greitai, o neaktyvi arba pažeista – lėtai. Trumpa trukmė reiškia didesnę to mėginio redukuojamąją gebą. Pailgėjusi trukmė rodo nuslopintą mikroorganizmų aktyvumą, jei mėginys buvo tinkamai paimtas ir tvarkomas.
Šis mėginys tiesiogiai nematuoja didžiojo prieskrandžio oksidacijos ir redukcijos potencialo. Galvijų tyrimo metodų studijoje, kurioje redukcijos mėginys buvo lyginamas su tiesioginiais matavimais milivoltais, nenustatyta tiesinės koreliacijos tarp redukcijos trukmės ir išmatuoto oksidacijos ir redukcijos potencialo. Padaryta išvada, kad šių rodiklių negalima laikyti lygiaverčiais to paties kintamojo matavimais. Visas palyginimas apibendrintas PubMed. Redukcijos mėginį vertinkite kaip funkcinį mikroorganizmų populiacijos tyrimą, o ne kaip pigų elektrodą.
Merck/MSD atrajotojų paprastojo virškinimo sutrikimo apraše pailgėjusi redukcijos trukmė vertinama kartu su nenormaliu didžiojo prieskrandžio pH ir sumažėjusiu pirmuonių skaičiumi. Nė vienas atskiras rodiklis nenulemia diagnozės. Ją lemia požymių visuma.
Standartinė procedūra prie gyvūno
Skirtingose mokymo įstaigose taikomi protokolai šiek tiek skiriasi, todėl užrašykite tikslius naudojamus tūrius bei temperatūrą ir lyginkite tik pagal tą patį protokolą gautus rezultatus. Vienas plačiai mokomas variantas:
- Paimkite bent 10–20 mL šviežio didžiojo prieskrandžio skysčio, kiek įmanoma sumažindami seilių priemaišas, sąlytį su oru ir atvėsimą. Ištirkite nedelsdami.
- Paruoškite 0.03 procento metileno mėlynojo tirpalą, t. y. 0.3 mg viename mL.
- Įpilkite dažiklio tiek, kad jo tūris sudarytų 5 procentus skysčio tūrio. Tai yra 1.0 mL dažiklio į 20 mL skysčio arba 0.5 mL dažiklio į 10 mL skysčio. Abiem atvejais skysčio ir dažiklio santykis yra toks pat – 20 ir 1.
- Spalvai palyginti pasilikite antrą mėgintuvėlį su to paties mėginio skysčiu be dažiklio.
- Švelniai sumaišykite, iš karto įjunkite laikmatį ir laikykite mėgintuvėlį kūno temperatūrai artimoje temperatūroje, maždaug 37–39 laipsnių Celsijaus, priklausomai nuo vietinio protokolo.
- Užrašykite laiką, per kurį tiriamojo mėgintuvėlio spalva susilygina su kontrolinio mėgintuvėlio spalva. Skysčio ir oro sąlyčio vietoje gali išlikti plonas mėlynas žiedas, nes deguonis ten vėl oksiduoja dažiklį. Nelaukite, kol šis žiedas išnyks.
Metileno mėlynojo oksidacijos ir redukcijos chemija paaiškina, kodėl čia svarbus deguonis. Stipriai kratant, naudojant plačiai atvirą mėgintuvėlį arba ilgai delsiant, į skystį patenka deguonies, todėl dažiklis išlieka mėlynas ilgiau, nei išliktų pačiame didžiajame prieskrandyje. Dėl tos pačios priežasties svarbios tinkamo didžiojo prieskrandžio skysčio paėmimo technikos detalės. Seilės praskiedžia mėginį ir padidina pH, todėl naudojant skrandžio zondą daugelis klinicistų pirmąją porciją išpila, jei to leidžia paimtas tūris.
Ką parodo skirtingi stebėjimai
Redukcijos trukmė atsako tik į vieną klausimą. Toliau pateiktas didžiojo prieskrandžio vertinimas parodo, kokios informacijos suteikia kiekvienas prie gyvūno atliekamas stebėjimas. Vertinkite visą eilutę, o ne vieną langelį.
| Stebėjimas | Ką matuoja | Tipinis radinys tiriant prie gyvūno | Dažni rezultatą iškreipiantys veiksniai |
|---|---|---|---|
| Metileno mėlynojo redukcijos trukmė | Mėginyje esančių anaerobinių bakterijų funkcinis redukuojamasis aktyvumas | Galvijams dažnai 2–6 minutės; avims ir ožkoms dažnai trumpiau; 6 minutės laikomos praktine pakankamo aktyvumo riba, o ilgiau nei 10 minučių trunkanti redukcija – aiškiai nenormalia | Šaltas, pavėluotai ištirtas, aeruotas arba seilėmis praskiestas mėginys; mažai substrato po ilgalaikio apetito nebuvimo; geriamieji antimikrobiniai preparatai; rezultatų, gautų naudojant skirtingus dažiklio santykius ar temperatūras, lyginimas |
| Didžiojo prieskrandžio pH | Cheminę aplinką, rūgščių arba šarmų apkrovą | Stambiaisiais pašarais šeriamų galvijų pH dažnai apie 6.0–7.2; smulkiųjų atrajotojų literatūroje dažnai nurodoma apie 6.5–7.5; vertė kinta priklausomai nuo raciono ir laiko po šėrimo | Seilių priemaišos padidina skrandžio zondu paimtų mėginių pH; anglies dioksido netekimas po paėmimo; šėrimas grūdais mažina pH |
| Pirmuonių skaičius ir judrumas | Blakstienuotųjų pirmuonių populiacijos būklę, ypač didžiųjų formų, jautrių sutrikimams | Šiltame šviežio skysčio laše gausu įvairaus dydžio organizmų, aktyviai ir kryptingai judančių | Atvėsimas sulėtina judėjimą; sunki acidozė gali sunaikinti pirmuonis; dėl delsimo normalus mėginys gali atrodyti vangus |
| Kvapas, spalva ir konsistencija | Fermentacijos pobūdį ir užterštumą | Šiek tiek aromatingas, žalsvai rudas, nestipriai klampus skystis | Puvėsių arba rūgštus kvapas esant sunkiai disbiozei; vandeningas arba su gausiomis seilių priemaišomis skystis dėl netinkamo paėmimo |
| Didžiojo prieskrandžio susitraukimai ir apetitas | Bendrą gyvūno prieskrandžių funkciją ir pašaro suvartojimą | Reguliarūs susitraukimai ir tolygus atrajojimas, kai gyvūnas žvalus | Neseniai pakeistas racionas, skausmas, dehidratacija, sisteminė liga |
Svarbiausia – ši lentelė. Pailgėjusi redukcijos trukmė kartu su vangiais pirmuonimis, nenormaliu pH ir silpnais susitraukimais rodo tikrą mikroorganizmų aktyvumo slopinimą. Vien pailgėjusi trukmė žvaliam, atrajojančiam gyvūnui, kurio mėginyje pirmuonys aktyvūs, rodo veikiau mėginio, o ne didžiojo prieskrandžio problemą. Prieš imdamiesi veiksmų, mėginį paimkite pakartotinai.
Trukmės vertinimas kartu su pH ir anamneze
Racionas lemia pradinį lygį. Racionai, kuriuose gausu koncentruotųjų pašarų, fermentuojami greitai ir dažiklio spalva gali išnykti maždaug per minutę, o šeriant šienu tai gali užtrukti kelias minutes net ir sveikiems gyvūnams. Taigi trumpa trukmė savaime neįrodo geresnės sveikatos. Ji rodo, kad daugiau fermentuojamo substrato pateko aktyviems mikroorganizmams.
Sunkus persiėdimas grūdais šią paprastą tendenciją sutrikdo. Iš pradžių angliavandenių fermentacija gali būti intensyvi, tačiau vėliau rūgščių sukeliama žala slopina normalią mikroflorą ir pirmuonis, todėl redukcija pailgėja. Dėl to pagal vieną mokymo taisyklę mėginys laikomas netinkamu, kai didžiojo prieskrandžio pH yra mažesnis nei maždaug 5.5. Tuo metu tiriama mikroflora jau yra pasikeitusi.
Praktinės požymių derinių vertinimo gairės:
- Normalus pH ir redukcija per maždaug 6 minutes rodo funkciškai aktyvią mikroflorą.
- Normalus pH ir ryškiai pailgėjusi redukcija rodo neaktyvumą dėl apetito nebuvimo, antimikrobinio poveikio arba prastos mėginio kokybės.
- Aukštas pH ir pailgėjusi redukcija dažnai pasitaiko po ilgalaikio apetito nebuvimo, kai trūksta substrato, tačiau reikia įvertinti ir galimas seilių priemaišas naudojant zondą.
- Žemas pH ir sumažėjęs pirmuonių aktyvumas kelia įtarimą dėl su angliavandeniais susijusios disbiozės. Čia padeda didžiojo prieskrandžio pH vertinimo gairės. Mažesnės nei 5.5 vertės kartu su bendru gyvūno būklės slopinimu rodo ne paprastąjį virškinimo sutrikimą, o persiėdimą grūdais ir sunkią acidozę.
Visada užrašykite neseniai vartotus geriamuosius tetraciklinus, pašaruose esančius jonoforus, ilgalaikį sisteminių antimikrobinių preparatų vartojimą, staigius raciono pokyčius, apetito nebuvimo trukmę ir vandens suvartojimą. MSD vadove konkrečiai įspėjama, kad geriamieji tetraciklinai gali gerokai nuslopinti didžiojo prieskrandžio mikroflorą. Jonoforais sąmoningai keičiama bakterijų populiacijų sudėtis. Be šios anamnezės pailgėjusios trukmės neįmanoma interpretuoti.
Tokią pačią svarbą reikia teikti mėginio paėmimo kokybei. Kontroliuojamame tyrime nustatyta, kad tų pačių gyvūnų skrandžio zondu paimtų mėginių pH buvo aukštesnis, o lakiųjų riebalų rūgščių kiekis mažesnis nei per kaniulę paimtų mėginių, daugiausia dėl seilių priemaišų. Praėjus 60 minučių po paėmimo, visų tirtų tūrių mėginių redukcijos trukmė reikšmingai pailgėjo, o labiausiai buvo paveikti maži mėginiai. Paimkite bent 10 mL, ištirkite per 30 minučių, redukcijos mėginį atlikite tyrimų pradžioje, laikykite mėginį šiltai ir kuo labiau ribokite sąlytį su oru.
Trys naudojimo būdai, kurių negalima painioti
Tas pats dažiklis, trys skirtingos sistemos.
Pirma – čia aprašytas didžiojo prieskrandžio skysčio tyrimas. Tiriamoji medžiaga yra paimtas didžiojo prieskrandžio skystis. Dažiklis pridedamas in vitro, naudojant 0.03 procento tirpalą. Galutinis rodiklis yra laikas iki spalvos išnykimo. Tikslas – įvertinti mikroorganizmų redukuojamąjį aktyvumą.
Antra – metileno mėlynojo skyrimas gyvam atrajotojui. Nusistovėjęs pavyzdys yra intraveninis gydymas apsinuodijus nitratais arba nitritais ir išsivysčius methemoglobinemijai, kai vaistas atkuria funkcinį hemoglobiną. Taikomi dozės, preparato sudėties, likučių ir išlaukos reikalavimai. Toks sprendimas neturi nieko bendra su laiko matavimu mėgintuvėlyje. Jei konkrečios procedūros metu dažiklis naudojamas kaip in vivo žymuo, svarbu, kur jis patenka, o ne kaip greitai didžiojo prieskrandžio mikroorganizmai jį redukuoja.
Trečia – pieno redukcijos mėginys. Tiriamoji medžiaga yra pienas. Dažiklis pridedamas į pieno mėginį. Greitas mėlynos spalvos išnykimas paprastai rodo didesnį mikroorganizmų aktyvumą ir prastesnį išsilaikymą, o lėta redukcija – geresnę kokybę. Tai maisto mikrobiologijos ir pieno kokybės tyrimų, o ne didžiojo prieskrandžio medicinos metodas; juo bakterijos neskaičiuojamos.
Aiškūs pavadinimai padeda išvengti klaidų: didžiojo prieskrandžio skysčio redukcijos trukmė, sisteminis gydymas metileno mėlynuoju arba jo naudojimas kaip žymens ir pieno redukcijos mėginys. Saugos taisyklė telpa į vieną sakinį. Didžiojo prieskrandžio tyrimui skirtas dažiklis lieka laboratoriniame mėgintuvėlyje, o šis po tyrimo išmetamas. Atliekant šį mėginį, dažiklis niekada neduodamas gyvūnui.
Trumpa taisyklė skambučiui iš ūkio
Standartizuokite dažiklį: naudokite 0.03 procento tirpalą ir 1 dalį dažiklio 20 dalių skysčio, šviežią skystį tirkite kūno temperatūrai artimoje temperatūroje, lygindami su kontroliniu mėginiu be dažiklio, o trukmę minutėmis vertinkite kartu su pH, pirmuonių judrumu, mėginio paėmimo kokybe, racionu, vaistais, susitraukimais, apetitu, išmatomis ir hidratacijos būkle. Vienas skaičius niekada nenustato virškinimo sutrikimo diagnozės. Ją lemia tarpusavyje deranti požymių visuma.