Ar metileno mėlis sukelia vėžį? Toksikologiniai duomenys

Ilgalaikiuose eksperimentuose su gyvūnais metileno mėlis buvo siejamas su navikų signalais, o keliuose laboratoriniuose genetinės žalos tyrimuose gauti teigiami rezultatai. Šie radiniai verti dėmesio. Jie nenustato tikimybės, kad po konkrečios ekspozicijos žmogui išsivystys vėžys.

2016 m. paskelbtame IARC vertinime metileno mėlis priskirtas 3 grupei, o tai reiškia, kad jo kancerogeniškumo žmonėms nebuvo galima klasifikuoti. Darbo grupė neturėjo duomenų apie žmonių vėžį ir gyvūnų tyrimų įrodymus įvertino kaip ribotus. 3 grupė nereiškia, kad medžiaga įrodyta kaip nekenksminga. Lygiai taip pat gyvūnų tyrimo radinys nereiškia, kad kiekviena žmogaus ekspozicija yra įrodyta vėžio priežastis.

Trys klausimai, į kuriuos reikia atsakyti atskirai

Kancerogeniškumas susijęs su navikų išsivystymu. Ilgalaikiame gyvūnų tyrime galima nustatyti navikų dėsningumus po apibrėžtos ekspozicijos. Genotoksiškumas susijęs su genetinės medžiagos pažeidimu arba susijusiais ląsteliniais reiškiniais. Teigiamas mutacijų tyrimo rezultatas yra įspėjamasis signalas, tačiau jis tiesiogiai neparodo vėžio atvejų skaičiaus žmonėms. Rizika žmonėms susijusi su žalos tikimybe realiomis ekspozicijos sąlygomis.

Šiems klausimams reikia skirtingų matavimų. Bakterijų mutantų skaičiavimas, pelių kraujo ląstelių tyrimas ir navikų diagnozavimas skrodimo metu nėra tarpusavyje pakeičiami vertinamieji kriterijai. Taip pat gydymo eksperimentas, rodantis, kad medžiaga pažeidžia vėžines ląsteles, neparodo, ar kartotinė ekspozicija gali inicijuoti navikus sveikame audinyje. Atskirame straipsnyje apie metileno mėlio tyrimus vėžio srityje aptariami teiginiai apie gydymą.

Tyrimų palyginimas: faktinės lėtinės ekspozicijos

Pagrindiniame eksperimente naudotas metileno mėlio trihidratas, duodamas 0.5% vandeninėje metilceliuliozėje peroraliniu zondu, t. y. išmatuotas kiekis per vamzdelį suleistas į skrandį. Kiekvienoje lėtinio tyrimo dozės grupėje buvo po 50 kiekvienos rūšies patinų ir 50 patelių. Remiantis Auerbach ir kolegų tyrimo ataskaita, medžiaga buvo skiriama penkias dienas per savaitę dvejus metus.

Lentelėje išlaikytos NTP konkrečioms rūšims pateiktos išvados. Kiekiai nurodyti kaip tiriamos medžiagos miligramai vienam gyvūno kūno svorio kilogramui dozavimo dienomis, o ne kaip rekomendacijos žmonėms. Nulinės dozės gyvūnai gavo nešiklį.

Modelis	Dozių grupės, mg/kg	Vartojimo būdas ir trukmė	NTP išvada ir svarbus radinys
F344/N žiurkių patinai	0, 5, 25, 50	Peroralinis zondas; penkias dienas/savaitę; dvejus metus	Tam tikrų įrodymų: padaugėjo kasos salelių ląstelių adenomų ir bendras adenomų/karcinomų skaičius.
F344/N žiurkių patelės	0, 5, 25, 50	Tas pats režimas	Šiomis sąlygomis kancerogeninio aktyvumo įrodymų nenustatyta.
B6C3F1 pelių patinai	0, 2.5, 12.5, 25	Peroralinis zondas; penkias dienas/savaitę; dvejus metus	Tam tikrų įrodymų: padaugėjo plonosios žarnos karcinomų ir bendras adenomų/karcinomų skaičius. Piktybinė limfoma taip pat galėjo būti susijusi.
B6C3F1 pelių patelės	0, 2.5, 12.5, 25	Tas pats režimas	Nevienareikšmiai įrodymai: nedidelis piktybinės limfomos atvejų padidėjimas.

„Tam tikrų įrodymų“ yra NTP kategorija, žyminti teigiamą eksperimentinį radinį, kurio įrodymų stiprumas mažesnis nei „aiškių įrodymų“. „Nevienareikšmiai“ apibūdina neapibrėžtą radinį. Šios kategorijos nusako įrodymų stiprumą, o ne procentinę riziką ar kancerogeno stiprumo reitingą.

Žiurkių patinų rezultatai nerodė nuoseklaus didėjimo didėjant dozei. Kasos salelių adenoma arba karcinoma nustatyta 4/50 kontrolinės grupės gyvūnų ir atitinkamai 9/50, 14/50 bei 8/50 gyvūnų didėjančių dozių grupėse. Paskelbtame straipsnyje statistinis reikšmingumas nurodytas tik vidutinei dozei. Todėl paprastas tiesinis paaiškinimas būtų netikslus; tai neįrodo, kad didžiausia dozė turėjo apsauginį poveikį. Adenoma yra gerybinis navikas, o karcinoma – piktybinis. Jungtinio vertinamojo kriterijaus negalima apibūdinti taip, tarsi kiekvienas įskaičiuotas navikas būtų buvęs vėžys.

Kodėl skirtingos santraukos skamba prieštaringai

Dabartinėje PROVAYBLUE skyrimo informacijoje pateikiami žiurkių patinų kasos radiniai, tačiau nenurodoma su vaistu susijusių neoplastinių radinių pelėms. Moksliniame straipsnyje teigiama, kad pelių neoplazijų padidėjimas nebuvo statistiškai reikšmingas, tačiau pažymimos teigiamos tendencijos. Nepaisant to, NTP pelėms priskyrė pirmiau nurodytas kategorijas.

IARC gyvūnų tyrimų analizėje paaiškinamas svarbus statistinis skirtumas: pelių patinų žarnyno radiniai rodė reikšmingas tendencijas didėjant dozei, tačiau atskiros dozuotos grupės poriniuose palyginimuose su kontroline grupe reikšmingai nesiskyrė. Bendro dėsningumo visose dozėse tikrinimas skiriasi nuo kiekvienos grupės tikrinimo atskirai. Skaitytojai turėtų išlaikyti šaltinio formuluotę, o ne suspausti visus šiuos radinius į teiginius „pelėms išsivystė vėžys“ arba „pelių tyrimas buvo neigiamas“. Nė vienas iš jų nepateikia išmatuoto žmonių vėžio dažnio.

Tyrimų palyginimas: genetinės žalos vertinamieji kriterijai

NTP Technical Report 540 genetinės toksikologijos skyriuje aprašoma kitokia eksperimentų grupė. S9 yra laboratorinis mišinys, kuriame yra kepenų fermentų ir kuris naudojamas metabolinei aktyvacijai modeliuoti. Jo buvimas nepaverčia ląstelių tyrimo viso organizmo ekspozicijos tyrimu.

Tyrimo sistema	Faktinės ekspozicijos sąlygos	Matuotas vertinamasis kriterijus ir rezultatas
Bakterijų mutacijų tyrimai, antroji tirta partija	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; su žiurkių kepenų S9 ir be jo	Tirtose padermėse padaugėjo mutacijų.
Kultivuotos kininio žiurkėno kiaušidžių ląstelės	Seserinių chromatidžių mainų tyrimas apėmė 0.17–2.5 µg/mL be S9 ir iki 5 µg/mL su S9; chromosomų aberacijų tyrime naudota 4.7–22 µg/mL	Teigiami seserinių chromatidžių mainų ir chromosomų aberacijų rezultatai.
Pelių patinai, ūminis eksperimentas	Vienkartinė intraperitoninė injekcija: 25, 50 arba 150 mg/kg; mėginiai po 48 valandų	Mikronukleusus turinčių eritrocitų kaulų čiulpuose ar kraujyje nepadaugėjo.
Pelių patinai ir patelės, kartotinis eksperimentas	Peroralinis zondas: 25, 50, 100 arba 200 mg/kg; penkias dienas/savaitę tris mėnesius	Periferiniame kraujyje mikronukleusus turinčių eritrocitų nepadaugėjo.

Mikronukleusas yra nedidelis papildomas branduolinis kūnelis, galintis atspindėti chromosomos lūžį arba praradimą ląstelei dalijantis. Neigiamas kraujo ląstelių tyrimo rezultatas atsako į šį konkretų klausimą tirtose ląstelėse. Jis negali atmesti visų rūšių DNR pažeidimų visuose organuose. Ir priešingai, teigiamas kultivuotų ląstelių tyrimas neparodo, kokia koncentracija buvo pasiekta žmogaus audiniuose.

Skyrimo informacijoje taip pat užfiksuotas šis bendras dėsningumas: teigiami bakterijų ir kultivuotų ląstelių tyrimai, neigiami pelių mikronukleusų tyrimai. Metileno mėlio apibūdinimas tiesiog kaip „genotoksiško“ arba „negenotoksiško“ pašalina interpretacijai svarbią informaciją.

Ką tai reiškia žmogaus ekspozicijai

Šie tyrimai nepateikia patvirtintos saugios nuo vėžio dienos ribinės vertės žmonėms. Žiurkėms skirtos dozės padalijimas iš kūno svorio koeficiento neišspręstų absorbcijos, metabolizmo, vartojimo būdo, ekspozicijos dažnio ar viso gyvenimo trukmės skirtumų. Taip būtų gautas perskaičiuotas kiekis, o ne saugumo įrodymas.

Dvejų metų eksperimentas naudojant peroralinį zondą ir trumpas mediciniškai prižiūrimas intraveninis gydymas atsako į skirtingus klausimus. Šis skirtumas neleidžia tiesiogiai ekstrapoliuoti skaičių, tačiau nepanaikina gyvūnų tyrimų radinių. Naudingas vertinimas prasideda nuo tikslaus junginio ir preparato, kiekio, vartojimo būdo, dažnio, trukmės ir vartojimo priežasties. Formuluotė „keli lašai“ nenurodo nei koncentracijos, nei išmatuoto tūrio.

Jei metileno mėlis buvo skirtas dėl medicininės priežasties, vien navikų radiniai negali nustatyti, ar to gydymo nauda buvo didesnė už riziką. Jei svarstomas kartotinis pasirenkamasis vartojimas, neišmatuotos ilgalaikės vėžio rizikos negalima apibūdinti kaip nulinės. Skubesni klausimai, įskaitant vaistų sąveikas ir polinkį į hemolizę, aptariami straipsnyje apie šalutinį poveikį ir kontraindikacijas.

Daugiau informacijos rasite tyrimų bibliotekoje, kurioje galima atskirti tyrimus su žmonėmis nuo eksperimentų su gyvūnais ir ląstelėmis. Esminis klausimas vertinant kiekvieną publikaciją yra tai, kokia ekspozicija buvo tiriama ir koks rezultatas iš tikrųjų buvo matuojamas.