Artikel
Fierwung mat Methylenblo: Mikroskopiemethoden an en Atlas mat reelle Biller
D'Fierwung mat Methylenblo mécht zellulär Eegenschaften, déi soss nëmme schwaach siichtbar sinn, an der Hellfeldmikroskopie méi einfach z'ënnerscheeden. Si kann de Schüler hëllefen, de Kär vun enger Wangenzell ze fannen oder d'Konturen an d'Uerdnung vu Mikroorganismen z'ënnersichen. E bloen Objet ass awer eng Observatioun. Den Organismus ze benennen, en ze moossen an ze entscheeden, ob en op eng Krankheet hiweist, si getrennten Aufgaben.
D'Titelbild illustréiert de Prinzip vum Kontrast. Den Atlas hei drënner enthält reell Fotoe vu separat dokumentéierte Prouwen, mat hiren urspréngleche Quellenangaben.
Wat mécht Methylenblo siichtbar?
Methylenblo ass e basesche Faarfstoff: säi faarwegen Ion huet eng positiv Laaschtung. Wéi OpenStax a senger Beschreiwung vun der Fierwung vu Prouwen erkläert, interagéiere basesch Faarfstoffer mat negativ geluedenem Zellmaterial a kënnen Zelle virun engem méi hellen Hannergrond ervirhiewen. A gëeegente Preparater betount Methylenblo Beräicher, déi räich un Nukleinsaieren sinn, an aner Strukturen, déi de Faarfstoff bannen.
Bei enger einfacher Fierwung suergt ee Faarfstoff fir Kontrast. Verschidden Organisme kënnen dofir blo ausgesinn, ouni dee selwechten Organismus ze sinn. Déi nëtzlech Froen sinn am Ufank beschreiwend: Sinn d'Objete ronn oder länglech, eenzel oder a Gruppen, gläichméisseg gefierft oder bannenan ënnerschiddlech? Kuckt den Ënnerscheed tëscht einfacher Fierwung a Gram-Fierwung, éier Dir d'Faarf als Klassifikatiounsresultat interpretéiert.
Kontrast an Opléisung sinn net dat selwecht. De Kontrast hëlleft, en Objet vu senger Ëmgéigend z'ënnerscheeden; d'Opléisung trennt Detailer, déi no beienee leien. E méi donkelt Bild garantéiert net, datt méi Strukturen opgeléist ginn. Och ass net all donkelt Kärchen eng Organell.
Nativ Preparater, gefierft Naasspräparater an Ausstréch
En ongefierften, oder nativen, Naasspräparat erméiglecht eng Vue ouni bäigesate Faarfstoff, obwuel d'Ewechhuelen aus der ursprénglecher Ëmgéigend d'Prouf ëmmer nach verännert. Bei engem gefierften Naasspräparat gëtt e Reagens bäigesat, wärend d'Material a Flëssegkeet ënner engem Deckglas bleift. Fir e fixéierten Ausstréch gëtt Material op engem Objektträger verdeelt a virun der weiderer Veraarbechtung mat enger festgeluechter Method fixéiert. Den Iwwerbléck iwwer d'Preparatioun vun OpenStax ënnerscheet Naasspräparater vun der Fixéierung an erkläert, firwat fixéiert Organisme keng Vue méi op normal Beweegung oder normale Stoffwiessel bidden.
Dës Preparatioune beäntweren ënnerschiddlech Froen:
| Preparatioun | Nëtzlech Observatioun | Wat d'Bild eleng net beleeë kann |
|---|---|---|
| Nativen Naasspräparat | Beweegung, Konturen, natierlech siichtbart Material | Identitéit eleng op Basis vu Beweegung oder Form |
| Gefierften Naasspräparat | Kontrast tëscht Strukturen, déi de Faarfstoff bannen, an hirer Ëmgéigend | Ob de Reagens déi normal Physiologie onverännert gelooss huet |
| Fixéierten, gefierften Ausstréch | Morphologie, déi no enger definéierter Preparatioun erhale bleift | Wéi sech déi ursprénglech lieweg Prouf verhalen huet |
| Benannt differentiell Method | Eng festgeluecht Fierwreaktioun mat passenden Kontrollen | Aartenidentitéit oder Diagnos ouni déi weider Beweiser vun der Method |
Fir e Verglach am Unterrecht dokumentéiert Dir en ongefierfte Preparat, éier Dir e separat gefierfte Preparat ënnersicht, deen nom Unterrechtsprotokoll hiergestallt gouf. Halt d'Beliichtung an d'Astellunge fir d'Bildopnam vergläichbar. Wann zwou verschidden Zelle fotograféiert ginn, beschreift se als Beispiller, net als eng Virun-an-no-Dokumentatioun vun enger eenzeger Zell.
Mikroskopie-Atlas: dräi reell gefierft Prouwen
Dësen Atlas ass eng eegen Auswiel an Interpretatioun vun dräi Mikrofotoen ënner fräie Lizenzen. D'Auteure vun de Quelle benennen d'Prouwen an d'Faarfstoffer. Mir hunn hir Prouwen net onofhängeg verifizéiert. D'Biller ginn ouni Zouschnëtt als verloschtfräi WebP-Konversioune reproduzéiert, ouni bäigesaten Detailer oder Faarfännerungen.
Bildtafel 1: mënschlech Wangenzellen
Prouf: mënschlech Wangenzellen. Faarfstoff: Methylenblo. Vergréisserung: 400×, vum Fotograf uginn. Skalebalken: net verfügbar; d'Quell liwwert keng kalibréiert Pixelgréisst. Foto vum Fritzmann2002, 2017, aus Mënschlech Wangenzellen (Fierwung mat Methylenblo), lizenzéiert ënner CC BY-SA 4.0. Dës Reproduktioun behält déi Lizenz.
.jpg){kind=link}
Fänkt mat enger eenzeler Zell un: Hire méi donkele Kär léisst sech méi einfach vum bloen Zytoplasma ronderëm ënnerscheeden. Kuckt duerno déi iwwerlappend Zellen dorënner. D'Iwwerlappung mécht et méi schwéier, eng Grenz ze verfollegen, a kann lokal e méi donkele Beräich schafen. Benotzt dës Bildtafel, fir d'Noverfollege vu Konturen ze üben, net fir all donkele Fleck als Kär ze zielen. De Guide fir d'Observatioun vu Wangenzellen féiert dës Übung fir déi spezifesch Prouf weider aus.
Bildtafel 2: Ënnenzellen
Prouf: Ënnenzellen, wéi vun der Quell identifizéiert. Faarfstoff: Methylenblo. Vergréisserung: “200x” steet am urspréngleche Fichiersnumm; dës Angab ass net onofhängeg validéiert. Skalebalken: net verfügbar; et gëtt keng Kalibratioun uginn. Foto vum Alvy16, 2019, aus Ënnenzell 200x, lizenzéiert ënner CC BY 4.0.
Déi länglech Kompartimenter bilden eng geuerdent Schicht. Vergläicht hir laang gemeinsam Grenze mat den onreegelméissege Konturen an der Bildtafel 1. Beuecht och dat opfällegt donkelt Material an déi ongläichméisseg Hellegkeet vum Bildfeld. D'Foto beleet net d'Identitéit vun all donkeler Oflagerung. Si weist, firwat eng nëtzlech Observatiounsdokumentatioun Artefakter an Onsécherheeten erfaasst, amplaz alles ze benennen, wat Faarf unhëlt.
Bildtafel 3: Hief, vun der Quell als Candida spp. identifizéiert
Prouf: Candida spp., laut der Fotografin. Faarfstoff: einfach positiv Fierwung mat Methylenblo. Vergréisserung: net verfügbar. Skalebalken: net verfügbar; et gëtt keng kalibréiert Pixelgréisst uginn. Foto vum Marta, Wikimedia-Benotzerin Martunia.g, 2021, aus Positiv Fierwung mat Methylenblo 2, lizenzéiert ënner CC BY 4.0.
Vergläicht déi dicht blo Gruppen mat de manner iwwerfëllte Randberäicher. Eenzel Konture si méi einfach ze verfollegen, wou d'Objete manner iwwerlappen. Den Numm Candida kënnt aus der Quellendokumentatioun, net aus enger Aartenidentifikatioun, déi op dëser Foto gemaach gouf. Dës Bildtafel liwwert och kee Resultat iwwer d'Liewensfäegkeet. Tester fir d'Liewensfäegkeet an d'Respiratioun vun Hief erfuerderen hir eege Konditiounen, Kontrollen an Interpretatioun.
De Moossstaf richteg liesen
Dës Bildtafele erlaben e visuelle Verglach, net Miessungen a Mikrometer oder Vergläicher vun der absoluter Zellgréisst tëscht de Bildtafelen. Eng uginn Vergréisserung ersetzt keng feelend Kamerakalibratioun. Wann d'Duerstellungsgréisst vun engem Bild geännert gëtt, ännert sech seng anscheinend Vergréisserung.
Fir Är eege Biller leet Dir eng Miesskalibratioun mat engem bekannte Standard an der zougehéiereger optescher Konfiguratioun fest. Dem Nikon säi Guide fir d'Mikrometrie erkläert, wéi en Objektmikrometer beliebeg Andeelungen am Bild oder op enger Miessskala a physesch Längten ëmrechent. Dokumentéiert den Objektiv, d'Kamerakonfiguratioun an d'Kalibratioun, a füügt op Basis vun dësen Donnéeën e Skalebalken derbäi. Leet kee Balken aus der duerchschnëttlecher Zellgréisst an engem Léierbuch of.
Passt d'Fläsch zur Method?
Eng Fläsch mat der Bezeechnung Methylenblo ass keng komplett Laborspezifikatioun. Préift hir Konzentratioun an Eenheeten, d'Léisungsmëttel, zousätzlech Inhaltsstoffer, déi virgesinn Uwendung, d'Chargendokumentatioun an d'Instruktiounen. D'Sécherheetsdateblat vun engem Reagens beschreift d'Geforen; d'Instruktioune fir d'Method leeë fest, wéi en fir déi virgesinn Preparatioun ze benotzen ass.
E konkret Beispill ass d'Löffler-Methylenblo-Léisung vu Merck. Den Hiersteller bezeechent se als Mikroskopiereagens a beschreift hir Roll als Géigefierwung bei der säurefester Fierwung. Déi uginn Entzündlechkeet weist och, firwat „eng blo Flëssegkeet“ net genuch Informatioun ass, fir d'Handhabung oder d'Erhëtzen ze plangen. Dës Eegenschafte gëlle fir déi Formuléierung, net automatesch fir all waasserbaséiert Methylenblo-Léisung.
Och Eosin-Methylenblo-Agar ass e formuléiert Kulturmedium. Et ass kee Faarfstoff fir Objektträger, deen duerch d'Bäifüge vu rengem Methylenblo zu enger Prouf hiergestallt gëtt. Fir en anert Zil bei der Bildopnam vergläicht Dir Alternative fir Methylenblo an der Mikroskopie.
Bei engem Mikroskop-Set fir Ufänger fänkt Dir mat senger dokumentéierter Léiermethod, bekannte fäerdege Preparater an dem virgeschriwwene Reagens un. Wann eng Fläsch hiren Etikett verluer huet oder hir Zesummesetzung net festgestallt ka ginn, ersetzt se duerch de passenden dokumentéierte Reagens. Benotzt en Aeschutz a befollegt d'Instruktioune fir d'Handhabung vun der tatsächlecher Formuléierung. Mënschlecht Material an onbekannt Ëmweltprouwe erfuerderen d'Prozedure vum Léierlabo fir d'Handhabung an d'Entsuergung vu Prouwen; d'Fierwung ass keen Ersatz fir dës Prozeduren.
Schreift d'Observatioun virun der Schlussfolgerung op
„Blo oval Objeten a Gruppen“ ass eng begrënnbar Beschreiwung vun engem Bild. „Eng bestëmmten Infektioun“ erfuerdert Beweiser, déi d'Bild net geliwwert huet. Halt d'Hierkonft vun der Prouf, d'Preparatioun, d'Fierwreaktioun an d'Identifikatiounsmethod am Notizbuch getrennt. Dës Ënnerscheedung mécht en einfacht Bild aus dem Unterrecht nëtzlech a verhënnert, datt eng attraktiv Mikrofoto eng Behaaptung vermëttele soll, déi se net ënnerstëtze kann.