Метилен көгү менен боёо: микроскопия ыкмалары жана чыныгы сүрөттөр атласы

Метилен көгү менен боёо жарык талаалуу микроскопияда клетканын адатта начар көрүнгөн белгилерин айырмалоону жеңилдетет. Ал окуучуларга жаактын ички бетиндеги клетканын ядросун табууга же микроорганизмдердин контурун жана жайгашуусун кароого жардам бере алат. Бирок көк объект — бул байкоо гана. Организмдин атын аныктоо, аны өлчөө жана анын ооруну көрсөтөр-көрсөтпөсүн чечүү — өзүнчө милдеттер.

Мукабадагы сүрөт контраст принцибин көрсөтөт. Төмөнкү атласта өз алдынча документтештирилген үлгүлөрдүн чыныгы сүрөттөрү баштапкы булак маалыматы менен берилген.

Метилен көгү эмнени көрсөтөт?

Метилен көгү — негиздик боёгуч: анын түстүү иону оң зарядга ээ. OpenStax микроскопиялык үлгүлөрдү боёо тууралуу бөлүмүндө түшүндүргөндөй, негиздик боёгучтар терс заряддуу клеткалык материал менен өз ара аракеттенип, клеткаларды ачыгыраак фондон бөлүп көрсөтө алат. Туура даярдалган препараттарда метилен көгү нуклеин кычкылдарына бай аймактарды жана боёгучту байланыштыруучу башка түзүлүштөрдү баса көрсөтөт.

Жөнөкөй боёодо контрастты бир боёгуч камсыздайт. Ошондуктан ар башка организмдер бирдей көк болуп көрүнүшү мүмкүн. Алгач сүрөттөөчү суроолор пайдалуу: объекттер тегерекпи же узунчабы, өзүнчөбү же топтолгонбу, бирдей боёлгонбу же ички бөлүктөрү айырмаланабы? Түстү классификациянын натыйжасы катары чечмелөөдөн мурун жөнөкөй боёо менен Грам боюнча боёонун айырмасын караңыз.

Контраст менен ажыратуу жөндөмү эки башка нерсе. Контраст объектти айланасынан айырмалоого жардам берет; ажыратуу жөндөмү бири-бирине жакын деталдарды өзүнчө көрсөтөт. Сүрөттүн карараак болушу көбүрөөк түзүлүштөр даана көрүнөрүн кепилдебейт. Ошондой эле ар бир кара бүртүкчөнү органелла деп атоого болбойт.

Нативдүү препараттар, боёлгон нымдуу препараттар жана мазоктор

Боёлбогон, башкача айтканда нативдүү нымдуу препарат кошумча боёгучсуз көрүнүштү сактайт, бирок үлгүнү баштапкы чөйрөсүнөн алуу деле аны өзгөртөт. Боёлгон нымдуу препаратта материал жабуучу айнектин астындагы суюктукта турганда реагент кошулат. Фиксацияланган мазокто материал предметтик айнекке жайылып, кийинки иштетүүгө чейин белгиленген фиксация ыкмасы колдонулат. OpenStaxтын препарат даярдоо боюнча сереби нымдуу препараттарды фиксациядан айырмалап, фиксацияланган организмдер эмне үчүн кадимки кыймылды же зат алмашууну мындан ары көрсөтпөй турганын түшүндүрөт.

Бул препараттар ар башка суроолорго жооп берет:

Сабакта салыштыруу үчүн окутуу протоколуна ылайык өзүнчө даярдалган боёлгон препаратты кароодон мурун боёлбогон препаратты сүрөткө тартып каттаңыз. Жарыктандырууну жана сүрөт тартуу жөндөөлөрүн салыштырууга ылайыктуу деңгээлде сактаңыз. Эгер эки башка клетка сүрөткө тартылса, аларды бир клетканын «чейинки жана кийинки» көрүнүшү эмес, мисалдар катары сүрөттөңүз.

Микроскопия атласы: үч чыныгы боёлгон үлгү

Бул атлас — ачык лицензияланган үч микросүрөттүн өз алдынча тандалып, чечмеленген жыйнагы. Булактардын авторлору үлгүлөрдү жана боёгучтарды аныктап көрсөтүшкөн. Биз алардын үлгүлөрүнүн аныктыгын өз алдынча текшерген жокпуз. Сүрөттөр кесилбестен, маалымат жоготпогон WebP форматына айландырылып, кошумча белгилерсиз жана түстөрү өзгөртүлбөстөн берилди.

Сүрөт 1: адамдын жаак клеткалары

Үлгү: адамдын жаак клеткалары. Боёгуч: метилен көгү. Чоңойтуу: 400×, сүрөтчүнүн маалыматы боюнча. Масштабдык сызык: жок; булакта калибрленген пиксел өлчөмү берилген эмес. Сүрөттү Fritzmann2002 тарткан, 2017, булак: Адамдын жаак клеткалары (метилен көгү менен боёлгон), лицензиясы — CC BY-SA 4.0. Бул көчүрмө ошол лицензияны сактайт.

Өзүнчө турган клеткадан баштаңыз: анын күңүрт ядросун айланасындагы көк цитоплазмадан айырмалоо оңой. Андан соң анын астындагы бири-бирин жапкан клеткаларды караңыз. Кабатташуу чек араны байкоону кыйындатып, айрым жерлерди карараак көрсөтүшү мүмкүн. Бул сүрөттү ар бир кара такты ядро деп эсептөө үчүн эмес, контурларды байкоого машыгуу үчүн колдонуңуз. Жаак клеткаларын байкоо боюнча колдонмодо ушул үлгүгө арналган көнүгүү кеңири берилген.

Сүрөт 2: пияз клеткалары

Үлгү: булакта пияз клеткалары деп аныкталган. Боёгуч: метилен көгү. Чоңойтуу: баштапкы файлдын атында “200x” көрсөтүлгөн; ал өз алдынча текшерилген эмес. Масштабдык сызык: жок; калибрлөө маалыматы берилген эмес. Сүрөттү Alvy16 тарткан, 2019, булак: Пияз клеткасы 200x, лицензиясы — CC BY 4.0.

Узунча бөлүктөр иреттүү катмарды түзөт. Алардын узун жалпы чек араларын Сүрөт 1деги туура эмес формадагы контурлар менен салыштырыңыз. Ошондой эле көзгө урунарлык кара материалга жана көрүү талаасынын бирдей эмес жарыктыгына көңүл буруңуз. Сүрөт ар бир кара чөкмөнүн эмне экенин аныктабайт. Ал пайдалуу байкоо жазуусунда боёлгон нерсенин баарын атап чыгуунун ордуна, артефакттар менен белгисиздикти да каттоо эмне үчүн зарыл экенин көрсөтөт.

Сүрөт 3: булакта Candida spp. деп аныкталган ачыткы

Үлгү: сүрөтчүнүн маалыматы боюнча Candida spp. Боёгуч: метилен көгү менен жөнөкөй позитивдүү боёо. Чоңойтуу: маалымат жок. Масштабдык сызык: жок; калибрленген пиксел өлчөмү берилген эмес. Сүрөттү Marta, Wikimedia колдонуучусу Martunia.g тарткан, 2021, булак: Метилен көгү менен позитивдүү боёо 2, лицензиясы — CC BY 4.0.

Тыгыз көк топторду объекттер сейрек жайгашкан четки аймактар менен салыштырыңыз. Объекттер азыраак кабатташкан жерлерде алардын өзүнчө контурларын байкоо оңой. Candida деген ат бул сүрөт боюнча жүргүзүлгөн түрдү аныктоодон эмес, булактын жазуусунан алынган. Бул сүрөт жашоого жөндөмдүүлүк боюнча да натыйжа бербейт. Ачыткынын жашоого жөндөмдүүлүгүн жана дем алуусун текшерүүчү анализдерге өзүнчө шарттар, контролдук үлгүлөр жана чечмелөө талап кылынат.

Масштабды туура түшүнүү

Бул сүрөттөр визуалдык салыштырууга ылайыктуу, бирок микрометр менен өлчөөгө же сүрөттөрдүн ортосунда клеткалардын абсолюттук өлчөмүн салыштырууга жарабайт. Көрсөтүлгөн чоңойтуу камеранын жетишпеген калибрлөө маалыматын толуктай албайт. Сүрөттүн экранда көрсөтүлгөн өлчөмүн өзгөртүү анын көзгө көрүнгөн чоңоюшун өзгөртөт.

Өз сүрөттөрүңүз үчүн белгилүү эталонду жана тиешелүү оптикалык түзүлүштү колдонуп, өлчөө калибрлөөсүн жүргүзүңүз. Nikon компаниясынын микрометрия боюнча колдонмосу предметтик микрометр сүрөттөгү же окулярдык тордогу шарттуу бөлүктөрдү физикалык узундукка кантип айландырарын түшүндүрөт. Объективди, камеранын конфигурациясын жана калибрлөө маалыматын каттап, ошол маалыматтардын негизинде масштабдык сызык кошуңуз. Аны окуу китебиндеги клетканын орточо өлчөмүнө таянып чыгарбаңыз.

Бөтөлкөдөгү реагент ыкмага туура келеби?

Үстүнө «метилен көгү» деп жазылган бөтөлкө толук лабораториялык мүнөздөмө болуп эсептелбейт. Анын концентрациясын жана өлчөө бирдиктерин, эриткичин, кошумча курамдарын, колдонуу максатын, партиянын документтерин жана нускамаларын текшериңиз. Реагенттин коопсуздук паспорту коркунучтарды сүрөттөйт; ал эми ыкманын нускамалары аны белгиленген препарат үчүн кантип колдонуу керектигин аныктайт.

Конкреттүү мисал — Merck компаниясынын Лёффлер метилен көгү эритмеси. Өндүрүүчү аны микроскопиялык реагент катары көрсөтүп, кислотага туруктуулук боюнча боёодо кошумча боёгуч катары колдонуларын сүрөттөйт. Анын көрсөтүлгөн күйүүчүлүгү да иштетүүнү же ысытууну пландаштырууда «көк суюктук» деген маалымат жетишсиз экенин көрсөтөт. Бул касиеттер ошол курамга тиешелүү; алар метилен көгүнүн бардык суудагы эритмелерине автоматтык түрдө жайылбайт.

Ошол сыяктуу эле, эозин-метилен көгү агары — белгилүү курамдагы өстүрүүчү чөйрө. Ал үлгүгө жөн гана метилен көгүн кошуу менен жасалган микроскопиялык боёгуч эмес. Сүрөткө түшүрүүнүн башка максаты үчүн микроскопияда метилен көгүнүн ордуна колдонулуучу каражаттарды салыштырыңыз.

Башталгычтар үчүн микроскоп топтомун колдонууда анын документтештирилген окуу ыкмасынан, белгилүү даяр препараттардан жана көрсөтүлгөн реагенттен баштаңыз. Эгер бөтөлкөнүн энбелгиси жоголсо же курамын аныктоо мүмкүн болбосо, аны тиешелүү документтери бар ылайыктуу реагентке алмаштырыңыз. Көздү коргоочу каражаттарды колдонуңуз жана дал ошол курам үчүн берилген иштетүү нускамаларын аткарыңыз. Адамдан алынган материалдар жана белгисиз айлана-чөйрө үлгүлөрү окуу лабораториясынын үлгүлөр менен иштөө жана аларды жок кылуу жол-жоболорун талап кылат; боёо бул жол-жоболордун ордун баспайт.

Жыйынтык чыгарардан мурун байкоону жазыңыз

«Топтолгон көк сүйрү объекттер» — сүрөттүн негиздүү сүрөттөмөсү. «Белгилүү бир инфекция» деген тыянак сүрөт бербеген далилдерди талап кылат. Дептерде үлгүнүн келип чыгышын, даярдалышын, боёо реакциясын жана аныктоо ыкмасын өз-өзүнчө жазыңыз. Мындай айырмалоо жөнөкөй окуу сүрөтүн пайдалуу кылып, көркөм микросүрөткө ал далилдей албаган тыянакты жүктөөгө жол бербейт.