Apakah methylene blue menyebabkan kanker? Bukti toksikologi

Methylene blue telah menghasilkan sinyal tumor dalam eksperimen hewan jangka panjang dan hasil positif dalam beberapa uji laboratorium terhadap kerusakan genetik. Temuan tersebut perlu diperhatikan. Namun, temuan itu tidak menetapkan probabilitas bahwa seseorang akan mengalami kanker setelah paparan tertentu.

Evaluasi IARC yang diterbitkan pada 2016 menempatkan methylene blue dalam Grup 3, yang berarti karsinogenisitasnya pada manusia tidak dapat diklasifikasikan. Kelompok kerja tersebut tidak memiliki data kanker pada manusia dan menilai bukti pada hewan sebagai terbatas. Grup 3 tidak berarti telah terbukti tidak berbahaya. Demikian pula, temuan pada hewan tidak menjadikan setiap paparan pada manusia sebagai penyebab kanker yang telah terbukti.

Tiga pertanyaan yang memerlukan jawaban terpisah

Karsinogenisitas berkaitan dengan perkembangan tumor. Studi hewan jangka panjang dapat mendeteksi pola tumor setelah paparan yang ditentukan. Genotoksisitas berkaitan dengan kerusakan materi genetik atau kejadian seluler terkait. Hasil positif pada uji mutasi memberikan sinyal peringatan, tetapi tidak secara langsung menghitung kejadian kanker pada manusia. Risiko pada manusia berkaitan dengan kemungkinan terjadinya bahaya dalam kondisi paparan yang sebenarnya.

Pertanyaan-pertanyaan ini memerlukan pengukuran yang berbeda. Menghitung mutan bakteri, memeriksa sel darah mencit, dan mendiagnosis tumor saat nekropsi bukanlah endpoint yang dapat dipertukarkan. Demikian pula, eksperimen pengobatan yang menunjukkan bahwa suatu zat merusak sel kanker tidak menetapkan apakah paparan berulang dapat memicu tumor pada jaringan sehat. Pembahasan terpisah mengenai methylene blue dalam penelitian kanker membahas klaim pengobatan.

Perbandingan studi: paparan kronis yang sebenarnya

Eksperimen utama menggunakan methylene blue trihydrate, yang diberikan dalam methylcellulose berair 0.5% melalui gavage oral, yaitu pemberian terukur melalui selang ke dalam lambung. Setiap kelompok dosis dalam studi kronis terdiri dari 50 jantan dan 50 betina dari masing-masing spesies. Pemberian dilakukan lima hari per minggu selama dua tahun, menurut laporan studi Auerbach dan rekan-rekannya.

Tabel ini mempertahankan kesimpulan spesifik per spesies dari NTP. Jumlah dinyatakan dalam miligram bahan yang diuji per kilogram berat badan hewan pada hari pemberian dosis, bukan rekomendasi untuk manusia. Hewan dengan dosis nol menerima vehicle.

Model	Kelompok dosis, mg/kg	Rute dan durasi	Kesimpulan NTP dan temuan yang relevan
Tikus F344/N jantan	0, 5, 25, 50	Gavage oral; lima hari/minggu; dua tahun	Beberapa bukti: adenoma sel pulau pankreas serta gabungan adenoma/karsinoma meningkat.
Tikus F344/N betina	0, 5, 25, 50	Jadwal yang sama	Tidak ada bukti aktivitas karsinogenik dalam kondisi ini.
Mencit B6C3F1 jantan	0, 2.5, 12.5, 25	Gavage oral; lima hari/minggu; dua tahun	Beberapa bukti: karsinoma usus halus serta gabungan adenoma/karsinoma meningkat. Limfoma ganas mungkin juga terkait.
Mencit B6C3F1 betina	0, 2.5, 12.5, 25	Jadwal yang sama	Bukti ekuivokal: peningkatan marginal limfoma ganas.

“Beberapa bukti” adalah kategori NTP untuk temuan eksperimental positif dengan kekuatan bukti lebih rendah daripada “bukti jelas.” “Ekuivokal” menggambarkan temuan yang tidak pasti. Kategori ini menyatakan kekuatan bukti, bukan persentase risiko atau peringkat seberapa kuat suatu karsinogen.

Hasil pada tikus jantan tidak menunjukkan pola kenaikan yang konsisten seperti tangga. Adenoma atau karsinoma sel pulau pankreas terjadi pada 4/50 kontrol serta 9/50, 14/50, dan 8/50 hewan pada dosis yang meningkat. Makalah yang diterbitkan melaporkan signifikansi statistik hanya pada dosis menengah. Hal ini membuat narasi garis lurus sederhana menjadi tidak akurat; hal ini tidak menetapkan bahwa dosis tertinggi bersifat protektif. Adenoma adalah tumor jinak, sedangkan karsinoma bersifat ganas. Endpoint gabungan tidak boleh digambarkan seolah-olah setiap tumor yang dihitung merupakan kanker.

Mengapa ringkasan yang berbeda terdengar bertentangan

Informasi peresepan PROVAYBLUE saat ini melaporkan temuan pankreas pada tikus jantan tetapi menyatakan tidak ada temuan neoplastik terkait obat pada mencit. Makalah penelitian menyatakan bahwa peningkatan neoplastik pada mencit tidak signifikan secara statistik, sekaligus mencatat adanya tren positif. Meskipun demikian, NTP menetapkan kategori untuk mencit seperti yang ditampilkan di atas.

Analisis studi hewan IARC menjelaskan perbedaan statistik yang penting: temuan usus pada mencit jantan menunjukkan tren dosis yang signifikan, tetapi masing-masing kelompok yang menerima dosis tidak signifikan dalam perbandingan berpasangan dengan kontrol. Menguji pola keseluruhan di berbagai dosis berbeda dari menguji setiap kelompok secara terpisah. Pembaca perlu mempertahankan sumber dan redaksi aslinya daripada menyederhanakan seluruh temuan ini menjadi “mencit mengalami kanker” atau “studi pada mencit negatif.” Tidak satu pun memberikan angka kanker pada manusia yang terukur.

Perbandingan studi: endpoint kerusakan genetik

Bagian toksikologi genetik dalam NTP Technical Report 540 menjelaskan rangkaian eksperimen yang berbeda. S9 adalah campuran laboratorium yang mengandung enzim hati dan digunakan untuk memodelkan aktivasi metabolik. Kehadirannya tidak mengubah uji sel menjadi studi paparan seluruh tubuh.

Sistem uji	Kondisi paparan yang sebenarnya	Endpoint yang diukur dan hasil
Uji mutasi bakteri, lot kedua yang diuji	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; dengan dan tanpa S9 hati tikus	Mutasi meningkat pada strain yang diuji.
Sel ovarium hamster Tiongkok yang dikultur	Pengujian pertukaran kromatid saudara mencakup 0.17–2.5 µg/mL tanpa S9, hingga 5 µg/mL dengan S9; pengujian aberasi kromosom menggunakan 4.7–22 µg/mL	Hasil positif untuk pertukaran dan aberasi kromosom.
Mencit jantan, eksperimen akut	Suntikan intraperitoneal tunggal: 25, 50 atau 150 mg/kg; sampel pada 48 jam	Tidak ada peningkatan eritrosit bermikronukleus di sumsum tulang atau darah.
Mencit jantan dan betina, eksperimen berulang	Gavage oral: 25, 50, 100 atau 200 mg/kg; lima hari/minggu selama tiga bulan	Tidak ada peningkatan eritrosit bermikronukleus dalam darah perifer.

Mikronukleus adalah badan inti tambahan berukuran kecil yang dapat mencerminkan patahnya kromosom atau hilangnya kromosom selama pembelahan sel. Hasil negatif pada uji sel darah menjawab pertanyaan khusus tersebut pada sel yang diambil sebagai sampel. Hasil itu tidak dapat menyingkirkan setiap jenis kerusakan DNA pada setiap organ. Sebaliknya, hasil positif pada uji sel kultur tidak memberi tahu konsentrasi yang sebenarnya dicapai di jaringan seseorang.

Informasi peresepan juga mencatat pola keseluruhan ini: uji bakteri dan sel kultur positif, sedangkan uji mikronukleus pada mencit negatif. Menyebut methylene blue hanya sebagai “genotoksik” atau “non-genotoksik” menghilangkan informasi yang penting untuk interpretasi.

Apa artinya bagi paparan pada manusia

Studi-studi tersebut tidak memberikan ambang harian tervalidasi yang aman dari risiko kanker bagi manusia. Membagi dosis tikus dengan faktor berat badan tidak akan menyelesaikan perbedaan dalam absorpsi, metabolisme, rute, frekuensi paparan, atau durasi seumur hidup. Hasilnya hanya akan berupa jumlah yang dikonversi, bukan bukti keamanan.

Eksperimen gavage selama dua tahun dan pengobatan intravena singkat dengan pengawasan medis menjawab pertanyaan yang berbeda. Perbedaan tersebut mencegah ekstrapolasi numerik secara langsung; namun, perbedaan itu tidak menghapus temuan pada hewan. Penilaian yang berguna dimulai dengan senyawa dan formulasi yang tepat, jumlah, rute, frekuensi, durasi, dan alasan penggunaan. “Beberapa tetes” tidak mencantumkan konsentrasi maupun volume yang terukur.

Jika methylene blue diberikan untuk alasan medis, temuan tumor saja tidak dapat menentukan apakah manfaat pengobatan tersebut lebih besar daripada risikonya. Jika penggunaan elektif berulang sedang dipertimbangkan, risiko kanker jangka panjang yang belum terukur tidak boleh digambarkan sebagai nol. Masalah yang lebih segera, termasuk interaksi obat dan kerentanan terhadap hemolisis, dibahas dalam efek samping dan kontraindikasi.

Untuk bacaan lebih lanjut, gunakan perpustakaan penelitian untuk membedakan studi pada manusia dari eksperimen pada hewan dan sel. Pertanyaan utama untuk setiap makalah adalah paparan apa yang diuji dan hasil apa yang benar-benar diukur.