પ્રયોગશાળામાં મેથિલીન બ્લુની ઓળખ: ઇન્ફ્રારેડ વર્ણપટ અને પૂરક પદ્ધતિઓ

કલ્પના કરો કે ત્રણ પ્રયોગશાળાઓને એક જ વાદળી પાઉડર મળે છે. પહેલી ઇન્ફ્રારેડ વર્ણપટ નોંધે છે અને તેને મેથિલીન બ્લુ જાહેર કરે છે. બીજી ક્રોમેટોગ્રાફી કરે છે અને 0.4% Azure B હોવાનો અહેવાલ આપે છે. ત્રીજી સ્ફટિકો પર એક્સ-રેનું વિવર્તન કરાવીને હાઇડ્રેટ સ્વરૂપનું નામ જણાવે છે. ત્રણેય સાચી છે, અને તેમાંથી કોઈએ બાકીના બે પ્રશ્નોના જવાબ આપ્યા નથી. ગૂંચવણ ત્યારે શરૂ થાય છે જ્યારે એક પરિણામને ત્રણેય પ્રશ્નોના જવાબ તરીકે વાંચવામાં આવે છે.

આ લેખ તે પ્રશ્નોને અલગ પાડે છે. ઇન્ફ્રારેડ દ્વારા ઓળખ સંદર્ભ માનક સાથે સરખામણી કરીને અણુની ઓળખ સ્થાપિત કરે છે. ક્રોમેટોગ્રાફી સંઘટન સ્થાપિત કરે છે. વિવર્તન ઘન-અવસ્થાનું સ્વરૂપ સ્થાપિત કરે છે. ઓળખ માટે સ્વીકાર્ય મેળાપ મળવો એ શુદ્ધતાનું પ્રમાણપત્ર નથી.

ઇન્ફ્રારેડ દ્વારા ઓળખ એક પ્રશ્નનો સારી રીતે જવાબ આપે છે

મેથિલીન બ્લુ માટેની ઔષધસંહિતા મુજબની ઓળખ કસોટી વર્ણપટની માનક સાથે સરખામણી છે, શિખરોની ચેકલિસ્ટ નથી. USP મેથિલીન બ્લુ મોનોગ્રાફના પૂર્વાવલોકન હેઠળ, ઓળખ કસોટી Aમાં ATR પ્રકાશીય વ્યવસ્થા અથવા પોટેશિયમ બ્રોમાઇડની પેલેટ સાથે ઇન્ફ્રારેડ સ્પેક્ટ્રોસ્કોપીનો ઉલ્લેખ છે. નમૂનાનો વર્ણપટ USP સંદર્ભ માનકના વર્ણપટને અનુરૂપ હોવો જોઈએ, અને નમૂનો તથા માનક સમકક્ષ પરિસ્થિતિઓમાં તૈયાર કરીને નોંધાયેલા હોવા જોઈએ. ઓળખ સૂચવતી તરંગસંખ્યાઓની કોઈ નિશ્ચિત યાદી નિર્ણય આપતી નથી. વર્ણપટોને એકબીજા પર મૂકીને કરાતી સરખામણી નિર્ણય આપે છે.

આ રચનાત્મક પસંદગી મેથિલીન બ્લુના FTIR વર્ણપટના વર્તનને પ્રતિબિંબિત કરે છે. સૌથી પ્રબળ લક્ષણો ફિંગરપ્રિન્ટ વિસ્તારમાં હોય છે. સાહિત્યમાં બેન્ડોની ઓળખ મુખ્ય સંયુગ્મિત વલયના બેન્ડને સતત 1590 થી 1600 cm-1 નજીક મૂકે છે, જ્યાં એરોમેટિક કાર્બન-કાર્બન અને કાર્બન-નાઇટ્રોજનના ખેંચાણ કંપન પ્રકારો પરસ્પર જોડાય છે. 1490 અને 1390 cm-1 નજીકના અન્ય બેન્ડોમાં વલય, કાર્બન-નાઇટ્રોજન અને કાર્બન-હાઇડ્રોજનના વિકૃતિ કંપનોનાં લક્ષણો હોય છે. 1355 અને 1330 cm-1 નજીકના બેન્ડોમાં ડાઇમેથિલએમિનો કાર્બન-નાઇટ્રોજન બંધો અને મિથાઇલ વિકૃતિ કંપનો સામેલ હોય છે. 1225 થી 1250 cm-1 નજીકનાં લક્ષણો વિષમચક્રીય માળખાને સંબંધિત છે, જ્યારે 1170 થી 1130 અને 1066 cm-1 નજીકના બેન્ડોમાં કાર્બન-સલ્ફરના લક્ષણો હોય છે; એરોમેટિક C-Hનું વાંકું વળવાનું કંપન 880 cm-1 નજીક હોય છે. ખેંચાણ કંપનો વધુ ઊંચી તરંગસંખ્યાઓ પર દેખાય છે: એરોમેટિક C-H લગભગ 3040 cm-1 પર અને N-મિથાઇલ C-H આશરે 2900 અને 3000 cm-1 વચ્ચે. પ્રકાશિત બેન્ડ-ઓળખની વિગતોમાં તફાવત હોય છે, કારણ કે ફેનોથાયઝિનિયમનું માળખું પરસ્પર જોડાયેલી પ્રણાલી તરીકે કંપે છે. તેથી કોઈ એક ઓળખ કોષ્ટકને નોંધાયેલા અર્થઘટન તરીકે લો, એકમાત્ર સંભવિત અર્થઘટન તરીકે નહીં.

નમૂનો તૈયાર કરવાની બે અસરો પર ધ્યાન આપવું જરૂરી છે, કારણ કે તે રંગદ્રવ્યને બદલ્યા વિના મેથિલીન બ્લુના IR વર્ણપટ બદલે છે. પ્રથમ, હાઇડ્રેટેડ પદાર્થ 3300 થી 3500 cm-1 આસપાસ પહોળો O-H પટ્ટો અને 1630 થી 1640 cm-1 નજીક પાણીના વાંકું વળવાના કંપનનો બેન્ડ દર્શાવે છે, અને અલગ હાઇડ્રેટ સ્વરૂપો ફિંગરપ્રિન્ટ બેન્ડોને માપી શકાય એટલા ખસેડે છે. બીજું, KBr પેલેટનું માધ્યમ ભેજશોષક છે: શોષાયેલી ભેજ પાણીના એ જ વિસ્તારોમાં બેન્ડો ઉત્પન્ન કરે છે અને નમૂનામાંથી આવેલા હાઇડ્રેટના પાણી જેવી દેખાઈ શકે છે. ATR દ્વારા નમૂનાનું પરીક્ષણ KBr માધ્યમને ટાળે છે, પરંતુ ATRની તીવ્રતાઓ તરંગસંખ્યા પર આધારિત પ્રવેશ ઊંડાઈ અનુસાર બદલાય છે. તેથી એક જ પાઉડરના ATR વર્ણપટ અને પારગમન વર્ણપટને સીધા એકબીજા પર મૂકીને સરખાવી શકાતા નથી. વ્યવહારુ નિયમ ઔષધસંહિતાની જરૂરિયાતમાંથી આવે છે: એક જ તકનીકથી નોંધાયેલા નમૂના અને સંદર્ભની સરખામણી કરો, અને કઈ તકનીક વપરાઈ તે નોંધો. આ વર્ણપટો પાછળ રહેલા ધનાયન, ક્ષાર અને હાઇડ્રેટના મૂળભૂત રસાયણશાસ્ત્ર માટે મેથિલીન બ્લુની રચના અને ગુણધર્મોનો સંદર્ભ જુઓ.

વિશ્લેષણ પદ્ધતિ પસંદગી કોષ્ટક

આ કોષ્ટક પસંદગી માટેનું સાધન છે. કોઈ પદ્ધતિ કયા પ્રશ્નનો જવાબ આપે છે, સ્વીકાર્ય પરિણામ શું સ્થાપિત કરે છે અને શું હજી સાબિત થતું નથી તે જાણવા એક પંક્તિને આડી રીતે વાંચો.

ઇન્ફ્રારેડ વર્ણપટનો મેળાપ શુદ્ધતાનું પ્રમાણપત્ર કેમ નથી

ઓળખનો મેળાપ ખોટું રંગદ્રવ્ય હોવાની શક્યતા દૂર કરે છે. તે નમૂનામાં રહેલા બધા ઘટકોની યાદી આપતો નથી. ત્રણ મર્યાદાઓ સૌથી વધુ મહત્વની છે.

પ્રથમ, નજીકથી સંબંધિત પદાર્થો ઇન્ફ્રારેડમાં એકસરખા દેખાય છે. Azure B અને મેથિલીન બ્લુ વચ્ચે માત્ર એક મિથાઇલ જૂથનો તફાવત છે, તેથી તેનો વર્ણપટ મેથિલીન બ્લુના વર્ણપટને ખૂબ મળતો આવે છે. થોડા ટકા Azure B ધરાવતા મિશ્રણનો વર્ણપટ પણ મેથિલીન બ્લુના સંદર્ભ પર સારી રીતે બંધબેસે છે. તે અશુદ્ધિ શોધવાનું કામ ક્રોમેટોગ્રાફીનું છે, જે મેથિલીન બ્લુની અશુદ્ધિઓ અને કસોટી પદ્ધતિઓની માર્ગદર્શિકામાં સમજાવ્યું છે.

બીજું, ઇન્ફ્રારેડ સ્પેક્ટ્રોસ્કોપી સમગ્ર નમૂનાને માપતી તકનીક છે, જેમાં ઓછા પ્રમાણમાં રહેલા ઘટકો માટેની સંવેદનશીલતા મર્યાદિત છે. સંબંધિત રંગદ્રવ્યો, અવશેષ દ્રાવકો અથવા અકાર્બનિક અવશેષોની નાની માત્રાઓ મુખ્ય બેન્ડો નીચે છુપાઈ જાય છે. વધારાના શિખરોનો અભાવ એ અશુદ્ધિઓના અભાવનો નબળો પુરાવો છે.

ત્રીજું, સંદર્ભ માનક સમગ્ર સરખામણીને નિયંત્રિત કરે છે. ક્ષીણ થયેલું, હાઇડ્રેશનને કારણે વર્ણપટમાં ફેરફાર ધરાવતું અથવા અયોગ્ય રીતે સંભાળેલું માનક સરખામણીનો આધાર બદલી નાખે છે. તકનીકોનું અસંગત જોડાણ પણ એવું જ કરે છે, જેમ કે ATR નમૂનાના વર્ણપટનું KBr સંદર્ભ સામે મૂલ્યાંકન. દરેક નિષ્કર્ષ સાથે માનકનો લોટ, તકનીક અને તૈયારીની વિગતો નોંધો.

મિશ્રણો માટે એક અંતિમ સાવચેતી જરૂરી છે. જે વર્ણપટ મોટાભાગે મેળ ખાતો હોય, પરંતુ તેમાં શોલ્ડર જેવા ઉપસેલા ભાગો અથવા તીવ્રતાની અસંગતતાઓ હોય, તેને નોંધો સાથે સ્વીકાર્ય ગણવો નહીં. તે ઓળખ કરતાં પહેલાં નમૂનાના ઘટકોને અલગ કરવાનો સંકેત છે.

વ્યવહારમાં પૂરક પદ્ધતિઓ

મેથિલીન બ્લુનું HPLC સંઘટનનો એવો જવાબ આપે છે જે ઇન્ફ્રારેડ આપી શકતું નથી. હાલની ઔષધસંહિતા મુજબની પદ્ધતિ ફેનાઇલ-પ્રકારની કૉલમ સાથે ટ્રાઇફ્લોરોએસિટિક એસિડ ધરાવતો પાણી-એસિટોનાઇટ્રાઇલ ગ્રેડિયન્ટ વાપરે છે અને 246 nm પર શોધ કરે છે, દૃશ્યમાન પટ્ટામાં નહીં. ઓળખ સંદર્ભ માનક સાથે રિટેન્શન-સમયના મેળાપમાંથી મળે છે; એ જ સરખામણી માત્રાત્મક પરીક્ષણનો આધાર પણ બને છે. કાર્બનિક અશુદ્ધિની કસોટી Azure Bને તેની પોતાની સંદર્ભ સામગ્રીથી ઓળખે છે: મેથિલીન બ્લુનું સાપેક્ષ રિટેન્શન 1.0 હોય ત્યારે તેનું લગભગ 0.8 હોય છે, અને બંને શિખરો વચ્ચે ઉચ્ચ વિભેદન જરૂરી છે. તરંગલંબાઈની પસંદગી નોંધો: ડિમેથિલેશન શ્રેણી ક્રમશઃ લાલ તરફ વધુ આગળ શોષણ કરે છે, થાયોનીનના લગભગ 600 nmથી Azure C, Azure A અને Azure B મારફતે મેથિલીન બ્લુના લગભગ 670 nm સુધી. તેથી લગભગ 660 nm પર નિશ્ચિત કરેલું ડિટેક્ટર શ્રેણીના ઘટકોને અસમાન પ્રતિભાવ આપે છે અને કેટલાક સમધર્મી પદાર્થોનું પ્રમાણ ઓછું દર્શાવે છે. જ્યારે જરૂર પડે ત્યારે સમગ્ર શ્રેણીનું સંપૂર્ણ પ્રોફાઇલિંગ દરેક વિશ્લેષ્ય માટે યોગ્યતા ચકાસેલા માનકો ધરાવતી C18 LC-MS/MS પદ્ધતિથી કરવું જોઈએ.

પાઉડર વિવર્તન ઘન-અવસ્થાના એવા પ્રશ્નનો જવાબ આપે છે જેની માહિતી ઉપરની બંને પદ્ધતિઓ નષ્ટ કરે છે અથવા અવગણે છે: ક્રોમેટોગ્રાફી માટે પાઉડરને ઓગાળવાથી સ્ફટિકની માહિતી નષ્ટ થાય છે, અને અણુના કંપનો લાંબા અંતર સુધીની ગોઠવણીને બદલે બંધો વિશે માહિતી આપે છે. વિવર્તન આકૃતિઓ હાઇડ્રેટ તબક્કાઓ અને સ્ફટિકીયતાને અલગ પાડે છે, અને મોટા ભાગના પદાર્થો કરતાં મેથિલીન બ્લુને આવી તપાસની વધુ જરૂર છે. રેગર અને સહકર્મીઓના ઘન-અવસ્થાના અભ્યાસે પાંચ અલગ હાઇડ્રેટ રચનાઓ ઓળખી હતી, જેમાં એક પેન્ટાહાઇડ્રેટ, બે ડાઇહાઇડ્રેટ, એક મોનોહાઇડ્રેટ અને એક મધ્યવર્તી હાઇડ્રેટ સામેલ હતા; લાક્ષણિકતાઓ નિર્ધારિત કરાયેલા સ્વરૂપોમાં કોઈ સાચું ટ્રાઇહાઇડ્રેટ મળ્યું નહોતું. અહીં પ્રયોગશાળામાં સંભાળવાની રીત મહત્વની છે: ભેજ અને તાપમાન હાઇડ્રેટની સ્થિરતા બદલે છે, અને વધુ પડતું પીસવાથી તબક્કો બદલાઈ શકે છે અથવા સ્ફટિકીયતા ઘટી શકે છે. તેથી સાપેક્ષ ભેજ અને તાપમાન નિયંત્રિત કરો અને નોંધો, તેમજ પીસવાનું ન્યૂનતમ રાખો. હાઇડ્રેટનું લેબલિંગ અને તોલેલા દળ પર તેની અસર વિશે વધુ ચર્ચા મેથિલીન બ્લુના હાઇડ્રેટ સ્વરૂપો અને લેબલિંગમાં છે.

UV-Vis શોષણ સહાયક ભૂમિકા ભજવે છે. જાણીતા શોષણ મહત્તમો દ્રાવણનું અપેક્ષિત વર્તન પુષ્ટિ કરે છે અને સાંદ્રતા સંબંધિત માપન શક્ય બનાવે છે. પરંતુ અપેક્ષિત તરંગલંબાઈ પર શોષણ કરતું વાદળી દ્રાવણ મેથિલીન બ્લુ સાથે સુસંગત છે એટલું જ દર્શાવે છે, તેને સાબિત કરતું નથી, કારણ કે સંબંધિત રંગદ્રવ્યો નજીકની તરંગલંબાઈઓ પર શોષણ કરે છે.

ખરીદતાં પહેલાં શું પૂછવું

આ ભેદોને ખરીદી માટેના પ્રશ્નોમાં ફેરવો. પૂછો કે કયા લોટનું પરીક્ષણ થયું હતું, કઈ તકનીકે ઓળખ સ્થાપિત કરી હતી, HPLC અશુદ્ધિ કસોટીમાં Azure Bની સંદર્ભ સામગ્રી વપરાઈ હતી કે નહીં, અને હાઇડ્રેટ સ્વરૂપની લાક્ષણિકતાઓ નિર્ધારિત કરવામાં આવી હતી કે માત્ર ધારણા કરાઈ હતી. સૌથી મહત્વનું, પૂછો કે પ્રમાણપત્ર સંપૂર્ણ સ્પેસિફિકેશન આવરી લે છે કે માત્ર પસંદ કરેલી કસોટીઓ. ઔષધસંહિતાના અનુપાલનનો દાવો કરતા ઘણા વિક્રેતાઓ માત્ર ભારે ધાતુઓનું પરીક્ષણ કરે છે, જેથી ઓળખ, માત્રાત્મક પરીક્ષણ, કાર્બનિક અશુદ્ધિ, દ્રાવક અને સૂક્ષ્મજીવ સંબંધિત પ્રશ્નો અનુત્તરિત રહે છે.

Blupreme મેથિલીન બ્લુના ઔષધીય ઉત્પાદક સાથેની ભાગીદારીમાં સંપૂર્ણ USP સ્પેસિફિકેશનનું પરીક્ષણ કરે છે, જેમાં ઓળખ, શુદ્ધતા, કાર્બનિક અશુદ્ધિઓ, અવશેષ દ્રાવકો, તત્ત્વીય અશુદ્ધિઓ, દહન પછીનો અવશેષ, સૂક્ષ્મજીવ મર્યાદાઓ અને બેક્ટેરિયલ એન્ડોટોક્સિન્સ આવરી લેવાય છે. દરેક બેચનું જાહેર વિશ્લેષણ પ્રમાણપત્ર Blupreme ગુણવત્તા પરીક્ષણ પર પ્રકાશિત થાય છે, જેથી માત્રાત્મક પરીક્ષણનો આધાર અને અશુદ્ધિઓનાં પરિણામો અનુમાન કરવાને બદલે સીધાં વાંચી શકાય. 100%ની નજીકનાં પરિણામો માટે પણ તેમની ગણતરીનો આધાર જણાવવો જરૂરી છે, જેમ કે 100 ટકાથી વધુનાં માત્રાત્મક પરીક્ષણ પરિણામોની માર્ગદર્શિકા સમજાવે છે. ઓળખનો મેળાપ તપાસની શરૂઆત કરે છે. સંપૂર્ણ દસ્તાવેજી નોંધ તેને પૂર્ણ કરે છે.