Søgan um metylenblátt: frá litarevni til heilivág og gransking

Metylenblátt náddi ein sjúkling, áðrenn tað náddi eitt apotek.

Frágreiðingin frá 1891 hjá Paul Guttmann og Paul Ehrlich um nýtslu av litarevninum við malaria inniheldur tvær hitatalvur. Tann seinna gongur frá 13 July til 5 August, við viðgerðini skrivaðari fram við breddanum dag fyri dag. Færslurnar 18 og 19 July siga "1 × 0,05 Methylenblau". Dagin eftir standa fimm og sjey skamtar av somu nøgd, og 22 July er ein lítil nøgd av kinin komin afturat í skrásetingina. Hitalinjan, sum sveiggjar millum 37 °C og 39.5 °C í fyrru helvt av talvuni, javnast út eftir at litarevnið kemur inn og verður millum umleið 36 °C og 37.5 °C tær síðstu tríggjar vikurnar.

Sjúklingurin var annar av tveimum, lýstir í greinini sum ein húsdrongur og ein sjómaður. Evnið, teir fingu, hevði verið eitt handilsligt tekstillitarevni í fimtan ár, og menninir báðir eru millum fyrstu fólkini, ið eru skrásett sum viðgjørd við einum fullsyntetiskum evni, ið var ætlað móti einari ávísari lívveru.

Litarevnið kom fyrst

Fyrsta syntetiska litarevnið, ið fekk handilsliga framgongd, varð gjørt av William Henry Perkin í 1856. Perkin var átjan ára gamal, arbeiddi í einari heimaroyndarstovu í páskaferiuni og royndi at framleiða kinin. Í staðin fekk hann eina svarta rest, loysti hana upp og fann ein lit, ið bant seg sera væl at silki. Hann fekk einkarætt upp á tað í August 1856 og hevði eina verksmiðju, sum læt einari silkilitingarverksmiðju í London vøru, áðrenn 1857 var liðugt.

Í 1875 framleiddi Adolf von Baeyer eitt reytt litarevni og nevndi tað eosin, eftir Eos, grikska orðinum fyri lýsing. Í 1876 menti Heinrich Caro, sum tá var stjóri fyri royndarstovuni hjá Badische Anilin- und Soda-Fabrik, metylenblátt saman við Baeyer sum eitt anilin-grundað litarevni til bummull. Evnafrøðiliga bygnaðurin varð ikki endaliga staðfestur fyrr enn umleið níggju ár seinni.

Upprunin sæst enn í navninum á evninum. "Metylenblátt" er eitt handilsnavn úr litarevnaskránni, ikki ein evnafrøðilig lýsing. Evnið, navnið vísir til, er methylthioninium chloride, og munirnir millum navnið, saltið og hydratini hava týdning, so skjótt sum nakar vigar tilfarið ella lesur eina forskrift.

Liting var brúgvin

Leiðin frá litarevnaverkinum til sjúkrahúsið gekk gjøgnum mikroskopið, og hon byrjaði, áðrenn metylenblátt var til. Wilhelm Erb var tann fyrsti, ið nýtti eitt syntetiskt litarevni á blóð, við picric acid í 1865, og sá eitt netlíkt mynstur inni í summum reyðum blóðkyknum.

Doktararitgerðin hjá Paul Ehrlich frá 1878 samanbar histologiska liting við liting av tekstili og førdi fram, at bæði vóru evnafrøðiligar reaksjónir. Meðan hann arbeiddi undir Robert Koch við tuberkulbacillinum, býtti hann anilinlitarevni í súrar og basiskar flokkar og staðfesti, at hvør flokkur litaði ymiskar partar av einari kyknu. Í 1880 blandaði hann tey bæði saman: eina mettaða loysn av metylenbláum varð hellt í acid fuchsin, til vøkan omaná klárnaði. Úrslitið, sum hann nevndi neutralen Farbkörper ella neutrala liting, gav tríggjar litir í staðin fyri ein, vísti korn í polymorfonuklearu kyknunum, sum ikki høvdu verið sjónlig áður, og gjørdi fyrstu differentialteljingina av leukocyttum møguliga. Av tí at hesi korn tóku upp báðar partar av blandingini, skapti Ehrlich orðið neutrophil fyri kyknurnar, ið bóru tey.

Tvey ár seinni nýtti Koch metylenblátt til at finna tuberkulbacillin, og í 1883 bøtti Ehrlich um mannagongdina. Í 1886 almannakunngjørdi hann eina aðra slag av eygleiðing: hann sprændi litarevnið inn í livandi djór og samanbar, hvussu sterkt hvørt lívgagn tók tað upp, og kom til ta niðurstøðu, at tað hevði týðiliga sækni til heila- og nervavevnað. Hann setti hesa sækni í samband við oxidatións-reduktiónssveiggini hjá litarevninum, sum hann hevði eygleitt árið fyri. Hesi sveigg eru eisini orsøkin til, at ein loysn av metylenbláum missir litin, tá súrevnið verður uppbrúkt, og fær litin aftur, tá luft kemur til. Royndirnar, ið fyrstu ferð máldu avleiðingarnar av hesum sveiggum hoyra til eitt seinni áratíggju, og sjálv mekanisman er eitt annað evni enn søgan.

Parasitturin og tann lilla kjarnin

Alphonse Laveran fann malariaparasittin í 1880 við at kanna feskt, ólitað blóð. At síggja hann regluliga í einum turkaðum útstroki kravdi eina liting, og litingarnar tá í tíðini góvu bert reytt og blátt.

Í 1888 skifti pólski patologurin Czesław Cheçinski acid fuchsin út við eosin og gjørdi eina blanding av metylenbláum og eosin. Tilburðurin aftan fyri mannagongdina var ein hermaður, ið doyði av malaria 30 September 1887. Í blóðfilmunum sá Cheçinski bláar, margeritalíkar formar, sum nú verða kendir sum Plasmodium malariae, og sigðskapaðar formar, sum nú verða kendir sum gametocyttir hjá Plasmodium falciparum. Úrslitið gjørdi enda á tveimum kappingarførum frágreiðingum um sjúkuna í senn: miasmaástøðinum og uppáhaldinum hjá Edwin Klebs og Corrado Tommasi-Crudeli um, at malaria varð elvt av einari bakteriu.

Parasitturin var sjónligur. Kjarnin var tað ikki, og tí var náttúran hjá honum framvegis óviss. Ernst Malachowski, ein lækni í Breslau, loysti trupulleikan fyrst av tilvild og síðani tilætlað. Í 1889 legði hann merki til differentiala liting av plasmodiumkjarnanum í einum preparati og fekk ikki endurskapt úrslitið. At gera metylenblátt súrari hjálpti ikki. At gera tað basiskari við borax gav úrslitið hvørja ferð. Hann vísti mannagongdina alment 15 June 1890 og almannakunngjørdi hana sama ár, við einari fullfíggjaðari mannagongd í August 1891.

Dmitri Romanowsky almannakunngjørdi sína egnu útgávu í September 1891. Bestu úrslitini fekk hann úr einari forsømdari, myglaðari fløsku við metylenbláari loysn, sum var meira enn tveir mánaðir gomul. Frágreiðingin hjá Malachowski var tilætlað og, við hansara egnu orðum, løtt at endurskapa; hjá Romanowsky var tað ein blindgøta, sum riggaði eina ferð. Navnið varð kortini knýtt at Romanowsky, og ósemjan um, hvør framleiddi tann lilla litin, ið gjørdi kjarnan sjónligan er ein serstøk søga við sínum egnu skjølum.

Mynd: seinna hitatalvan úr frágreiðingini hjá Guttmann og Ehrlich frá 1891. Ovara pettið fevnir um 13 til 24 July og niðara pettið 25 July til 5 August; færslurnar í breddanum nevna skamtarnar, ið vórðu givnir, og hitin verður nær tí vanliga tær síðstu tríggjar vikurnar av skrásetingini. Endurgivið úr frágreiðingini, sum er skannað fyri Krafts, Hempelmann og Skórska-Stania, Parasitology Research 111:1–6 (2012), PMID 22411634.

Búning vísti seg at vera demethylering

Eingin av teimum, ið vóru við í 1890unum, visti, hvat "búning" gjørdi við metylenblátt. Svarið kom úr ídnaðarevnafrøði. Heinrich August Bernthsen hevði framleitt móðurevnið phenothiazine í 1883, staðfest í 1885, at metylenblátt hoyrdi til hesa familjuna, og víst um somu tíð, at basiskar umstøður taka methylbólkar burtur úr litarevninum og skapa evnini, sum nú verða nevnd azures.

Bernard Nocht dró virkna partin út í 1898 og 1899 og kundi bert nevna hann Rot aus Methylenblau, reytt úr metylenbláum. Michaelis staðfesti hann sum azure I í 1901. Jenner tók í 1899 absolut methanol í nýtslu sum loysingarevni fyri útfellingina av litarevninum, og tað gjørdi hitafestingu av blóðfilmum óneyðuga; Leishman og Reuter sameindu báðar framstigini; Wright almannakunngjørdi eina einfaldari mannagongd í 1902. Ískoytið hjá Giemsa, eisini í 1902, var at gevast við at vera bundin at einari tilvildarliga búnaðari loysn og í staðin nýta máldar nøgdir av kendum litarevnum. Síðani vildi hann ikki almannakunngera, hvussu hann gjørdi reint methylene azure, og seldi mannagongdina til royndarstovuna hjá Dr. Grübler, sum marknaðarførdi vøruna sum azure I og helt uppá, at bert hennara útgáva var ektað Giemsa-liting.

Tveir heimsbardagar fullførdu arbeiðið av tilvild. Tá týsk litarevni ikki longur vóru at fáa, arbeiddu Lillie, Roe og Wilcox við amerikansku avloysarunum og funnu, at besta litingin kom frá trimum sundurskildum pørtum: reint metylenblátt, niðurbrotingarevni tess azure B, og eosin. Hesi trý eru framvegis høvuðspartar í litingini, ið verður nýtt til at staðfesta malaria í dag, undir einum navni, sum nú bindur Malachowski, Wright og Giemsa saman.

Mynd: ringformar av Plasmodium falciparum í menniskjareyðum blóðkyknum, litaðir við einari Romanowsky-líknandi mannagongd. Lilla bygnaðurin inni í ringinum er chromatinið, sum metylenblátt viðgjørt við borax hjá Malachowski gjørdi sjónligt fyrstu ferð. Mynd eftir Ernst Hempelmann, latin í public domain.

Eitt navn, fleiri tilfarssløg

Árini, ið skiltu hesar partarnar sundur, lótu eftir seg ein trupulleika, sum livdi longur enn evnafrøðin. Ralph Lillie dró markið í 1969 millum lívfrøðilig litarevni, "framleidd eftir strongum forskriftum, ið samsvara við viðkvæma og krevjandi nýtslu teirra", og ikki-lívfrøðilig litarevni til tekstilliting, sum "krevja minni strong og krevjandi framleiðslukrøv". Bæði vørusløg høvdu sama navn, og munurin teirra millum var ongantíð bara ein spurningur um stig. Ein forskrift skrivað fyri bummull og ein forskrift skrivað fyri eitt diagnostiskt reagent kunnu ikki nýtast hvørt fyri annað, og eitt tilfar, ið varð gjørt eftir tekstilforskriftini, var ikki ætlað at verða svølgt.

Azure B er greiðasta dømið. Tað er monodemethyleraði formurin av metylenbláum, tað hevur málbara farmakologiska virksemi av sínum eintingum, og tað var til staðar sum ein óstýrdur partur av kliniskum metylenbláum preparatum í meira enn eina øld, áðrenn nakar skildi tey bæði sundur. Ein granskingarbólkur fann, at menniskjavevnaður tikin við obduktión eftir, at metylenblátt var givið, innihelt 5 til 14 per cent óbroytt metylenblátt og 86 til 95 per cent azure B. Um eitt ávíst preparat eigur at innihalda azure B, og við hvørjum marki, er ein forskriftarspurningur, og granskingin av azure B sum óreinleika og metabolitti heldur fram haðani.

Tað er eisini í forskriftini, at praktiska avleiðingin liggur. At lúka USP er leiðin til hægsta reinleikan, sum marknaðurin býður, tí tað er ein fullfíggjaður alment útgivin royndarstandardur heldur enn ein einstøk máting. Hann fevnir um samleika, assay, lívrunnar óreinleikar, íroknað azure-litarevnini, restloysingarevni, elementóreinleikar, residue on ignition, mikrobiologisk mørk og bakteriuendotoksin. Eitt certifikat, sum upplýsir eitt úrslit fyri tungmetal og nevnir tað USP-compliance, hevur bert upplýst eina linju av hesum listanum.

Blupreme fær sítt metylenblátt frá einum farmaseutiskum framleiðara og almannakunnger alt greiningarcertifikatið, har øll USP-forskriftin verður kannað heldur enn bert tungmetal. Vegleiðingin um, hvussu eitt greiningarcertifikat verður lisið og hvat USP-heitið staðfestir og ikki staðfestir greiða frá, hvussu skjalið kann eftirkannast móti uppáhaldinum.

Hvat søgan loyvir at siga, og hvat hon ikki loyvir

Ættartalið er veruligt, og tað er longri enn flestu vørusíður geva ábending um. Metylenblátt varð nýtt til viðgerð av malaria í 1891, varð lýst sum sedativ í órógvaðari psychosu í 1899, og síðukeðjan hjá evninum gongur gjøgnum quinacrine, chloroquine, promethazine og chlorpromazine. Greinin hjá Ehrlich frá 1890 saman við Arthur Leppmann lýsti linna av neuralgiskari og reumatiskari pínu og umhugsaði síðani, men valdi frá, at royna litarevnið við sálarligari sjúku.

Einki av hesum staðfestir eina nútímans nýtslu. Malariaúrslitið frá 1891 bygdi á tveir sjúklingar og eina hitatalvu. At hava kent eina molekylu leingi er ein orsøk til at granska hana, ikki eitt úrslit. Søgan hjá evninum sum heilivágur og nútímans royndir við malaria svara øðrum spurningum enn teimum, Ehrlich setti, og endapunktini mugu lesast eftir sínum egnu fortreytum.

Ein smálutur í skrásetingini hoyrir til nútíðina heldur enn fortíðina. Tá granskarar framdu royndir við metylenbláum móti malaria í Burkina Faso í 2000unum, kappaðust teir um at fáa farmaseutiskt tilfar, og teir fráboðaðu, at prísurin á ráevninum var hækkaður við einum faktori upp á umleið hundrað, tá tað hevði fingið GMP-validering. Eitt litarevni kundi skiftast út. Ein heilivágur kundi ikki. Munurin, sum Lillie dró í 1969, er tann sami, ið avger, hvat ein fløska inniheldur í dag.