Metyleenisininen plasman patogeenien vähentämisessä: miten prosessi toimii

Metyleenisininen voi auttaa vähentämään luovutetun plasman patogeenejä, kun sitä käytetään osana hallittua käsittelyjärjestelmää. Käsittely tapahtuu kehon ulkopuolella, ennen kuin plasma vapautetaan verensiirtokäyttöön. Siinä yhdistyvät määritellyt laitteet, väriainealtistus, valotus, suodatus ja syntyvän verikomponentin tarkastukset.

Tämä ero määrittää, mitä tutkimusnäyttö tarkoittaa. Tutkimus, joka osoittaa käsittelyjärjestelmän vähentävän infektiokykyistä virusta plasmapussissa, osoittaa tuloksen kyseiselle materiaalille ja prosessille. Se ei osoita, että metyleenisinisen ottaminen hoitaisi ihmisen infektiota.

Myös kliinisesti olennainen kysymys on kaksiosainen: kuinka paljon prosessi vähentää patogeenejä ja kuinka paljon plasman hyödyllisestä toiminnasta säilyy?

Aloita plasmasta, älä määrittelemättömästä verivalmisteesta

Plasma on veren nestemäinen komponentti, joka sisältää proteiineja, muun muassa hyytymistekijöitä. Plasman käsittelyjärjestelmän ei pidä olettaa soveltuvan kokoverelle, punasolutiivisteille tai verihiutalekomponenteille. Näiden materiaalien koostumukset ja säilytettävät toiminnot ovat erilaisia.

Konkreettisena esimerkkinä Macopharman THERAFLEX MB-Plasma -järjestelmä käsittelee yhdeltä luovuttajalta peräisin olevia plasmayksiköitä. Sen dokumentoituun käsittelyjärjestykseen kuuluvat solujen vähentäminen, metyleenisinisen lisääminen, valotus, väriaineen poistaminen ja säilytys. Valmistaja kuvaa erilaisia kokoonpanoja kokoverestä erotetulle plasmalle ja suuremmille afereesikeräyksille. Lähtömateriaalilla ja kertakäyttöisellä tarvikesetillä on siis merkitystä jo ennen valotuksen aloittamista.

”Metyleenisinikäsitelty plasma” kuvaa käsiteltyä komponenttia, mutta ei ole täydellinen spesifikaatio. Hyödyllisessä vertailussa nimetään järjestelmä, kokoonpano, plasman lähde ja käyttöohjeiden versio.

Seuraa materiaalia käsittelyn ja arvioinnin läpi

Yllä oleva kuva erottaa käsittelyvaiheet toisistaan. Tämä sitä täydentävä taulukko selittää, mitä kukin vaihe tekee ja mitä se ei yksin voi osoittaa.

Taulukko on validoidun prosessin tulkintaopas, ei korvaava toimintaohje. Erityisesti poist suodatin ja valonlähde hoitavat eri tehtäviä. Macopharma kuvaa Blueflexin vähentävän metyleenisinistä ja sen johdannaisia, mukaan lukien atsuuriyhdisteet ja tioniini. Kemikaalien poistamista koskeva väite on ymmärrettävä mitatuksi vähenemäksi, ei lupaukseksi siitä, ettei yhtään molekyyliä jää jäljelle.

Miksi valonlähde on osa käsittelyä

Metyleenisininen on valoaktiivinen. Valotus voi aiheuttaa kemiallisia vaurioita biologisille kohteille, minkä vuoksi yhdistelmää on tutkittu virusten inaktivoinnissa. Mohrin ja kollegoiden fenotiatsiiniväriaineita ja valoa käsitelleessä tutkimuksessa valonlähteen vaihtaminen muutti sekä virusten inaktivointia että plasman proteiinien vaurioitumista.

Tämä osoittaa, miksi yleinen oikopolku ei toimi: väriaineen nimeä ei voi pitää koko käsittelyn kuvauksena. Eri lamppu, pussi, optinen reitti tai materiaali voi muuttaa altistusta. Laajempi opas siitä, miten metyleenisinisellä tehtävää fotodynaamista käsittelyä tutkitaan, selittää, miksi formulaatio ja valotus kuuluvat samaan kuvaukseen.

Lämpötila tarjoaa erityisen havainnollisen esimerkin. Vuoden 2018 tutkimuksessa THERAFLEX-käsittelystä eri lämpötiloissa verrattiin plasmaa noin 5°C:n, 22°C:n ja 30°C:n lämpötiloissa. Alimmassa lämpötilassa tutkijat havaitsivat tabletin liukenevan heikommin ja kolmen tutkitun viruksen inaktivoituvan vähemmän. Korkeammat lämpötilat lisäsivät muutoksia hyytymisajassa ja hyytymistekijöiden aktiivisuuden vähenemistä.

Nämä havainnot eivät määritä uutta käyttölämpötila-aluetta. Ne selittävät, miksi veripalvelun on käytettävä määriteltyjä olosuhteita: yhden tuloksen parantaminen parametria muuttamalla voi heikentää toista.

Mikä järjestelmän osa vähensi mikro-organismia?

Koko prosessin jälkeen mitattua patogeenien vähenemistä ei voi automaattisesti katsoa yksin valolla aktivoidun väriaineen ansioksi.

Vuoden 2015 haastetutkimuksessa, jossa käytettiin tarkoituksellisesti kontaminoitua plasmaa, tutkijat ottivat materiaalista näytteitä yksittäisten käsittelyvaiheiden jälkeen. Solusuodatus selitti suuren osan bakteerien vähenemisestä. Pienen Brevundimonas diminuta -bakteerin kohdalla ensimmäinen vaihe saavutti 1.7 login vähenemän; sitä seuranneet valokäsittely ja väriaineen suodatus nostivat kokonaisvähenemän vähintään 3.7 logiin, määritysmenetelmän havaitsemisrajan alapuolelle.

Tämä on yhdistetyn järjestelmän tulos. Se ei osoita, että tavallinen metyleenisiniliuos tuottaisi saman bakteerimäärän vähenemän. Sama erottelu pätee myös laajempaa metyleenisinisen antimikrobista tutkimusta luettaessa.

Logaritminen vähenemä kuvaa mitatun alkuperäisen ja jäljelle jäävän infektiokykyisen materiaalin määrän suhdetta. Kolmen login vähenemä tarkoittaa määrän pienenemistä tuhannesosaan. ”Havaitsemisrajan alapuolella” tarkoittaa, ettei määritysmenetelmä pystynyt mittaamaan jäljelle jäänyttä määrää kyseisissä testiolosuhteissa. Se ei todista täydellistä steriiliyttä tai yleistä vaikutusta testaamattomiin mikro-organismeihin. Viruslaji, lähtömäärä, näytematriisi ja määritysmenetelmän herkkyys ovat edelleen väitteen välttämättömiä osia.

Säilytä toiminta, jota varten plasmaa käytetään

Prosessi voi vähentää infektiokykyä ja samalla muuttaa kliinisesti merkityksellisiä proteiineja. Pelkän patogeenien vähenemisen mittaaminen jättää siksi arvioinnin puutteelliseksi.

Vuoden 2014 vertailussa plasman lähteistä ja käsittelyajoista tekijä VIII:n saanto metyleenisinikäsittelyn jälkeen vaihteli tutkimussarjoissa välillä 78%–89%. Saanto riippui plasman lähteestä, ja tutkijat arvioivat myös fibrinogeenia. Nämä ovat käsitellystä komponentista tehtyjä laboratoriomittauksia. Ne eivät ole potilaiden kliinisen tehon prosenttiosuuksia.

Tarkastellaan kahta plasmayksikköä, joiden hyytymistekijöiden lähtötasot eroavat toisistaan. Vaikka niissä säilyisi käsittelyn aikana sama osuus aktiivisuudesta, niiden lopulliset tasot ovat erilaiset. Vastaavasti suurempi prosentuaalinen saanto ei välttämättä tarkoita suurempaa lopullista pitoisuutta. Tarkastele sekä ennen käsittelyä että sen jälkeen tehtyjä mittauksia ja sovellettavaa käyttöön vapauttamisen spesifikaatiota.

Potilastulokset edellyttävät toisenlaista näyttöä. Komponentin laatua koskeva tutkimus ei yksin voi osoittaa, että verenvuodon hallinta, verensiirtojen tarve tai haittatapahtumien yleisyys olisivat vastaavia tietyssä potilasryhmässä.

Pidä käsittelyä koskeva näyttö erillään hoitoväitteistä

Plasmapussi mahdollistaa hallitun altistuksen: sillä on määritelty tilavuus, geometria, käsittelyjärjestys ja mitattava lopputulos. Ihmisellä on kudoksia, verenkierto, aineenvaihdunta ja infektiopesäkkeitä, joita tämä koe ei jäljittele.

Siksi HIV:n hoitoväitteet suhteessa plasman virusten inaktivointia koskevaan näyttöön ja metyleenisinistä koskeva näyttö COVID-19:n ja pitkäkestoisen COVIDin yhteydessä edellyttävät kumpikin omaa kliinistä arviointiaan. Kumpaankaan kysymykseen ei vastata osoittamalla luovutetun materiaalin infektiokyvyn vähenemistä.

Veripalvelukäytössä on arvioitava täsmällinen komponentti ja paikallisesti sallittu järjestelmä, sen mikro-organismikohtainen validointi, proteiinien säilynyt toiminta, kemikaalijäämät ja käyttöön vapauttamisen tarkastukset. Valmistajan mukaan tuotteen saatavuus vaihtelee maittain. Aiempi käyttö tai onnistunut koe ei osoita, että käyttö olisi nykyisin hyväksytty kaikkialla. Näytön kannalta hyödyllinen tarkasteluyksikkö on koko validoitu prosessi, jota sovelletaan sille määriteltyyn plasmakomponenttiin.