Artikulua
Esnearen metileno urdinaren erredukzio-proba: oinarria eta mugak
Ikasle batek esnez betetako bi hodi altxatu ditu. Bata zuritu egin da ordubetean. Besteak urdin jarraitu du bost orduz. Urdina seinalatu eta edateko segurua dela esan du.
Ondorio horrek agerian uzten du eredu mental oker bat. Esnearen metileno urdinaren probak ez du segurtasuna detektatzen. Hodi horretako mikrobio-populazioak baldintza finkoetan potentzial redoxa zer abiaduratan jaisten duen adierazten du. Emaitza motel batek laginaren jarduera metaboliko orokor txikia adierazten du. Ez du ezer esaten dauden organismoei buruz, haien artean patogenorik dagoen ala ez, edo esnea behar bezala pasteurizatu zen ala ez.
Bereizketa hori garrantzitsua da, probak sinesgarria dirudielako. Urdina desagertu egiten da. Erloju batek zenbaki bat ematen du. Zenbakiek behar baino gehiago interpretatzera bultzatzen dute. Artikulu honek interpretazio erabilgarria gordetzen du, eta segurua ez dena baztertzen du.
Zer neurtzen du benetan erredukzioak?
Metileno urdina urdina da oxidatuta dagoenean, eta ia koloregabea leukometileno urdin bihurtzeko erreduzitzen denean. Esne freskoak oxigeno disolbatua dauka, eta horrek koloratzailea urdin mantentzen du. Arnasketa eta hartzidura egiten dituzten bakterioek oxigeno hori kontsumitzen dute eta konposatu erreduzitzaileak askatzen dituzte. Potentzial redoxa nahikoa jaisten denean, koloratzaileak elektroiak hartzen ditu eta kolorea galtzen du. Guelpheko Unibertsitatearen esneki-mikrobiologiako testuak sekuentzia bera deskribatzen du: lehenik oxigenoa kentzen da, eta gero substantzia erreduzitzaileak sortzen dira bakterioen metabolismoan.
Journal of Dairy Science aldizkariko lan klasikoek bi etapako prozesu gisa azaltzen dute: lehenik, florak oxigenoa agortzen du; ondoren, esnearen osagaiek koloratzailea azkar erreduzitzen dute. Beraz, esnearen metileno urdinaren erredukzio-proba jarduera metaboliko bateratuaren saiakuntza funtzional gisa ulertu behar da, ez zelulak zenbatzeko tresna gisa. Metileno urdinaren redox portaerak aldaketa horren atzean dagoen kimika azaltzen du.
Oxigenoak amaierako egoera alderantzikatzen du. Airearen eraginpean jartzen den koloratzaile leuko erreduzitua berriro oxidatzen da eta urdin bihurtzen da. Beraz, astintzeak, isurtzeak, hodi zabalek eta laginaren gaineko aire-tarte handiak emaitza atzeratzen dute. Hodiaren barruko esneak kolorea galdu ondoren, eraztun urdin mehe batek askotan irauten du airearekiko gainazalean. Prozedura estandarrek eraztun hori onartzen dute, desagertu arte itxaron beharrean.
Organismo motak bigarren distortsio bat eragiten du. Koliformeek eta organismo laktiko askok koloratzailea azkar erreduzitzen dute. Organismo psikrotrofo eta termoduriko askok poliki erreduzitzen dute, edo ia ez dute erreduzitzen. Plakako zenbaketa bera duten bi esne-laginek ordu batzuetako aldearekin gal dezakete urdina. Gertaera horrek bakarrik baztertzen du denbora kolonia-kopuru bihurtzea.
Laborategiko prozedura kontrolatu bat
Landa-laneko bertsioak eta testuliburuetakoak xehetasunetan desberdinak dira; beraz, emaitza bat hura sortu duen metodoaren barruan bakarrik da baliozkoa. Elikagai-laborategiko ohiko bertsio bat honela egiten da:
- Bildu esne gordina ahalik eta aireztapen txikienarekin, eta hoztu berehala. Nahastu leunki irauliz lagina hartu aurretik.
- Jarri 10 mL esne hodi esteril batean, erabilerako koloratzaile-disoluzioaren 1 mL-rekin. Asko erabiltzen den kontzentrazio bat ehuneko 0.005 koloratzailea da, esnearen eta koloratzailearen arteko 10 eta 1 arteko proportzioarekin.
- Itxi hodia tapoiarekin, irauli leunki bi aldiz, eta sartu ur-bainu batean minutu gutxiren buruan. Ohiko inkubazioa 35 eta 38 gradu Celsius artean egiten da, erabilitako arauaren arabera. Jaso zer arauri jarraitzen diozun.
- Babestu hodiak argitik inkubazioan, argiak erredukzioa bizkortzen baitu.
- Egin irakurketa 30 minutuan, eta gero tarte finkoetan. Amaiera-puntua hodiko esnearen kolorea esne egosiaren erreferentziarekin bat datorren unea da, edo prozedurak zehaztutako kolore-galera lortzen den unea.
- Gorde esne bereko tratatu gabeko hodi bat ikusizko kontrol gisa, metodoak hala eskatzen duenean.
FAOren esnea aztertzeko eskuliburuak sekuentzia horren landa-laneko bertsio esplizitu bat ematen du: 10 mL esne eta 1 mL koloratzaile, tapoiarekin ixtea, leunki iraultzea, 37 eta 38 gradu inguruan inkubatzea eta irakurketak 30 minututik behin egitea. Kontrol-hodietan esne egosia erabiltzen da erredukzio-sistema naturala suntsitzeko eta kolore-konparazioaren erreferentzia finkatzeko.
Goiko eskemak kontrolaren mugak ezartzen ditu. Bolumen berak, koloratzaile bera, tenperatura bera, nahasketa bera, argiaren aurkako babes bera eta amaiera-puntuaren arau bera. Horietako bat aldatuz gero, erlojuaren emaitza ere aldatzen da. Horregatik, koloratzailearen kontzentrazio arbitrarioa erabiltzen duten etxeko bertsioak ezin dira laborategiko kalifikazioekin alderatu.
Zer adierazten du erredukzio-denborak?
Denbora luzeagoak jarduera orokor txikiagoa adierazten du zehaztutako baldintzetan. Denbora laburragoak jarduera orokor handiagoa adierazten du. Esnekiei buruzko irakaskuntza-taulek gutxi gorabeherako kalifikazioak lotzen dizkiete denbora horiei; adibidez, BISetik eratorritako sailkapen batean, 5 ordu edo gehiago oso ontzat jotzen dira, eta 30 minutu baino gutxiago txartzat.
Aldakortasun hori da ikasgaia. 5 orduko emaitza batek ez du kalifikazio unibertsalik. Hura definitu zuen prozedurari dagokio. Beraz, txostena egiteko formatu justifikagarria hau da:
MBRT X ordu da zehaztutako metodoaren arabera, metodo horren kalifikazioari dagokiona.
Inoiz ez da MBRT X kolonia-sortzaile unitate dela mL bakoitzeko. Standard Methods lanetik eratorritako jarraibideek diote koloratzailearen erredukzio-emaitzak ez direla bakterio-kopuru gisa jakinarazi behar. Metileno urdinarekin tindaketa sinplea egiteko prozedurak ere beste galdera bati erantzuten dio, mikroskopioan zelulen forma erakusten baitu, eta ez hodi bateko jarduera orokorra.
Interpretazioen eta mugen taula
Taula hau artikuluaren jatorrizko erreferentzia da. Irakurri errenkada bakoitza osorik. Gelaxka bakar bat ere ezin da bereizita interpretatu.
| Behaketa edo baieztapena | Zer adierazten duen | Zer ezin duen frogatu | Faktore nahasle nagusiak |
|---|---|---|---|
| Urdina azkar galtzea, 2 ordu baino gutxiagoan esne gordinaren sailkapen batean | Jarduera erreduzitzaile handia, karga handiarekin edo kontserbazio-kalitate eskasarekin bat datorrena | Espeziea, zenbaketa zehatza, toxinak edo pasteurizazioaren hutsegitea | Biltegiratze epela, koliforme ugariko flora, argia, koloratzaile-dosi txikia |
| Tarteko denbora, 2 eta 4 ordu artean | Jarduera ertaina; kalifikazioa zehaztutako sailkapenaren barruan bakarrik | Segurtasuna edo erreduzitzaile motelen gabezia | Inkubazio-tenperatura altua, aireztapen-desberdintasunak, gantzaren bereizketa |
| Erredukzio motela, 5 ordu edo gehiago | Jarduera orokor txikia sailkapen horretan | Patogenorik ez dagoela, pasteurizazioa edo segurtasun kimikoa | Antibiotiko-hondarrak, kontserbagarriak, oxigeno disolbatu gehigarria, koloratzaile-dosi handia |
| Eraztun urdinak gainazalean irauten du, gainerakoak kolorea galtzen duen bitartean | Berriro oxidatzea airearekiko interfazean, ertzeko efektu normala | Probak huts egin duela edo erreakzioa osatu gabe dagoela | Hodi zabala, tapoi laxoa, aztertzeko behin eta berriz irekitzea |
| Hodi zuria, berotutako esnea inkubatu ondoren | Erredukzio-sistema aldatua eta bizirik iraun dutenen jarduera | Berotzea baliozkotutako pasteurizazioaren baliokidea izan dela | Beroak eragindako kaltea, inkubazioan zeharreko konponketa, ondorengo kutsadura |
| Metodorik aipatu gabe emandako edozein MBRT balio bakar | Probaren baldintzak ezezagunak direla | Edozein kalifikazio edo zenbaketa | Koloratzailearen formulazioa, proportzioa, tenperatura, nahasketa eta amaiera-puntuaren araua: ezer ez da jakinarazi |
Hazkundean oinarritutako egiaztapenak, hala nola bakterioen hazkuntza-inguruneak, zenbaketa eta isolamendua egiteko bidea dira oraindik. Erredukzio-hodiak baheketa egiten du. Plakak identifikatu eta zenbatu egiten du.
Zer ezin du probak frogatu segurtasunari buruz?
Emaitza motel batek ezin du frogatu patogenorik ez dagoenik. Klinikoki garrantzitsua den dosi batean dagoen patogeno batek ekarpen txikia egin diezaioke oxigeno-kontsumo orokorrari. Patogenoak detektatzeko, organismo bakoitzerako metodo espezifikoak behar dira; egungo Standard Methods lanak arlo hori kalitatearen baheketa orokorretik bereizita lantzen du.
Ezin du pasteurizazioa egiaztatu. Tratamendu termikoa egiaztatzeko, fosfatasa alkalinoaren proba edo baliozkotutako beste metodo bat erabiltzen da, Codexen esnekien higieneari buruzko jarraibideen arabera. Hodi zuri edo urdin batek ez du ezer esaten sortaren denbora- eta tenperatura-historiari buruz.
Ezin du elikagai-segurtasuna ziurtatu. Segurtasuna patogenoen, aurrez sortutako toxinen, sendagai-hondarren, kutsatzaile kimikoen, hotz-katearen historiaren eta laginketaren ondorengo kutsaduraren araberakoa da. Codexek esnekien segurtasuna kontrol-neurrien kate gisa lantzen du, ez baheketa-emaitza bakar gisa.
Elikagai-laborategiko testuingurua ez da etxeko probak egitea
Esneki-laborategi batean, proba jasotako esnearen baheketa egiteko, hornitzaileak denboran zehar alderatzeko edo redox mikrobiologia gainbegiratuta irakasteko erabiltzen da. Laginak trazagarriak dira. Erreaktiboak estandarizatuta daude. Tenperaturak erregistratzen dira. Hondakinak laborategiko hondakinak kudeatzeko sistemara bidaltzen dira.
Etxeko probek ez dute horrelakorik. Sukaldeko bolumenak gutxi gorabeherakoak dira. Interneten saltzen diren koloratzaileen kontzentrazioak oso aldakorrak dira. Inkubazioa sarritan gela epel batean egiten da, bainu kalibratu batean egin beharrean. Kolore-aldaketa gertatzen da hala ere; horrek emaitza fidagarria dela pentsarazten du, zentzua ematen zioten kontrol guztiak falta diren arren.
Arriskurik handiena portaeran dago. Etxean hodi urdin bat ikusteak esne gordina edatera bultzatzen du, nahiz eta laborategi batek esne hori plakako zenbaketak, patogenoen baheketak eta hondarren egiaztapenak egitera bidaliko lukeen oraindik. Esnearen metileno urdinaren proba esne gordina jasotzean kalifikatzeko diseinatu zen, ez esnea kontsumitzeko onargarritzat jotzeko. Erresazurinaren bidezko baheketa azkarragoak muga bera du: kolorearen irakurketa azkarragoa da, baina oraindik ez du patogenoei buruzko erantzunik ematen.
Laborategiko mahairako arau labur bat
Estandarizatu koloratzailea, proportzioa, tenperatura, nahasketa, argia eta amaiera-puntua. Jakinarazi denbora metodoaren izenarekin eta kalifikazioarekin batera. Interpretatu minutuak biltegiratze-historia, flora mota, hondarrak eta laginketaren kalitatea kontuan hartuta. Denbora labur batek ikertzea merezi duen jarduera seinalatzen du. Denbora luze batek ez du inoiz segurtasuna ziurtatzen.