পৰীক্ষাগাৰত মিথিলিন ব্লু শনাক্তকৰণ: অৱলোহিত বৰ্ণালী আৰু পৰিপূৰক পদ্ধতি

ধৰি লওক, তিনিটা পৰীক্ষাগাৰে একেটা নীলা গুড়ি লাভ কৰিলে। প্ৰথমটোৱে অৱলোহিত বৰ্ণালী ৰেকৰ্ড কৰি ইয়াক মিথিলিন ব্লু বুলি ঘোষণা কৰিলে। দ্বিতীয়টোৱে ক্ৰোমাটোগ্ৰাফী কৰি 0.4% Azure B থকা বুলি প্ৰতিবেদন দিলে। তৃতীয়টোৱে স্ফটিকত এক্স-ৰে বিবৰ্তন ঘটাই এটা হাইড্ৰেট ৰূপৰ নাম নিৰ্ণয় কৰিলে। তিনিওটা সঠিক, আৰু কোনো এটাই বাকী দুটা প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়া নাই। এটা ফলাফলক তিনিওটা প্ৰশ্নৰ উত্তৰ বুলি ধৰি ল’লেই বিভ্ৰান্তি আৰম্ভ হয়।

এই প্ৰবন্ধটোৱে সেই প্ৰশ্নবোৰ পৃথক কৰে। অৱলোহিত শনাক্তকৰণে ৰেফাৰেন্স মানদণ্ডৰ সৈতে তুলনা কৰি আণৱিক পৰিচয় প্ৰতিষ্ঠা কৰে। ক্ৰোমাটোগ্ৰাফীয়ে উপাদানগত গঠন প্ৰতিষ্ঠা কৰে। বিবৰ্তনে কঠিন অৱস্থাৰ ৰূপ প্ৰতিষ্ঠা কৰে। পৰিচয়ৰ মিল পৰীক্ষাত উত্তীৰ্ণ হোৱাটো বিশুদ্ধতাৰ প্ৰমাণপত্ৰ নহয়।

অৱলোহিত শনাক্তকৰণে এটা প্ৰশ্নৰ ভাল উত্তৰ দিয়ে

মিথিলিন ব্লুৰ বাবে ঔষধসংহিতা-নিৰ্ধাৰিত পৰিচয় পৰীক্ষা হৈছে মানদণ্ডৰ সৈতে বৰ্ণালীৰ তুলনা, শীৰ্ষবোৰৰ এখন যাচাই-তালিকা নহয়। USP মিথিলিন ব্লু মনোগ্ৰাফৰ পূৰ্বদৰ্শন অনুসৰি, শনাক্তকৰণ A-ত ATR অপটিক্স বা পটাছিয়াম ব্ৰোমাইড পেলেট ব্যৱহাৰ কৰি অৱলোহিত বৰ্ণালীবীক্ষণৰ কথা উল্লেখ আছে। নমুনাৰ বৰ্ণালী USP ৰেফাৰেন্স মানদণ্ডৰ বৰ্ণালীৰ সৈতে মিলিব লাগিব, আৰু নমুনা তথা মানদণ্ড সমতুল্য পৰিস্থিতিত প্ৰস্তুত আৰু ৰেকৰ্ড কৰিব লাগিব। কোনো নিৰ্দিষ্ট নিৰ্ণায়ক তৰংগসংখ্যাৰ তালিকাই সিদ্ধান্ত নিৰ্ধাৰণ নকৰে। বৰ্ণালী দুটা ওপৰত ওপৰকৈ ৰাখি কৰা তুলনাই কৰে।

পদ্ধতিৰ এই বাছনিয়ে মিথিলিন ব্লুৰ FTIR বৰ্ণালীৰ আচৰণ প্ৰতিফলিত কৰে। আটাইতকৈ শক্তিশালী বৈশিষ্ট্যবোৰ ফিংগাৰপ্ৰিণ্ট অঞ্চলত থাকে। প্ৰকাশিত সাহিত্যত মূল সংযুগ্ম বলয়ৰ বেণ্ডটো ধাৰাবাহিকভাৱে 1590 ৰ পৰা 1600 cm-1-ৰ ওচৰত নিৰ্ধাৰণ কৰা হয়, য’ত এৰোমেটিক কাৰ্বন-কাৰ্বন আৰু কাৰ্বন-নাইট্ৰ’জেনৰ প্ৰসাৰণ কম্পন পৰস্পৰৰ সৈতে সংযোজিত হয়। 1490 আৰু 1390 cm-1-ৰ ওচৰৰ অন্য বেণ্ডবোৰত বলয়, কাৰ্বন-নাইট্ৰ’জেন আৰু কাৰ্বন-হাইড্ৰ’জেনৰ বিকৃতি কম্পনৰ বৈশিষ্ট্য থাকে। 1355 আৰু 1330 cm-1-ৰ ওচৰৰ বেণ্ডবোৰ ডাইমিথাইলএমিনো কাৰ্বন-নাইট্ৰ’জেন বন্ধন আৰু মিথাইলৰ বিকৃতি কম্পনৰ সৈতে জড়িত। 1225 ৰ পৰা 1250 cm-1-ৰ ওচৰৰ বৈশিষ্ট্যবোৰ হেটেৰ’চাইক্লিক গাঁথনিৰ অন্তৰ্গত, আনহাতে 1170 ৰ পৰা 1130 আৰু 1066 cm-1-ৰ ওচৰৰ বেণ্ডবোৰত কাৰ্বন-ছালফাৰৰ বৈশিষ্ট্য থাকে, লগতে 880 cm-1-ৰ ওচৰত এৰোমেটিক C-H-ৰ বেঁকা কম্পন দেখা যায়। প্ৰসাৰণ কম্পনবোৰ অধিক তৰংগসংখ্যাত দেখা যায়: এৰোমেটিক C-H প্ৰায় 3040 cm-1-ত আৰু N-methyl C-H প্ৰায় 2900 আৰু 3000 cm-1-ৰ মাজত। প্ৰকাশিত বেণ্ড-নিৰ্ধাৰণবোৰৰ সূক্ষ্ম বিৱৰণত পাৰ্থক্য থাকে, কাৰণ ফেন’থায়াজিনিয়ামৰ মূল গাঁথনিয়ে এটা সংযোজিত ব্যৱস্থা হিচাপে কম্পন কৰে। সেয়ে যিকোনো এখন নিৰ্ধাৰণ-তালিকাক একমাত্ৰ নিশ্চিত ব্যাখ্যা হিচাপে নহয়, প্ৰকাশিত ব্যাখ্যা হিচাপে গণ্য কৰক।

প্ৰস্তুতিৰ দুটা প্ৰভাৱৰ প্ৰতি মনোযোগ দিয়া উচিত, কাৰণ ৰঞ্জকটো সলনি নকৰাকৈয়ে সিহঁতে মিথিলিন ব্লুৰ IR বৰ্ণালী সলনি কৰে। প্ৰথমতে, জলযুক্ত পদাৰ্থত 3300 ৰ পৰা 3500 cm-1-ৰ আশে-পাশে এটা বহল O-H বেণ্ড-সমষ্টি আৰু 1630 ৰ পৰা 1640 cm-1-ৰ ওচৰত পানীৰ বেঁকা কম্পন দেখা যায়, আৰু বিভিন্ন হাইড্ৰেট ৰূপে ফিংগাৰপ্ৰিণ্ট বেণ্ডবোৰ জোখিব পৰা পৰিমাণে স্থানান্তৰিত কৰে। দ্বিতীয়তে, KBr পেলেটৰ মেট্ৰিক্স আৰ্দ্ৰতাগ্ৰাহী: শোষিত আৰ্দ্ৰতাই ঠিক সেই পানীৰ অঞ্চলবোৰতে বেণ্ড সৃষ্টি কৰে আৰু নমুনাৰ হাইড্ৰেটৰ পানী বুলি ভুলকৈ ধৰা পৰিব পাৰে। ATR নমুনা-গ্ৰহণত KBr মেট্ৰিক্সৰ প্ৰয়োজন নহয়, কিন্তু ATR-ৰ তীব্ৰতা তৰংগসংখ্যা-নিৰ্ভৰ অনুপ্ৰৱেশ গভীৰতাৰ সৈতে সলনি হয়। সেয়ে একেটা গুড়িৰ ATR বৰ্ণালী আৰু ট্ৰেন্সমিছন বৰ্ণালী পোনপটীয়াকৈ ওপৰত ওপৰকৈ ৰাখি তুলনা কৰিব নোৱাৰি। ঔষধসংহিতাৰ প্ৰয়োজনীয়তাৰ পৰাই ব্যৱহাৰিক নিয়মটো আহে: একে কৌশলেৰে ৰেকৰ্ড কৰা নমুনা আৰু ৰেফাৰেন্স তুলনা কৰক, আৰু কোনটো কৌশল ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল সেয়া নথিভুক্ত কৰক। এই বৰ্ণালীবোৰৰ আঁৰত থকা কেটায়ন, লৱণ আৰু হাইড্ৰেটৰ মূল ৰসায়নৰ বাবে মিথিলিন ব্লুৰ গঠন আৰু ধৰ্মৰ তথ্যসূত্ৰ চাওক।

বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি বাছনিৰ তালিকা

এই তালিকাখন পদ্ধতি বাছনিৰ সঁজুলি। কোনো পদ্ধতিয়ে কোনটো প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়ে, উত্তীৰ্ণ ফলাফলে কি প্ৰতিষ্ঠা কৰে আৰু কি অপ্ৰমাণিত হৈ থাকে, জানিবলৈ প্ৰতিটো শাৰী পথালিকৈ পঢ়ক।

অৱলোহিত বৰ্ণালীৰ মিল কিয় বিশুদ্ধতাৰ প্ৰমাণপত্ৰ নহয়

পৰিচয়ৰ মিলে ভুল ৰঞ্জক হোৱাৰ সম্ভাৱনা নাকচ কৰে। ই নমুনাত থকা সকলো উপাদানৰ তালিকা নিদিয়ে। তিনিটা সীমাবদ্ধতা আটাইতকৈ গুৰুত্বপূৰ্ণ।

প্ৰথমতে, ঘনিষ্ঠভাৱে সম্পৰ্কিত যৌগবোৰৰ অৱলোহিত বৰ্ণালী একেধৰণৰ দেখা যায়। Azure B আৰু মিথিলিন ব্লুৰ মাজত কেৱল এটা মিথাইল গোটৰ পাৰ্থক্য আছে, সেয়ে ইয়াৰ বৰ্ণালী মিথিলিন ব্লুৰ সৈতে ঘনিষ্ঠভাৱে মিলে। কেইবা শতাংশ Azure B থকা মিশ্ৰণৰ বৰ্ণালীও মিথিলিন ব্লুৰ ৰেফাৰেন্সৰ ওপৰত ভালকৈ মিলে। সেই অশুদ্ধি ধৰা পেলোৱাটো ক্ৰোমাটোগ্ৰাফীৰ কাম, যাৰ বিষয়ে মিথিলিন ব্লুৰ অশুদ্ধি আৰু পৰীক্ষা-পদ্ধতিৰ নিৰ্দেশিকা-ত আলোচনা কৰা হৈছে।

দ্বিতীয়তে, অৱলোহিত বৰ্ণালীবীক্ষণ হৈছে সামগ্ৰিক নমুনা বিশ্লেষণৰ কৌশল, যাৰ স্বল্প পৰিমাণৰ উপাদানৰ প্ৰতি সংবেদনশীলতা সীমিত। সম্পৰ্কিত ৰঞ্জক, অৱশিষ্ট দ্ৰাৱক বা অজৈৱ অৱশিষ্টৰ সৰু পৰিমাণ মূল বেণ্ডবোৰৰ তলত লুকাই থাকে। অতিৰিক্ত শীৰ্ষ নথকাটো অশুদ্ধি নথকাৰ দুৰ্বল প্ৰমাণ।

তৃতীয়তে, ৰেফাৰেন্স মানদণ্ডই গোটেই তুলনাটো নিয়ন্ত্ৰণ কৰে। অৱক্ষয় হোৱা, জলযোজনৰ বাবে বৰ্ণালী স্থানান্তৰিত হোৱা বা ভুলকৈ ব্যৱহাৰ কৰা মানদণ্ডই তুলনাৰ ভিত্তি সলনি কৰে। অমিল কৌশলৰ যোৰেও একে কাম কৰে, যেনে KBr ৰেফাৰেন্সৰ সৈতে ATR নমুনাৰ বৰ্ণালী বিচাৰ কৰা। প্ৰতিটো সিদ্ধান্তৰ সৈতে মানদণ্ডৰ লট, কৌশল আৰু প্ৰস্তুতিৰ তথ্য ৰেকৰ্ড কৰক।

মিশ্ৰণৰ ক্ষেত্ৰত আৰু এটা সাৱধানতা আছে। বৰ্ণালী বেছিভাগে মিলিলেও যদি শীৰ্ষৰ কাষত কাঁধসদৃশ অংশ বা তীব্ৰতাৰ অস্বাভাৱিকতা থাকে, তেন্তে ইয়াক কেৱল টোকা যোগ কৰি উত্তীৰ্ণ বুলি গণ্য কৰিব নোৱাৰি। ই শনাক্তকৰণৰ আগতে নমুনাৰ উপাদানবোৰ পৃথক কৰাৰ সংকেত।

ব্যৱহাৰত পৰিপূৰক পদ্ধতি

মিথিলিন ব্লুৰ HPLC-এ উপাদানগত গঠনৰ সেই উত্তৰ দিয়ে, যিটো অৱলোহিত বৰ্ণালীয়ে দিব নোৱাৰে। বৰ্তমানৰ ঔষধসংহিতা-নিৰ্ধাৰিত পদ্ধতিত ট্ৰাইফ্লুৰ’এচেটিক এচিড থকা পানী-এচিট’নাইট্ৰাইল গ্ৰেডিয়েণ্টৰ সৈতে ফেনাইল-ধৰণৰ কলাম ব্যৱহাৰ কৰা হয় আৰু 246 nm-ত সংকেত ধৰা হয়, দৃশ্যমান বেণ্ডত নহয়। ৰেফাৰেন্স মানদণ্ডৰ সৈতে ৰিটেনশ্যন সময়ৰ মিলৰ পৰা পৰিচয় নিৰ্ণয় কৰা হয়; একে তুলনাই পৰিমাণ নিৰ্ণয়তো সহায় কৰে। জৈৱ অশুদ্ধিৰ পৰীক্ষাত Azure B-ৰ নিজস্ব ৰেফাৰেন্স পদাৰ্থ ব্যৱহাৰ কৰি ইয়াক শনাক্ত কৰা হয়; মিথিলিন ব্লুৰ আপেক্ষিক ৰিটেনশ্যন 1.0-ৰ বিপৰীতে ইয়াৰ মান প্ৰায় 0.8, আৰু দুয়োটা শীৰ্ষৰ মাজত উচ্চ বিভেদন প্ৰয়োজন। তৰংগদৈৰ্ঘ্যৰ বাছনিটো মন কৰক: ডিমিথাইলেশন শ্ৰেণীৰ শোষণ ক্ৰমে ৰঙা প্ৰান্তৰ ফালে আগবাঢ়ে, প্ৰায় 600 nm-ত থকা থায়’নিনৰ পৰা এজুৰ C, এজুৰ A আৰু Azure B হৈ প্ৰায় 670 nm-ত থকা মিথিলিন ব্লুলৈ। সেয়ে প্ৰায় 660 nm-ত স্থিৰ কৰা ডিটেক্টৰে শ্ৰেণীটোৰ সদস্যবোৰৰ প্ৰতি অসম সঁহাৰি দিয়ে আৰু কিছুমান সমগোত্ৰীয় যৌগৰ পৰিমাণ কম দেখুৱায়। প্ৰয়োজন হ’লে গোটেই শ্ৰেণীটোৰ সম্পূৰ্ণ প্ৰফাইল নিৰ্ণয়ৰ বাবে প্ৰতিটো বিশ্লেষ্যৰ যোগ্যতা-যাচাইকৃত মানদণ্ডৰ সৈতে C18 LC-MS/MS পদ্ধতি ব্যৱহাৰ কৰিব লাগে।

পাউডাৰ বিবৰ্তনে কঠিন অৱস্থাৰ সেই প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়ে, যাৰ তথ্য ওপৰৰ দুয়োটা পদ্ধতিয়ে হয় নষ্ট কৰে নহয় উপেক্ষা কৰে: ক্ৰোমাটোগ্ৰাফীৰ বাবে গুড়ি দ্ৰৱীভূত কৰিলে স্ফটিকৰ তথ্য মচি যায়, আৰু আণৱিক কম্পনে দীৰ্ঘ-পৰিসৰৰ সজ্জাৰ পৰিৱৰ্তে বন্ধনৰ তথ্য দিয়ে। বিবৰ্তনৰ আৰ্হিয়ে হাইড্ৰেট প্ৰাৱস্থা আৰু স্ফটিকীয়তা পৃথক কৰে, আৰু অধিকাংশ পদাৰ্থতকৈ মিথিলিন ব্লুৰ বাবে এই পৰীক্ষা অধিক প্ৰয়োজনীয়। ৰেগাৰ আৰু তেওঁৰ সহকৰ্মীসকলৰ কঠিন-অৱস্থা বিষয়ক কামত পাঁচটা পৃথক হাইড্ৰেট গঠন চিনাক্ত কৰা হৈছিল, যাৰ ভিতৰত এটা পেণ্টাহাইড্ৰেট, দুটা ডাইহাইড্ৰেট, এটা মন’হাইড্ৰেট আৰু এটা মধ্যৱৰ্তী হাইড্ৰেট আছিল; বৈশিষ্ট্য নিৰ্ণয় কৰা ৰূপবোৰৰ মাজত কোনো প্ৰকৃত ট্ৰাইহাইড্ৰেট পোৱা নগ’ল। ইয়াত পৰীক্ষাগাৰত পদাৰ্থটো কেনেকৈ ব্যৱহাৰ কৰা হয়, সেয়া গুৰুত্বপূৰ্ণ: আৰ্দ্ৰতা আৰু উষ্ণতাই হাইড্ৰেটৰ স্থিৰতা সলনি কৰে, আৰু অতিমাত্ৰা পিহিলে প্ৰাৱস্থা সলনি হ’ব পাৰে বা স্ফটিকীয়তা কমিব পাৰে। সেয়ে আপেক্ষিক আৰ্দ্ৰতা আৰু উষ্ণতা নিয়ন্ত্ৰণ আৰু নথিভুক্ত কৰক, আৰু পিহাৰ পৰিমাণ ন্যূনতম ৰাখক। হাইড্ৰেটৰ লেবেল আৰু জোখা ভৰৰ ওপৰত ইয়াৰ প্ৰভাৱৰ বিষয়ে মিথিলিন ব্লুৰ হাইড্ৰেট ৰূপ আৰু লেবেলিং-ত অধিক আলোচনা কৰা হৈছে।

UV-Vis শোষণে সহায়ক ভূমিকা পালন কৰে। পৰিচিত শোষণৰ সৰ্বোচ্চ মানবোৰে দ্ৰৱণৰ প্ৰত্যাশিত আচৰণ নিশ্চিত কৰে আৰু ঘনত্ব নিৰ্ণয়ত সহায় কৰে। কিন্তু প্ৰত্যাশিত তৰংগদৈৰ্ঘ্যত শোষণ কৰা নীলা দ্ৰৱণ মিথিলিন ব্লুৰ সৈতে সামঞ্জস্যপূৰ্ণ হ’লেও ইয়াৰ পৰিচয় প্ৰমাণ নকৰে, কাৰণ সম্পৰ্কিত ৰঞ্জকবোৰেও ওচৰৰ তৰংগদৈৰ্ঘ্যত শোষণ কৰে।

কিনাৰ আগতে কি সুধিব লাগে

এই পাৰ্থক্যবোৰ ক্ৰয়-সংক্রান্ত প্ৰশ্নত প্ৰয়োগ কৰক। কোনটো লট পৰীক্ষা কৰা হৈছিল, কোনটো কৌশলে পৰিচয় প্ৰতিষ্ঠা কৰিছিল, HPLC অশুদ্ধি পৰীক্ষাত Azure B ৰেফাৰেন্স পদাৰ্থ ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল নে আৰু হাইড্ৰেট ৰূপৰ বৈশিষ্ট্য নিৰ্ণয় কৰা হৈছিল নে কেৱল ধৰি লোৱা হৈছিল, সোধক। সকলোতকৈ গুৰুত্বপূৰ্ণভাৱে, প্ৰমাণপত্ৰখনে সম্পূৰ্ণ নিৰ্দিষ্ট মানদণ্ড সামৰি লয় নে কেৱল বাছনি কৰা পৰীক্ষা সামৰি লয়, সোধক। ঔষধসংহিতাৰ মানদণ্ড মানি চলাৰ দাবী কৰা বহু বিক্ৰেতাই কেৱল গধুৰ ধাতুৰ পৰীক্ষা কৰে, ফলত পৰিচয়, পৰিমাণ নিৰ্ণয়, জৈৱ অশুদ্ধি, দ্ৰাৱক আৰু অণুজীৱ-সংক্রান্ত প্ৰশ্নবোৰৰ উত্তৰ নোপোৱাকৈ থাকে।

Blupreme-এ মিথিলিন ব্লুৰ এজন ঔষধ নিৰ্মাতাৰ সৈতে অংশীদাৰিত্বত সম্পূৰ্ণ USP নিৰ্দিষ্ট মানদণ্ড অনুসৰি পৰীক্ষা কৰে, য’ত পৰিচয়, বিশুদ্ধতা, জৈৱ অশুদ্ধি, অৱশিষ্ট দ্ৰাৱক, মৌলিক অশুদ্ধি, প্ৰজ্বলনৰ পিছৰ অৱশিষ্ট, অণুজীৱৰ সীমা আৰু বেক্টেৰিয়াৰ এণ্ড’টক্সিন অন্তৰ্ভুক্ত। প্ৰতিটো বেচৰ ৰাজহুৱা বিশ্লেষণৰ প্ৰমাণপত্ৰ Blupreme-ৰ গুণমান পৰীক্ষা-ত প্ৰকাশ কৰা হয়, যাতে পৰিমাণ নিৰ্ণয়ৰ ভিত্তি আৰু অশুদ্ধিৰ ফলাফল অনুমান কৰাৰ পৰিৱৰ্তে পোনপটীয়াকৈ পঢ়িব পৰা যায়। 100%-ৰ ওচৰৰ ফলাফলৰ ক্ষেত্ৰতো গণনাৰ ভিত্তি উল্লেখ কৰিব লাগে, যিটো 100 শতাংশৰ ওপৰৰ পৰিমাণ নিৰ্ণয়ৰ নিৰ্দেশিকা-ত ব্যাখ্যা কৰা হৈছে। পৰিচয়ৰ মিলে অনুসন্ধান আৰম্ভ কৰে। সম্পূৰ্ণ নথিয়ে ইয়াৰ সমাপ্তি ঘটায়।