በሜቲሊን ብሉ ቀለም መቀባት፦ የማይክሮስኮፕ ምርመራ ዘዴዎችና የእውነተኛ ምስሎች አትላስ

በሜቲሊን ብሉ ቀለም መቀባት፣ ያለዚያ በደብዛዛ ሁኔታ የሚታዩ የሕዋስ ባህሪያትን በብሩህ-መስክ የማይክሮስኮፕ ምርመራ በቀላሉ ለመለየት ያግዛል። ተማሪዎች የጉንጭ ሕዋስ ኒውክሊየስን እንዲያገኙ ወይም የጥቃቅን ሕይወታዊ ፍጥረታትን ውጫዊ ቅርጽና አደራደር እንዲመረምሩ ሊረዳ ይችላል። ይሁን እንጂ ሰማያዊ ነገር ማየት ምልከታ ብቻ ነው። የፍጥረቱን ስም መለየት፣ መጠኑን መለካትና በሽታ እንደሚያመለክት መወሰን የተለያዩ ተግባራት ናቸው።

የሽፋኑ ምስል የንጽጽር መርህን ያሳያል። ከታች ያለው አትላስ በገለልተኛ ምንጮች የተመዘገቡ ናሙናዎችን የሚያሳዩ እውነተኛ ፎቶግራፎችን፣ ከመጀመሪያው ምንጭ መረጃቸው ጋር ይዟል።

ሜቲሊን ብሉ ምን ያሳያል?

ሜቲሊን ብሉ ቤዚክ ማቅለሚያ ነው፤ ቀለም ያለው አዮኑ አዎንታዊ የኤሌክትሪክ ክፍያ ይይዛል። OpenStax ስለ ናሙና ቀለም መቀባት በሚያብራራበት ክፍል እንደሚገልጸው፣ ቤዚክ ማቅለሚያዎች አሉታዊ የኤሌክትሪክ ክፍያ ካላቸው የሕዋስ ንጥረ ነገሮች ጋር ይገናኛሉ፣ ሕዋሳትም ከቀላል ቀለም ያለው ዳራ ጎልተው እንዲታዩ ሊያደርጉ ይችላሉ። በተስማሚ ዝግጅቶች ውስጥ፣ ሜቲሊን ብሉ በኑክሊክ አሲድ የበለጸጉ ክፍሎችንና ማቅለሚያውን የሚያስተሳስሩ ሌሎች መዋቅሮችን ጎልተው እንዲታዩ ያደርጋል።

በቀላል የቀለም መቀባት ዘዴ፣ ንጽጽር የሚፈጥረው አንድ ማቅለሚያ ብቻ ነው። ስለዚህ የተለያዩ ፍጥረታት አንድ ዓይነት ሳይሆኑ ሰማያዊ ሊመስሉ ይችላሉ። በመጀመሪያ ጠቃሚ የሆኑት ጥያቄዎች የሚታየውን የሚገልጹ ናቸው፤ ነገሮቹ ክብ ናቸው ወይስ ረጃጅም፣ ተለያይተው ነው ወይስ በቡድን ተሰብስበው፣ በእኩል ሁኔታ ቀለም ተቀብተዋል ወይስ ውስጣዊ ክፍሎቻቸው ይለያያሉ? ቀለሙን እንደ ምደባ ውጤት ከመተርጎምዎ በፊት በቀላል ቀለም መቀባትና በግራም ቀለም መቀባት መካከል ያለውን ልዩነት ይመልከቱ።

ንጽጽርና የዝርዝር መለየት ችሎታ የተለያዩ ናቸው። ንጽጽር አንድን ነገር ከአካባቢው ለመለየት ያግዛል፤ የዝርዝር መለየት ችሎታ ደግሞ በቅርብ የሚገኙ ዝርዝሮችን ለይቶ ያሳያል። ምስል ይበልጥ ጥቁር መሆኑ ተጨማሪ መዋቅሮች በግልጽ ተለይተው እንደሚታዩ ዋስትና አይሰጥም። እያንዳንዱንም ጥቁር ቅንጣት የሕዋስ አካል ብሎ መሰየም ተገቢ አይደለም።

ቀለም ያልተቀቡ ዝግጅቶች፣ ቀለም የተቀቡ እርጥብ ዝግጅቶችና ስሚሮች

ቀለም ያልተቀባ፣ ወይም በተፈጥሯዊ ሁኔታው ያለ፣ እርጥብ ዝግጅት ማቅለሚያ ሳይጨመርበት ለምልከታ ያስችላል፤ ነገር ግን ናሙናውን ከመጀመሪያው አካባቢ ማውጣት እንኳን ለውጥ ያመጣበታል። ቀለም በሚቀባ እርጥብ ዝግጅት ውስጥ፣ ናሙናው በሽፋን መስታወት ሥር ባለ ፈሳሽ ውስጥ እያለ ሬኤጀንት ይጨመርበታል። በፊክሴሽን የተረጋጋ ስሚር ለማዘጋጀት ናሙናው በስላይድ ላይ ይዘረጋል፣ ከቀጣይ ሂደቶች በፊትም የተወሰነ የማረጋጋት ዘዴ ይተገበራል። የOpenStax የዝግጅት አጠቃላይ ማብራሪያ እርጥብ ዝግጅቶችን ከፊክሴሽን ይለያል፤ በፊክሴሽን የተረጋጉ ፍጥረታት መደበኛ እንቅስቃሴያቸውን ወይም ሜታቦሊዝማቸውን ለማየት ለምን እንደማያስችሉም ያብራራል።

እነዚህ ዝግጅቶች የተለያዩ ጥያቄዎችን ይመልሳሉ፦

ለክፍል ውስጥ ንጽጽር፣ በማስተማሪያው ፕሮቶኮል መሠረት በተለየ የተዘጋጀና ቀለም የተቀባ ናሙና ከመመርመርዎ በፊት፣ ቀለም ያልተቀባውን ዝግጅት ይመዝግቡ። የብርሃንና የምስል ቀረጻ ቅንብሮችን ለንጽጽር ተስማሚ እንዲሆኑ ያድርጉ። ሁለት የተለያዩ ሕዋሳት ፎቶግራፍ ከተነሱ፣ እንደ ምሳሌዎች ይግለጹአቸው እንጂ የአንድ ሕዋስ በፊትና በኋላ መዝገብ እንደሆኑ አያቅርቡአቸው።

የማይክሮስኮፕ ምርመራ አትላስ፦ ሦስት እውነተኛ ቀለም የተቀቡ ናሙናዎች

ይህ አትላስ በክፍት ፈቃድ የቀረቡ ሦስት የማይክሮስኮፕ ፎቶግራፎችን የያዘ የራሳችን ምርጫና ትርጓሜ ነው። ናሙናዎቹንና ማቅለሚያዎቹን የለዩት የምንጩ ፎቶግራፍ አቅራቢዎች ናቸው። እኛ የናሙናዎቻቸውን ማንነት በገለልተኛ ምርመራ አላረጋገጥንም። ምስሎቹ ሳይቆረጡ፣ የምስል መረጃ ሳይጠፋ ወደ WebP ተቀይረው እንደገና ቀርበዋል፤ ተጨማሪ ባህሪያትም ሆኑ የቀለም ለውጦች አልተደረጉባቸውም።

ምስል 1፦ የሰው ጉንጭ ሕዋሳት

ናሙና፦ የሰው ጉንጭ ሕዋሳት። ማቅለሚያ፦ ሜቲሊን ብሉ። ማጉላት፦ 400×፣ እንደ ፎቶግራፍ አንሺው መረጃ። የመለኪያ አሞሌ፦ አይገኝም፤ ምንጩ የፒክሰል መጠን ካሊብሬሽን መረጃ አይሰጥም። በFritzmann2002 የተነሳ ፎቶግራፍ፣ 2017፣ ከየሰው ጉንጭ ሕዋሳት (በሜቲሊን ብሉ ቀለም የተቀቡ)፣ በCC BY-SA 4.0 ፈቃድ የቀረበ። ይህ እንደገና የቀረበው ምስል ያንኑ ፈቃድ ይጠብቃል።

ተለይቶ ከሚታይ አንድ ሕዋስ ይጀምሩ፤ ጠቆር ያለውን ኒውክሊየሱን በዙሪያው ካለው ሰማያዊ ሳይቶፕላዝም ለመለየት ይቀላል። ከዚያ ከሥሩ ያሉትን ተደራራቢ ሕዋሳት ይመርምሩ። መደራረብ ድንበርን ተከትሎ ለመለየት ያስቸግራል፣ በአንድ ቦታም ጠቆር ያለ ክፍል ሊፈጥር ይችላል። ይህን ምስል ውጫዊ ቅርጾችን ተከትሎ ለመለየት ልምምድ ይጠቀሙበት እንጂ እያንዳንዱን ጥቁር ነጠብጣብ እንደ ኒውክሊየስ አይቁጠሩ። የጉንጭ ሕዋስ ምልከታ መመሪያ ለዚህ ናሙና የተዘጋጀውን ልምምድ በዝርዝር ያቀርባል።

ምስል 2፦ የሽንኩርት ሕዋሳት

ናሙና፦ የሽንኩርት ሕዋሳት፣ ምንጩ እንደለየው። ማቅለሚያ፦ ሜቲሊን ብሉ። ማጉላት፦ “200x” በመጀመሪያው የፋይል ስም ውስጥ ይገኛል፤ በገለልተኛ ምርመራ አልተረጋገጠም። የመለኪያ አሞሌ፦ አይገኝም፤ የካሊብሬሽን መረጃ አልቀረበም። በAlvy16 የተነሳ ፎቶግራፍ፣ 2019፣ ከየሽንኩርት ሕዋስ 200x፣ በCC BY 4.0 ፈቃድ የቀረበ።

ረጃጅሞቹ ክፍሎች የተደራጀ ንብርብር ይፈጥራሉ። ረጃጅም የጋራ ድንበሮቻቸውን በምስል 1 ካሉት ወጣ ገባ ውጫዊ ቅርጾች ጋር ያነጻጽሩ። ጎልቶ የሚታየውን ጥቁር ንጥረ ነገርና በመመልከቻ መስኩ ውስጥ ያለውን ያልተመጣጠነ ድምቀትም ልብ ይበሉ። ፎቶግራፉ እያንዳንዱ ጥቁር ክምችት ምን እንደሆነ አያረጋግጥም። ቀለም የያዘውን ሁሉ ከመሰየም ይልቅ፣ ጠቃሚ የምልከታ መዝገብ ከዝግጅት ወይም ከምስል ቀረጻ የመነጩ የተሳሳቱ ገጽታዎችንና እርግጠኛ ያልሆኑ ነጥቦችን ለምን ማካተት እንዳለበት ያሳያል።

ምስል 3፦ ምንጩ Candida spp. ብሎ የለየው እርሾ

ናሙና፦ Candida spp.፣ እንደ ፎቶግራፍ አንሺው መረጃ። ማቅለሚያ፦ በሜቲሊን ብሉ ቀላል አዎንታዊ ቀለም መቀባት። ማጉላት፦ አይገኝም። የመለኪያ አሞሌ፦ አይገኝም፤ የፒክሰል መጠን ካሊብሬሽን መረጃ አልቀረበም። በMarta፣ በWikimedia የተጠቃሚ ስሟ Martunia.g፣ የተነሳ ፎቶግራፍ፣ 2021፣ ከበሜቲሊን ብሉ አዎንታዊ ቀለም መቀባት 2፣ በCC BY 4.0 ፈቃድ የቀረበ።

ጥቅጥቅ ያሉትን ሰማያዊ ቡድኖች ከአነስተኛ መጨናነቅ ካለባቸው ጠርዞች ጋር ያነጻጽሩ። ነገሮቹ ብዙ ባልተደራረቡባቸው ቦታዎች፣ የእያንዳንዳቸውን ውጫዊ ቅርጽ ተከትሎ መለየት ይቀላል። Candida የሚለው ስም ከምንጩ መዝገብ የመጣ ነው እንጂ በዚህ ፎቶግራፍ ላይ ከተደረገ የዝርያ መለያ ምርመራ የተገኘ አይደለም። ይህ ምስል ሕዋሳቱ በሕይወት መኖራቸውን የሚያሳይ ውጤትም አይሰጥም። የእርሾ በሕይወት መኖርና የሕዋስ መተንፈስ ሙከራዎች የራሳቸውን ሁኔታዎች፣ የቁጥጥር ናሙናዎችና ትርጓሜ ይፈልጋሉ።

መለኪያን በትክክል ማንበብ

እነዚህ ምስሎች በእይታ ለማነጻጸር ያግዛሉ እንጂ በማይክሮሜትር ለመለካት ወይም በምስሎቹ መካከል ትክክለኛ የሕዋስ መጠኖችን ለማነጻጸር አያስችሉም። የተገለጸው የማጉላት መጠን የጎደለውን የካሜራ ካሊብሬሽን መረጃ አይተካም። ምስሉ የሚታይበትን መጠን መቀየር፣ የሚመስለውን የማጉላት መጠን ይለውጣል።

ለራስዎ ምስሎች፣ የታወቀ መመዘኛና የሚመለከተውን የኦፕቲካል መሣሪያ አቀማመጥ በመጠቀም የመለኪያ ካሊብሬሽን ያዘጋጁ። የNikon የማይክሮሜትሪ መመሪያ የስቴጅ ማይክሮሜትር የምስል ወይም የመለኪያ መስመር መረብ ክፍፍሎችን ወደ ትክክለኛ አካላዊ ርዝመቶች እንዴት እንደሚቀይር ያብራራል። የኦብጀክቲቭ ሌንሱን፣ የካሜራ ቅንብሩንና ካሊብሬሽኑን ይመዝግቡ፣ ከእነዚህ መረጃዎችም የመለኪያ አሞሌ ይጨምሩ። በመማሪያ መጽሐፍ ውስጥ ባለው አማካይ የሕዋስ መጠን መሠረት የመለኪያ አሞሌ አይገምቱ።

በጠርሙሱ ውስጥ ያለው ውህድ ከዘዴው ጋር ይስማማል?

ሜቲሊን ብሉ የሚል መለያ ያለው ጠርሙስ ብቻውን የተሟላ የላቦራቶሪ ዝርዝር መረጃ አይሰጥም። ክምችቱንና የመለኪያ አሃዶቹን፣ ሟሟውን፣ ተጨማሪ ንጥረ ነገሮቹን፣ የታሰበለትን አጠቃቀም፣ የምርት ስብስቡን ሰነዶችና መመሪያዎቹን ያረጋግጡ። የሬኤጀንቱ የደህንነት መረጃ ወረቀት አደጋዎቹን ይገልጻል፤ የዘዴው መመሪያዎች ደግሞ ለታሰበው ዝግጅት እንዴት መጠቀም እንደሚገባ ይወስናሉ።

አንድ ተጨባጭ ምሳሌ የMerck ሎፍለር ሜቲሊን ብሉ ሶሉሽን ነው። አምራቹ ለማይክሮስኮፕ ምርመራ የሚውል ሬኤጀንት መሆኑን ይገልጻል፣ እንዲሁም አሲድን በሚቋቋሙ ፍጥረታት የቀለም መቀባት ዘዴ ውስጥ እንደ ተጓዳኝ ማቅለሚያ ያለውን ሚና ያብራራል። በመረጃው ውስጥ የተጠቀሰው ተቀጣጣይነቱም፣ ስለ አያያዝ ወይም ማሞቅ ለማቀድ “ሰማያዊ ፈሳሽ” የሚለው መግለጫ ለምን በቂ እንዳልሆነ ያሳያል። እነዚያ ባህሪያት ለዚያ ቅንብር የሚመለከቱ ናቸው እንጂ በውሃ ለተዘጋጀ ለእያንዳንዱ የሜቲሊን ብሉ ሶሉሽን በቀጥታ አይተላለፉም።

በተመሳሳይ፣ ኢኦሲን ሜቲሊን ብሉ አጋር የተቀናበረ የፍጥረታት ማሳደጊያ መካከለኛ ነው። ቀላል ሜቲሊን ብሉን ወደ ናሙና በመጨመር የሚዘጋጅ የስላይድ ማቅለሚያ አይደለም። ለተለየ የምስል ምርመራ ዓላማ፣ ለማይክሮስኮፕ ምርመራ የሜቲሊን ብሉ አማራጮችን ያነጻጽሩ።

ለጀማሪ የማይክሮስኮፕ መሣሪያ ስብስብ፣ በሰነድ ከተገለጸው የትምህርት ዘዴ፣ ይዘታቸው ከሚታወቅ አስቀድመው ከተዘጋጁ ስላይዶችና ከተወሰነው ሬኤጀንት ይጀምሩ። ጠርሙስ መለያውን ካጣ ወይም ቅንብሩን ማረጋገጥ ካልተቻለ፣ በተገቢውና በሰነድ በተገለጸው ሬኤጀንት ይተኩት። የዓይን መከላከያ ይጠቀሙ፣ ለሚጠቀሙበት ትክክለኛ ቅንብር የቀረቡትን የአያያዝ መመሪያዎችም ይከተሉ። ከሰው የተወሰዱ ናሙናዎችና ይዘታቸው ያልታወቀ የአካባቢ ናሙናዎች የማስተማሪያ ላቦራቶሪውን የናሙና አያያዝና አወጋገድ ሥርዓቶች መከተል ይፈልጋሉ፤ ቀለም መቀባት የእነዚያ ሥርዓቶች ምትክ አይደለም።

ከድምዳሜው በፊት ምልከታውን ይጻፉ

“በቡድን የተሰበሰቡ ሰማያዊ ሞላላ ነገሮች” ማለት በምስሉ ላይ ተመስርቶ ሊደገፍ የሚችል መግለጫ ነው። “አንድ የተወሰነ ኢንፌክሽን” ለማለት ግን ምስሉ ያልሰጠው ማስረጃ ያስፈልጋል። የናሙናውን ምንጭ፣ ዝግጅቱን፣ የቀለም መቀባት ምላሹንና የማንነት መለያ ዘዴውን በማስታወሻ ደብተሩ ውስጥ ለየብቻ ይመዝግቡ። ይህ ልዩነት ቀላል የክፍል ውስጥ ምስል ጠቃሚ እንዲሆን ያደርጋል፣ ማራኪ የማይክሮስኮፕ ፎቶግራፍም ሊደግፈው የማይችለውን አባባል እንዳይሸከም ይከላከላል።