Dídá búlúù methylene mọ̀ ní yàrá ìdánwò: àwọn sípẹ́kítírọ̀ infurarẹẹdi àti àwọn ọ̀nà ìtúpalẹ̀ àfikún

Fojú inú wo àwọn yàrá ìdánwò mẹ́ta tí wọ́n gba èérú búlúù kan náà. Èkíní ṣe àkọsílẹ̀ sípẹ́kítírọ̀ infurarẹẹdi, ó sì kéde pé búlúù methylene ni. Èkejì ṣe kromatogirafi, ó sì ròyìn 0.4% Azure B. Ẹ̀kẹta ṣe dífẹ́rákíṣọ̀n X-ray lórí àwọn kírísítálì, ó sì dárúkọ irú háídírétì kan. Gbogbo àwọn mẹ́tẹ̀ẹ̀ta ló tọ́, kò sì sí èyíkéyìí nínú wọn tí ó dáhùn àwọn ìbéèrè méjì yòókù. Ìdàrúdàpọ̀ máa ń bẹ̀rẹ̀ nígbà tí a bá ka èsì kan bí ẹni pé ó dáhùn gbogbo àwọn mẹ́tẹ̀ẹ̀ta.

Àpilẹ̀kọ yìí ya àwọn ìbéèrè wọ̀nyẹn sọ́tọ̀. Ìdánimọ̀ pẹ̀lú infurarẹẹdi fi ìdánimọ̀ mọ́lẹ́kù múlẹ̀ nípa fífi wé àpẹẹrẹ ìtọ́kasí tó jẹ́ òṣùwọ̀n. Kromatogirafi fi àkópọ̀ múlẹ̀. Dífẹ́rákíṣọ̀n fi irú ìṣètò nínú ipò líle múlẹ̀. Ìbámu tí ó kọjá ìdánwò ìdánimọ̀ kì í ṣe ìwé-ẹ̀rí ìmọ́.

Ìdánimọ̀ pẹ̀lú infurarẹẹdi dáhùn ìbéèrè kan dáadáa

Ìdánwò ìdánimọ̀ búlúù methylene nínú ìwé òṣùwọ̀n jẹ́ ìfiwéra sípẹ́kítírọ̀ pẹ̀lú àpẹẹrẹ òṣùwọ̀n, kì í ṣe àtòjọ àwọn góńgó sípẹ́kítírọ̀ láti ṣàyẹ̀wò. Nínú àwòkọ́ṣe monogirafi USP fún búlúù methylene, Identification A tọ́ka sí sípẹ́kítírósíkópì infurarẹẹdi pẹ̀lú ẹ̀rọ ìmọ́lẹ̀ ATR tàbí wàláà potassium bromide. Sípẹ́kítírọ̀ àpẹẹrẹ gbọ́dọ̀ bá sípẹ́kítírọ̀ àpẹẹrẹ ìtọ́kasí USP mu, pẹ̀lú àpẹẹrẹ àti òṣùwọ̀n tí a pèsè tí a sì ṣe àkọsílẹ̀ wọn lábẹ́ àwọn ipò tó dọ́gba. Kì í ṣe àtòjọ kan tí a fi lélẹ̀ ti àwọn iye nọ́mbà ìgbì fún ìdánimọ̀ ló ń pinnu ìdájọ́. Ìfi àwọn sípẹ́kítírọ̀ lé ara wọn ló ń ṣe bẹ́ẹ̀.

Ìlànà yẹn bá ìhùwàsí àwọn sípẹ́kítírọ̀ FTIR búlúù methylene mu. Àwọn àmì tó lágbára jù wà ní agbègbè ìdánimọ̀ aláìlẹ́gbẹ́. Àwọn ìtumọ̀ tí àwọn ìwé ìwádìí fún àwọn àmì náà sábà máa ń fi bàńdì pàtàkì ti àwọn òrùka kónjúgétì sí nítòsí 1590 sí 1600 cm-1, níbi tí àwọn ìṣípò nínà ìdè carbon-carbon àti carbon-nitrogen arómátíkì ti ń ṣiṣẹ́ pọ̀. Àwọn bàńdì míì nítòsí 1490 àti 1390 cm-1 ní àwọn àbùdá ìyípadà ìrísí òrùka, carbon-nitrogen, àti carbon-hydrogen. Àwọn bàńdì nítòsí 1355 àti 1330 cm-1 ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ìdè carbon-nitrogen dimethylamino àti àwọn ìyípadà ìrísí methyl. Àwọn àmì nítòsí 1225 sí 1250 cm-1 jẹ́ ti ìṣètò òrùka heterocyclic, nígbà tí àwọn bàńdì nítòsí 1170 sí 1130 àti 1066 cm-1 ní àbùdá carbon-sulfur, pẹ̀lú títẹ̀ C-H arómátíkì nítòsí 880 cm-1. Àwọn ìṣípò nínà ìdè máa ń hàn ní àwọn iye tó ga jù: C-H arómátíkì nítòsí 3040 cm-1 àti N-methyl C-H láàárín bí 2900 àti 3000 cm-1. Àwọn ìtumọ̀ tí a ti tẹ̀ jáde yàtọ̀ ní àwọn kókó kéékèèké nítorí pé ìṣètò ìpìlẹ̀ phenothiazinium ń gbọ̀n gẹ́gẹ́ bí ètò tí àwọn apá rẹ̀ ń ṣiṣẹ́ pọ̀; nítorí náà, wo tábìlì ìtumọ̀ kọ̀ọ̀kan gẹ́gẹ́ bí ohun tí a ròyìn, kì í ṣe ìtumọ̀ kan ṣoṣo tó ṣeé ṣe.

Ipa méjì láti inú ìpèsè àpẹẹrẹ yẹ kí a fiyè sí nítorí wọ́n ń yí àwọn sípẹ́kítírọ̀ IR búlúù methylene padà láìyí àwọ̀ náà fúnra rẹ̀ padà. Lákọ̀ọ́kọ́, ohun èlò tí ó ní omi háídírétì máa ń fi bàńdì O-H gbòòrò hàn ní àyíká 3300 sí 3500 cm-1, pẹ̀lú títẹ̀ omi nítòsí 1630 sí 1640 cm-1, àwọn irú háídírétì ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ sì ń yí ipò àwọn bàńdì ìdánimọ̀ aláìlẹ́gbẹ́ padà dé ìwọ̀n tí a lè wọn. Èkejì, ohun èlò ìpìlẹ̀ wàláà KBr máa ń fa ọ̀rinrin: ọ̀rinrin tí ó fà sínú rẹ̀ ń mú àwọn bàńdì jáde ní àwọn agbègbè omi wọ̀nyẹn gan-an, ó sì lè dà bí omi háídírétì láti inú àpẹẹrẹ. Lílo ATR láti ṣàyẹ̀wò àpẹẹrẹ yàgò fún ohun èlò ìpìlẹ̀ KBr, ṣùgbọ́n agbára àwọn àmì ATR ń yí padà pẹ̀lú ìjìnlẹ̀ ìwọlé tí ó sinmi lórí nọ́mbà ìgbì; nítorí náà, a kò lè fi sípẹ́kítírọ̀ ATR àti sípẹ́kítírọ̀ ìmọ́lẹ̀ tí ó gba inú èérú kan náà kọjá lé ara wọn tààrà. Ìlànà tó wúlò tẹ̀lé ohun tí ìwé òṣùwọ̀n béèrè: fi àpẹẹrẹ àti àpẹẹrẹ ìtọ́kasí tí a ṣe àkọsílẹ̀ wọn pẹ̀lú ọ̀nà kan náà wé ara wọn, kí o sì kọ ọ̀nà tí a lò sílẹ̀. Fún kẹ́míkà ìpìlẹ̀ kátáyọ́nì, iyọ̀, àti àwọn háídírétì tí ó wà lẹ́yìn àwọn sípẹ́kítírọ̀ wọ̀nyí, wo ìtọ́kasí ìṣètò àti àwọn àbùdá búlúù methylene.

Tábìlì yíyan ọ̀nà ìtúpalẹ̀

Tábìlì yìí jẹ́ irinṣẹ́ yíyan ọ̀nà. Ka ìlà kọ̀ọ̀kan láti rí ìbéèrè tí ọ̀nà kan ń dáhùn, ohun tí èsì tó kọjá ìdánwò fi múlẹ̀, àti ohun tí kò tíì jẹ́rìí sí.

Ìdí tí ìbámu infurarẹẹdi kì í ṣe ìwé-ẹ̀rí ìmọ́

Ìbámu ìdánimọ̀ mú àwọ̀ tí kò tọ́ kúrò nínú ohun tí a lè fura sí. Kò ṣe àtòjọ gbogbo ohun tó wà nínú àpẹẹrẹ. Àwọn ààlà mẹ́ta ló ṣe pàtàkì jù.

Lákọ̀ọ́kọ́, àwọn nkan tí ìṣètò wọn jọra gan-an máa ń jọra nínú infurarẹẹdi. Ẹgbẹ́ methyl kan ṣoṣo ló fi Azure B yàtọ̀ sí búlúù methylene, nítorí náà sípẹ́kítírọ̀ rẹ̀ jọ ti búlúù methylene gan-an. Àdàlù tí ó ní Azure B ní ìpín díẹ̀ nínú ọgọ́rùn-ún ṣì máa ń bá àpẹẹrẹ ìtọ́kasí búlúù methylene mu dáadáa nígbà tí a bá fi wọ́n lé ara wọn. Iṣẹ́ kromatogirafi ni ṣíṣàwárí ohun àìmọ́ yẹn, èyí tí ìtọ́sọ́nà àwọn ohun àìmọ́ búlúù methylene àti àwọn ọ̀nà ìdánwò ṣàlàyé.

Èkejì, sípẹ́kítírósíkópì infurarẹẹdi jẹ́ ọ̀nà tí ń ṣàyẹ̀wò àpẹẹrẹ lápapọ̀, agbára rẹ̀ láti rí àwọn èròjà tí iye wọn kéré sì ní ààlà. Àwọn iye kékeré ti àwọn àwọ̀ tó jọra, àwọn olùyọ̀ tó ṣẹ́ kù, tàbí àwọn ìyókù aláìní ìṣò carbon máa ń fara pamọ́ lábẹ́ àwọn bàńdì pàtàkì. Àìsí àwọn góńgó àfikún kì í ṣe ẹ̀rí tó lágbára pé kò sí ohun àìmọ́.

Ẹ̀kẹta, àpẹẹrẹ ìtọ́kasí òṣùwọ̀n ló ń darí gbogbo ìfiwéra náà. Àpẹẹrẹ òṣùwọ̀n tí ó ti bàjẹ́, tí háídírétì rẹ̀ ti yí sípẹ́kítírọ̀ rẹ̀ padà, tàbí tí a kò bójú tó dáadáa ń yí ìpìlẹ̀ ìdájọ́ padà. Bákan náà ni lílo àwọn ọ̀nà tí kò bá ara wọn mu, bíi ṣíṣe ìdájọ́ sípẹ́kítírọ̀ àpẹẹrẹ ATR ní ìfiwéra pẹ̀lú àpẹẹrẹ ìtọ́kasí KBr. Kọ nọ́mbà ìpele àpẹẹrẹ òṣùwọ̀n, ọ̀nà tí a lò, àti bí a ṣe pèsè rẹ̀ sílẹ̀ lẹ́gbẹ̀ẹ́ ìdájọ́ kọ̀ọ̀kan.

Àwọn àdàlù mú ìkìlọ̀ ìkẹyìn wá. Sípẹ́kítírọ̀ tí ó bá àpẹẹrẹ ìtọ́kasí mu ní ọ̀pọ̀ jù lọ, ṣùgbọ́n tí ó ní àwọn èjìká góńgó tàbí àìṣedédé nínú agbára àwọn àmì, kì í ṣe èsì tó kọjá ìdánwò pẹ̀lú àlàyé ẹlẹ́sẹ̀. Ó jẹ́ àmì pé a gbọdọ̀ ya àwọn èròjà àpẹẹrẹ sọ́tọ̀ kí a tó dá wọn mọ̀.

Lílo àwọn ọ̀nà àfikún ní ìṣe

HPLC búlúù methylene fúnni ní ìdáhùn nípa àkópọ̀ tí infurarẹẹdi kò lè fúnni. Ọ̀nà ìwé òṣùwọ̀n tó wà lọ́wọ́lọ́wọ́ ń lo ọ̀wọ̀n irú phenyl pẹ̀lú àdàlù omi-acetonitrile tí ìpín rẹ̀ ń yí padà díẹ̀díẹ̀, tí ó sì ní trifluoroacetic acid; ó ń ṣàwárí ní 246 nm, kì í ṣe nínú bàńdì ìmọ́lẹ̀ tí ojú lè rí. Ìdánimọ̀ wá láti ìbámu àkókò ìdádúró pẹ̀lú àpẹẹrẹ ìtọ́kasí òṣùwọ̀n; ìfiwéra kan náà ló ń fúnni ní ìwọ̀n nkan. Ìdánwò àwọn ohun àìmọ́ oníṣò carbon ń dá Azure B mọ̀ pẹ̀lú ohun èlò ìtọ́kasí tirẹ̀ ní ìdádúró ìbátan nítòsí 0.8 ní ìfiwéra pẹ̀lú búlúù methylene ní 1.0, ó sì béèrè ìyàsọ́tọ̀ gíga láàárín àwọn góńgó méjèèjì. Ṣàkíyèsí yíyan gígùn ìgbì: àkójọpọ̀ àwọn àwọ̀ tí a ti yọ methyl kúrò nínú wọn ń gba ìmọ́lẹ̀ síwájú sí i sí ọ̀dọ̀ pupa, láti thionine nítòsí 600 nm, kọjá Azure C, Azure A, àti Azure B, títí dé búlúù methylene nítòsí 670 nm. Nítorí náà, ẹ̀rọ ìṣàwárí tí a fi dúró nítòsí 660 nm kì í dáhùn bákan náà sí gbogbo àkójọpọ̀ náà, ó sì máa ń fi iye díẹ̀ lára àwọn ọmọ ẹgbẹ́ tó jọra hàn ní kékeré ju bó ṣe rí lọ. Àyẹ̀wò kíkún gbogbo àkójọpọ̀ náà, nígbà tí ó bá ṣe pàtàkì, yẹ kí a ṣe pẹ̀lú ọ̀nà C18 LC-MS/MS àti àwọn àpẹẹrẹ òṣùwọ̀n tí a ti fìdí ìbójúmu wọn múlẹ̀ fún nkan kọ̀ọ̀kan tí a ń túpalẹ̀.

Dífẹ́rákíṣọ̀n èérú dáhùn ìbéèrè nípa ipò líle tí àwọn ọ̀nà méjèèjì lókè ń pa ìsọfúnni rẹ̀ rẹ́ tàbí tí wọn kò fiyè sí: yíyọ èérú sínú ojútùú fún kromatogirafi ń pa ìsọfúnni kírísítálì rẹ́, àwọn ìgbọ̀n mọ́lẹ́kù sì ń sọ nípa àwọn ìdè dípò ìṣètò àwọn mọ́lẹ́kù kọjá ìjìnnà gígùn. Àwọn àwòrán dífẹ́rákíṣọ̀n ń fi ìyàtọ̀ àwọn fásì háídírétì àti ìwọ̀n ìṣètò kírísítálì hàn, búlúù methylene sì nílò àyẹ̀wò yẹn ju ọ̀pọ̀ ohun èlò lọ. Iṣẹ́ ìwádìí ipò líle tí Rager àti àwọn alábàáṣiṣẹ́ rẹ̀ ṣe dá ìṣètò háídírétì márùn-ún ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ mọ̀, títí kan pentahydrate kan, dihydrate méjì, monohydrate kan, àti háídírétì àárín kan; wọn kò sì rí trihydrate gidi kankan láàárín àwọn irú tí wọ́n ṣàyẹ̀wò. Bí a ṣe ń bójú tó ohun èlò ní yàrá ìdánwò ṣe pàtàkì níbí: ọ̀rinrin àti ìwọ̀n otutu ń yí ìdúróṣinṣin háídírétì padà, lílọ líle sì lè yí fásì padà tàbí ba ìṣètò kírísítálì jẹ́. Nítorí náà, ṣàkóso kí o sì kọ ọ̀rinrin ìbátan àti ìwọ̀n otutu sílẹ̀, kí o sì dín lílọ kù bí ó ti ṣeé ṣe. A tún jíròrò ìṣàmì háídírétì àti ipa rẹ̀ lórí ìwọ̀n tí a wọn nínú àwọn irú háídírétì búlúù methylene àti ìṣàmì wọn.

Gbígba ìmọ́lẹ̀ UV-Vis ń ṣe iṣẹ́ àtìlẹ́yìn. Àwọn ibi gbígba ìmọ́lẹ̀ gíga jù tí a mọ̀ ń jẹ́rìí sí ìhùwàsí ojútùú tí a retí, wọ́n sì ń jẹ́ kí a lè ṣiṣẹ́ lórí ìfojúsùn. Ṣùgbọ́n ojútùú búlúù tí ń gba ìmọ́lẹ̀ ní gígùn ìgbì tí a retí bá búlúù methylene mu láìjẹ́rìí pé òun ni, nítorí àwọn àwọ̀ tó jọra ń gba ìmọ́lẹ̀ ní àwọn gígùn ìgbì tó sún mọ́ ọn.

Ohun tí o yẹ kí o béèrè kí o tó rà

Yí àwọn ìyàtọ̀ wọ̀nyí sí àwọn ìbéèrè fún ríra. Béèrè ìpele tí a dán wò, ọ̀nà tí a lò láti fi ìdánimọ̀ múlẹ̀, bóyá ìdánwò ohun àìmọ́ HPLC lo ohun èlò ìtọ́kasí Azure B, àti bóyá a ṣàyẹ̀wò irú háídírétì tàbí a kàn fojú díwọ̀n rẹ̀. Ju gbogbo rẹ̀ lọ, béèrè bóyá ìwé-ẹ̀rí náà bo gbogbo àwọn ìlànà pàtó tàbí àwọn ìdánwò tí a yàn nìkan. Ọ̀pọ̀ olùtajà tí ń sọ pé àwọn tẹ̀lé ìwé òṣùwọ̀n ń dán àwọn irin wúwo nìkan wò; èyí fi àwọn ìbéèrè nípa ìdánimọ̀, ìwọ̀n nkan, ohun àìmọ́ oníṣò carbon, olùyọ̀, àti àwọn ohun alààyè kéékèèké sílẹ̀ láìdáhùn.

Blupreme ń dán gbogbo àwọn ìlànà pàtó USP wò, tí ó bo ìdánimọ̀, ìmọ́, àwọn ohun àìmọ́ oníṣò carbon, àwọn olùyọ̀ tó ṣẹ́ kù, àwọn ohun àìmọ́ elémẹ́ńtì, ìyókù lẹ́yìn sísun, àwọn ààlà ohun alààyè kéékèèké, àti àwọn endotoxin bakitéríà, ní ìfọwọ́sowọ́pọ̀ pẹ̀lú olùṣelọpọ búlúù methylene fún ilé-iṣẹ́ oògùn. Ìwé-ẹ̀rí ìtúpalẹ̀ fún ìpele kọ̀ọ̀kan tí gbogbo ènìyàn lè rí ni a ń tẹ̀ jáde lórí àyẹ̀wò dídára Blupreme, kí a lè ka ìpìlẹ̀ ìdánwò ìwọ̀n nkan àti àwọn èsì ohun àìmọ́ tààrà dípò ṣíṣe àfojúsùn. Àwọn èsì tó sún mọ́ 100% ṣì nílò kí a sọ ìpìlẹ̀ ìṣirò wọn, gẹ́gẹ́ bí ìtọ́sọ́nà ìdánwò ìwọ̀n nkan tó ju 100 nínú ọgọ́rùn-ún lọ ṣe ṣàlàyé. Ìbámu ìdánimọ̀ bẹ̀rẹ̀ ìwádìí náà. Àkọsílẹ̀ kíkún ló parí rẹ̀.