Metilen ko‘ki bilan bo‘yash: mikroskopiya usullari va haqiqiy tasvirlar atlasi

Metilen ko‘ki bilan bo‘yash yorug‘ maydonli mikroskopiyada odatda xira ko‘rinadigan hujayra tuzilmalarini osonroq farqlashga yordam beradi. U o‘quvchilarga lunj hujayrasining yadrosini topish yoki mikroorganizmlarning konturi va joylashuvini tekshirishda yordam berishi mumkin. Biroq ko‘k obyekt — bu kuzatuv natijasi. Organizmni aniqlash, uni o‘lchash va kasallikdan dalolat berishini hal qilish — alohida vazifalar.

Muqova tasviri kontrast tamoyilini ko‘rsatadi. Quyidagi atlasda alohida hujjatlashtirilgan namunalarning haqiqiy fotosuratlari asl manba ma’lumotlari bilan berilgan.

Metilen ko‘ki nimalarni ko‘rsatadi?

Metilen ko‘ki asosli bo‘yoqdir: uning rangli ioni musbat zaryadga ega. OpenStax namunalarni bo‘yash haqidagi bo‘limida tushuntirganidek, asosli bo‘yoqlar manfiy zaryadlangan hujayra materiali bilan o‘zaro ta’sirlashadi va hujayralarni ochroq fonda ajratib ko‘rsatishi mumkin. Tegishli tarzda tayyorlangan preparatlarda metilen ko‘ki nuklein kislotalarga boy sohalar va bo‘yoqni bog‘laydigan boshqa tuzilmalarni ajratib ko‘rsatadi.

Oddiy bo‘yashda kontrastni bitta bo‘yoq hosil qiladi. Shu sababli turli organizmlar bir xil organizm bo‘lmasa ham ko‘k ko‘rinishi mumkin. Dastlabki foydali savollar tavsiflashga qaratiladi: obyektlar yumaloqmi yoki cho‘zinchoqmi, alohidami yoki to‘planganmi, bir tekis bo‘yalganmi yoki ichki qismlari farqlanadimi? Rangni tasniflash natijasi sifatida talqin qilishdan oldin oddiy bo‘yash va Gram usulida bo‘yash o‘rtasidagi farqni ko‘rib chiqing.

Kontrast va ajrata olish qobiliyati bir xil emas. Kontrast obyektni atrofidagi fondan farqlashga yordam beradi; ajrata olish qobiliyati esa bir-biriga yaqin detallarni alohida ko‘rsatadi. To‘qroq tasvir ko‘proq tuzilmalar aniq ajralib ko‘rinishini kafolatlamaydi. Har bir to‘q donachani ham organella deb atash to‘g‘ri emas.

Nativ preparatlar, bo‘yalgan nam preparatlar va surtmalar

Bo‘yalmagan, ya’ni nativ nam preparat qo‘shimcha bo‘yoqsiz ko‘rinishni saqlaydi, garchi namunani asl muhitidan olishning o‘zi ham uni o‘zgartirsa-da. Bo‘yalgan nam preparatda material qoplag‘ich oyna ostidagi suyuqlikda turgan holda unga reagent qo‘shiladi. Fiksatsiyalangan surtma tayyorlashda material buyum oynasiga yoyiladi va keyingi ishlov berishdan oldin belgilangan fiksatsiya usuli qo‘llanadi. OpenStaxning preparat tayyorlash bo‘yicha umumiy sharhi nam preparatlarni fiksatsiyadan farqlaydi va nima uchun fiksatsiyalangan organizmlarda odatdagi harakat yoki metabolizmni endi kuzatib bo‘lmasligini tushuntiradi.

Bu preparatlar turli savollarga javob beradi:

Darsdagi taqqoslash uchun avval bo‘yalmagan preparatni qayd eting, so‘ng o‘quv protokoliga muvofiq alohida tayyorlangan bo‘yalgan preparatni tekshiring. Yoritish va tasvirga olish sozlamalarini taqqoslash mumkin bo‘lgan darajada bir xil saqlang. Agar ikki xil hujayra suratga olingan bo‘lsa, ularni bitta hujayraning oldingi va keyingi holati sifatida emas, misollar sifatida tavsiflang.

Mikroskopiya atlasi: uchta haqiqiy bo‘yalgan namuna

Bu atlas ochiq litsenziyali uchta mikrofotografiyaning o‘ziga xos tanlovi va talqinidan iborat. Manba mualliflari namunalar va bo‘yoqlarni ko‘rsatgan. Biz ularning namunalarini mustaqil ravishda tasdiqlamaganmiz. Tasvirlar kesilmasdan, qo‘shimcha detallar yoki rang o‘zgarishlarisiz, yo‘qotishsiz WebP formatiga o‘girilib qayta berilgan.

1-tasvir: odam lunj hujayralari

Namuna: odam lunj hujayralari. Bo‘yoq: metilen ko‘ki. Kattalashtirish: 400×, fotograf ko‘rsatgan. Masshtab chizig‘i: mavjud emas; manbada kalibrlangan piksel o‘lchami berilmagan. Fritzmann2002 olgan fotosurat, 2017, Odam lunj hujayralari (metilen ko‘ki bilan bo‘yalgan) manbasidan, CC BY-SA 4.0 litsenziyasi ostida. Bu nusxada ham shu litsenziya saqlanadi.

Alohida turgan hujayradan boshlang: uning to‘qroq yadrosini atrofidagi ko‘k sitoplazmadan farqlash osonroq. Keyin uning ostidagi ustma-ust tushgan hujayralarni tekshiring. Ustma-ust tushish chegarani kuzatishni qiyinlashtiradi va ayrim joylarda to‘qroq soha hosil qilishi mumkin. Bu tasvirdan har bir to‘q dog‘ni yadro deb sanash uchun emas, konturlarni kuzatishni mashq qilish uchun foydalaning. Lunj hujayralarini kuzatish bo‘yicha qo‘llanma aynan shu namunaga oid mashqni batafsil yoritadi.

2-tasvir: piyoz hujayralari

Namuna: manbada piyoz hujayralari deb ko‘rsatilgan. Bo‘yoq: metilen ko‘ki. Kattalashtirish: asl fayl nomida “200x” yozilgan; bu mustaqil ravishda tekshirilmagan. Masshtab chizig‘i: mavjud emas; kalibrlash ma’lumotlari berilmagan. Alvy16 olgan fotosurat, 2019, Piyoz hujayrasi 200x manbasidan, CC BY 4.0 litsenziyasi ostida.

Cho‘zinchoq bo‘limlar tartibli qatlam hosil qiladi. Ularning uzun umumiy chegaralarini 1-tasvirdagi notekis konturlar bilan solishtiring. Yaqqol ko‘rinadigan to‘q material va ko‘rish maydonining notekis yorqinligiga ham e’tibor bering. Fotosurat har bir to‘q cho‘kindining nima ekanini aniqlab bermaydi. U foydali kuzatuv qaydida rang olgan hamma narsaga nom berish o‘rniga, artefaktlar va noaniqliklar ham ko‘rsatilishi kerakligini namoyish etadi.

3-tasvir: manbada Candida spp. deb ko‘rsatilgan achitqi

Namuna: fotograf ma’lumotiga ko‘ra, Candida spp. Bo‘yoq: metilen ko‘ki bilan oddiy musbat bo‘yash. Kattalashtirish: ma’lumot mavjud emas. Masshtab chizig‘i: mavjud emas; kalibrlangan piksel o‘lchami berilmagan. Marta, Wikimedia foydalanuvchisi Martunia.g olgan fotosurat, 2021, Metilen ko‘ki bilan musbat bo‘yash 2 manbasidan, CC BY 4.0 litsenziyasi ostida.

Zich ko‘k to‘plamlarni obyektlar siyrakroq joylashgan chekka qismlar bilan solishtiring. Obyektlar kamroq ustma-ust tushgan joylarda alohida konturlarni kuzatish osonroq. Candida nomi ushbu fotosurat asosida tur aniqlanganidan emas, manbadagi qayddan olingan. Bu tasvir hayotchanlik natijasini ham bermaydi. Achitqining hayotchanligi va nafas olishini baholash tahlillari o‘ziga xos sharoitlar, nazorat namunalari va talqinni talab qiladi.

Masshtabni to‘g‘ri talqin qilish

Bu tasvirlar vizual taqqoslash uchun xizmat qiladi, mikrometrlarda o‘lchash yoki turli tasvirlardagi hujayralarning mutlaq o‘lchamlarini solishtirish uchun emas. Ko‘rsatilgan kattalashtirish kameraning yetishmayotgan kalibrlash ma’lumotlarini tiklamaydi. Tasvirning ekrandagi o‘lchamini o‘zgartirish uning ko‘rinadigan kattalashishini o‘zgartiradi.

O‘z tasvirlaringiz uchun ma’lum etalon va tegishli optik konfiguratsiya yordamida o‘lchov kalibrlashini bajaring. Nikonning mikrometriya bo‘yicha qo‘llanmasi obyekt-mikrometr tasvir yoki okulyar to‘ridagi shartli bo‘linmalarni qanday qilib fizik uzunliklarga aylantirishini tushuntiradi. Obyektiv, kamera konfiguratsiyasi va kalibrlash ma’lumotlarini qayd eting hamda shu ma’lumotlar asosida masshtab chizig‘ini qo‘shing. Uni darslikdagi o‘rtacha hujayra o‘lchamidan kelib chiqib belgilamang.

Idishdagi reagent usulga mosmi?

Metilen ko‘ki deb yorliqlangan idish laboratoriya uchun to‘liq texnik tavsif emas. Uning konsentratsiyasi va birliklari, erituvchisi, qo‘shimcha tarkibiy qismlari, mo‘ljallangan qo‘llanishi, partiya hujjatlari va ko‘rsatmalarini tekshiring. Reagentning xavfsizlik ma’lumotlari varag‘i xavflarni tavsiflaydi; usul bo‘yicha ko‘rsatmalar esa uni ko‘zda tutilgan preparatni tayyorlashda qanday ishlatishni belgilaydi.

Aniq misollardan biri — Merckning Löffler metilen ko‘ki eritmasi. Ishlab chiqaruvchi uni mikroskopiya reagenti sifatida ko‘rsatadi va kislotaga chidamli bo‘yash usulida kontrast bo‘yoq sifatidagi vazifasini tavsiflaydi. Uning ko‘rsatilgan yonuvchanligi ham ishlatish yoki qizdirishni rejalashtirish uchun “ko‘k suyuqlik” degan ma’lumot yetarli emasligini ko‘rsatadi. Bu xususiyatlar aynan shu formulaga tegishli, ular metilen ko‘kining har qanday suvli eritmasiga avtomatik ravishda tatbiq etilmaydi.

Xuddi shuningdek, eozin-metilen ko‘ki agari maxsus tarkibli o‘stirish muhitidir. U namunaga oddiy metilen ko‘ki qo‘shib tayyorlanadigan buyum oynasi bo‘yog‘i emas. Tasvirlash maqsadi boshqacha bo‘lsa, mikroskopiya uchun metilen ko‘kiga muqobil bo‘yoqlarni solishtiring.

Boshlovchilar uchun mikroskop to‘plamidan foydalanishda uning hujjatlashtirilgan o‘quv usuli, tarkibi ma’lum tayyor preparatlar va ko‘rsatilgan reagentdan boshlang. Agar idishning yorlig‘i yo‘qolgan bo‘lsa yoki tarkibini aniqlab bo‘lmasa, uni tegishli hujjatlari mavjud reagent bilan almashtiring. Ko‘zni himoyalash vositalaridan foydalaning va aynan shu formula uchun berilgan ishlatish ko‘rsatmalariga rioya qiling. Odamdan olingan material va noma’lum atrof-muhit namunalari o‘quv laboratoriyasining namunalar bilan ishlash va ularni utilizatsiya qilish tartiblarini talab qiladi; bo‘yash bu tartiblarning o‘rnini bosmaydi.

Xulosadan oldin kuzatuvni yozing

“To‘plamlarda joylashgan ko‘k oval obyektlar” — tasvirning asosli tavsifi. “Muayyan infeksiya” deyish uchun esa tasvir bermagan dalillar kerak. Daftarda namunaning kelib chiqishi, tayyorlash jarayoni, bo‘yash reaksiyasi va aniqlash usulini alohida qayd eting. Bu farqlash oddiy dars tasvirini foydali qiladi va jozibali mikrofotografiyaga u asoslay olmaydigan da’voni yuklashning oldini oladi.