Azure B: สิ่งเจือปนของ methylene blue เมแทบอไลต์ และสารประกอบเพื่อการวิจัย

Azure B เป็นสารที่มีโครงสร้างทางเคมีแตกต่างจาก methylene blue แม้จะมีความสัมพันธ์กันอย่างใกล้ชิด สารนี้อาจมีอยู่แล้วในตัวอย่าง methylene blue ปรากฏขึ้นหลังจากร่างกายประมวลผล methylene blue หรือถูกจัดเตรียมแยกต่างหากสำหรับการทดลอง คำอธิบายเหล่านี้ไม่ขัดแย้งกัน แต่ระบุว่าสารประกอบมาจากไหนและนักวิจัยกำลังตั้งคำถามอะไรเกี่ยวกับสารนั้น

ความแตกต่างนี้สำคัญเมื่อตีความใบรับรองผลการวิเคราะห์หรือข้อกล่าวอ้างเกี่ยวกับฤทธิ์ทางชีวภาพ การเรียก Azure B ว่าเป็นเมแทบอไลต์ที่ออกฤทธิ์ไม่ได้หมายความว่าปริมาณที่ควบคุมไม่ได้ในขวดเป็นสิ่งที่พึงประสงค์ และการเรียกสารนี้ว่าสิ่งเจือปนก็ไม่ได้หมายความว่าสารนี้ไม่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ

มีอะไรเปลี่ยนแปลงในเชิงเคมี?

Azure B เป็นอนุพันธ์ monodemethylated ของ methylene blue โดยหมู่ methyl หนึ่งหมู่ที่เชื่อมกับไนโตรเจนถูกแทนที่ด้วยไฮโดรเจน ความสัมพันธ์นี้อธิบายไว้ในการอภิปรายด้านเคมีและ Figure 1 ในบทความทบทวนของ Schirmer และคณะ นี่เป็นการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างที่เฉพาะเจาะจง ไม่ใช่เพียงชื่ออื่นของ methylene blue

กระบวนการนี้ยังแตกต่างจากการรีดิวซ์เป็น leucomethylene blue การรีดิวซ์เปลี่ยนสถานะออกซิเดชัน ส่วน N-demethylation เปลี่ยนหมู่แทนที่บนไนโตรเจน การมองทั้งสองกระบวนการว่าเป็นเพียง “methylene blue เปลี่ยนเป็นไม่มีสี” จะทำให้สูญเสียความแตกต่างที่จำเป็นต่อการตีความกระบวนการเมแทบอลิซึม ชื่อของสีย้อมที่เกี่ยวข้องกันก็ต้องใช้ความระมัดระวังเช่นเดียวกัน: Azure A, Azure B และ methylene blue ไม่ใช่ชื่อที่ใช้แทนกันได้ คู่มือเกี่ยวกับสารประกอบที่มีชื่อคล้ายกัน อธิบายปัญหาเรื่องการตั้งชื่อนี้

สามแหล่งที่มา สามคำถามที่แตกต่างกัน

แผนภาพหน้าปกแยกเส้นทางการตรวจสอบออกเป็นสามแบบ ตารางด้านล่างระบุหลักฐานที่จำเป็นสำหรับแต่ละเส้นทางอย่างชัดเจน

แถวกลางมักถูกมองข้าม หาก Azure B มีอยู่ในสารที่ให้ตั้งแต่แรก ตัวอย่างทางชีวภาพที่เก็บภายหลังอาจมีทั้งสารที่มีอยู่ก่อนแล้วและสารที่เกิดขึ้นใหม่ การยืนยันว่ามีการก่อตัวขึ้นจึงต้องอาศัยมากกว่าการตรวจพบพีกหลังได้รับสาร

Azure B ในวัตถุดิบตั้งต้น

การศึกษาเชิงวิเคราะห์ในอดีตเป็นตัวอย่างที่มีประโยชน์ว่าทำไมองค์ประกอบที่มีปริมาณน้อยจึงอาจมีความสำคัญ นักวิจัยที่ศึกษาการเติมไอโอดีนให้ methylene blue ด้วย HPLC–mass spectrometry พบว่าผลิตภัณฑ์ที่ถูกเติมไอโอดีนหลักเกิดจากสิ่งเจือปน Azure B ตัวอย่าง methylene blue ที่ศึกษาอ含 Azure B ประมาณ 7–8% ภายใต้สภาวะปฏิกิริยาของการศึกษานั้น Azure B ที่ถูกเติมไอโอดีนมีปริมาณมากกว่า methylene blue ที่ถูกเติมไอโอดีนอย่างมาก

เปอร์เซ็นต์เหล่านั้นอธิบายวัสดุที่ใช้ในการศึกษาเมื่อปี 1999 ไม่ได้กำหนดขีดจำกัดสิ่งเจือปนที่ยอมรับได้ในปัจจุบันหรือองค์ประกอบของผลิตภัณฑ์จากผู้จำหน่ายรายอื่น การทดลองแสดงประเด็นที่แคบกว่านั้น: สารประกอบหลักในวัตถุดิบตั้งต้นไม่จำเป็นต้องก่อให้เกิดผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาหลัก

สำหรับใบรับรองผลการวิเคราะห์ ให้ตรวจดูผลของ Azure B โดยเฉพาะ หน่วย วิธีทดสอบ ขีดจำกัดการรายงาน และข้อมูลระบุล็อต การทดสอบปริมาณสีย้อมรวมกับการทดสอบสารที่เกี่ยวข้องตอบคำถามคนละประเภท ผลที่ระบุว่า “ตรวจไม่พบ” ก็ต้องมีขีดจำกัดการตรวจพบหรือขีดจำกัดการรายงานจึงจะตีความได้ ดูวิธีอ่านใบรับรองผลการวิเคราะห์ของ methylene blue สำหรับการตรวจสอบเอกสารในภาพรวม

Azure B ที่เกิดขึ้นระหว่างกระบวนการเมแทบอลิซึม

การศึกษากระบวนการเมแทบอลิซึมต้องอาศัยวิธีวิเคราะห์ที่สามารถแยกสารตั้งต้นออกจากเมแทบอไลต์ได้ Kim และคณะพัฒนาวิธี LC–MS/MS สำหรับวัดสารทั้งสองชนิดในพลาสมาของหนู ช่วงสอบเทียบของพวกเขาอยู่ที่ 1–1,000 ng/mL สำหรับสารแต่ละชนิด โดยมีขีดจำกัดการหาปริมาณต่ำสุดที่ 1 ng/mL เมื่อใช้พลาสมาหนู 20 microlitres จากนั้นจึงนำวิธีดังกล่าวไปใช้ในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์ในหนู

รายละเอียดนี้สำคัญเพราะวิธีการวัดแต่ละวิธีมีบริบทของตัวอย่าง การตรวจสอบความใช้ได้ในพลาสมาหนูไม่ได้ยืนยันโดยอัตโนมัติว่าวิธีนั้นแม่นยำในพลาสมามนุษย์ ปัสสาวะ หรือสารละลายเชิงพาณิชย์ที่มีความเข้มข้นสูง วิธีดังกล่าวแสดงให้เห็นว่านักวิจัยสามารถติดตามสารสองชนิดแยกจากกันได้อย่างไร แต่ไม่ได้ให้กฎการใช้ยาในมนุษย์

ข้อมูลการได้รับสารในมนุษย์ยังแสดงให้เห็นว่าการใช้เปอร์เซ็นต์เมแทบอไลต์ค่าคงที่เพียงค่าเดียวไม่เพียงพอ ส่วนเภสัชวิทยาคลินิกในฉลากยาฉีด methylene blue รายงานว่าการได้รับ Azure B เพิ่มขึ้นในผู้เข้าร่วมที่มีการทำงานของไตบกพร่อง การได้รับสารเมื่อเวลาผ่านไปสะท้อนทั้งการก่อตัว การกระจาย และการกำจัด ไม่ใช่เพียงองค์ประกอบภายในขวด เส้นทางการให้สาร เวลาที่เก็บตัวอย่าง และช่องร่างกายที่วัดล้วนมีความสำคัญเมื่อเปรียบเทียบผลลัพธ์เหล่านี้

การทดลองโดยตรงแสดงอะไร

Azure B มีฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาที่วัดได้ คำถามที่มีประโยชน์กว่าคือออกฤทธิ์ต่อเป้าหมายใดและภายใต้สภาวะใด

ในการศึกษาเมื่อปี 2012 ที่ใช้ recombinant human monoamine oxidase Azure B ยับยั้ง MAO-A ด้วย IC50 เท่ากับ 11 nM เทียบกับ 70 nM สำหรับ methylene blue ภายใต้สภาวะเดียวกัน IC50 คือความเข้มข้นที่สัมพันธ์กับการยับยั้ง 50% ในการทดสอบนั้น Azure B ยังยับยั้ง MAO-B แต่ต้องใช้ความเข้มข้นสูงกว่ามาก: 968 nM นักวิจัยรายงานว่าการยับยั้งสามารถย้อนกลับได้

ผลลัพธ์เหล่านี้สนับสนุนความเป็นไปได้ที่ Azure B อาจมีส่วนต่อผลทางชีวภาพและปฏิสัมพันธ์ต่าง ๆ รวมถึงคำถามเกี่ยวกับmethylene blue และสารสื่อประสาท แต่ไม่ได้หมายความว่า Azure B เป็นยาที่ดีกว่าหกเท่า อัตราส่วนดังกล่าวอธิบายการยับยั้งเอนไซม์เพียงชนิดเดียวในการเปรียบเทียบการทดลองเพียงหนึ่งแบบ

การทดลอง cholinesterase ในมนุษย์อีกการศึกษาหนึ่ง แสดงข้อจำกัดของการสรุปแบบกว้างดังกล่าว ค่า IC50 ของ Azure B เท่ากับ 0.486 micromolar สำหรับ acetylcholinesterase และ 1.99 micromolar สำหรับ butyrylcholinesterase ส่วน methylene blue มีความแรงมากกว่าในการทดสอบเดียวกัน โดยมีค่าตามลำดับเท่ากับ 0.214 และ 0.389 micromolar ลำดับความแรงจึงกลับกันเมื่อเปลี่ยนเป้าหมายทางชีวภาพ ผลลัพธ์ทั้งสองแบบไม่ได้ยืนยันโดยลำพังว่าสามารถช่วยเพิ่มการรู้คิดหรือรักษาโรคอัลไซเมอร์ได้

จากฤทธิ์ในการทดลองสู่การตีความทางคลินิก

การทดลองในสัตว์ทั้งตัวเพิ่มหลักฐานอีกระดับหนึ่ง แต่ยังไม่ได้ข้อสรุปเรื่องประสิทธิผลทางคลินิก ในการศึกษาในหนูของ Delport และคณะ Azure B ลดภาวะไม่เคลื่อนไหวในการทดสอบ forced-swim แบบเฉียบพลัน โดยมี methylene blue และ imipramine เป็นส่วนหนึ่งของสารเปรียบเทียบ บทความเรียกผลนี้ว่าเป็นฤทธิ์คล้ายยาต้านซึมเศร้า อย่างไรก็ตาม นี่เป็นการทดลองพฤติกรรมในหนู ไม่ใช่การทดลองที่วัดการฟื้นตัวจากภาวะซึมเศร้าในผู้ป่วย

สำหรับข้อกล่าวอ้างใด ๆ เกี่ยวกับ Azure B ขั้นแรกให้ระบุว่าวัสดุใดถูกนำมาทดสอบ จากนั้นระบุสิ่งมีชีวิตหรือวิธีทดสอบ การได้รับสาร และจุดยุติ สุดท้ายให้ตรวจสอบว่าข้อสรุปเกี่ยวข้องกับองค์ประกอบ กระบวนการเมแทบอลิซึม กิจกรรมของเอนไซม์ พฤติกรรมสัตว์ หรือประโยชน์ทางคลินิก ขั้นตอนเหล่านี้ช่วยป้องกันไม่ให้ผลด้านคุณภาพของล็อตถูกตีความผิดเป็นข้อกล่าวอ้างด้านการรักษา และไม่ให้กลไกที่พบในการทดลองถูกตีความผิดเป็นผลลัพธ์ในผู้ป่วยที่ได้รับการยืนยันแล้ว