Veroorzaakt methyleenblauw kanker? Toxicologisch bewijs

Methyleenblauw heeft in langdurige dierproeven tumorsignalen opgeleverd en positieve resultaten gegeven in verschillende laboratoriumtests naar genetische schade. Die bevindingen verdienen aandacht. Ze stellen niet vast hoe waarschijnlijk het is dat iemand na een bepaalde blootstelling kanker ontwikkelt.

De IARC-evaluatie die in 2016 werd gepubliceerd plaatste methyleenblauw in Groep 3, wat betekent dat de carcinogeniciteit voor mensen niet kon worden geclassificeerd. De werkgroep beschikte niet over gegevens over kanker bij mensen en beoordeelde het bewijs uit dieronderzoek als beperkt. Groep 3 betekent niet dat bewezen is dat de stof onschadelijk is. Evenmin maakt een bevinding bij dieren elke blootstelling bij mensen tot een aangetoonde oorzaak van kanker.

Drie vragen die afzonderlijk moeten worden beantwoord

Carcinogeniciteit betreft de ontwikkeling van tumoren. Een langdurig dieronderzoek kan tumorpatronen aantonen na een bepaalde blootstelling. Genotoxiciteit betreft schade aan genetisch materiaal of daarmee samenhangende cellulaire gebeurtenissen. Een positieve mutatietest geeft een waarschuwingssignaal, maar telt niet rechtstreeks het aantal kankergevallen bij mensen. Risico voor mensen betreft de waarschijnlijkheid van schade onder daadwerkelijke blootstellingsomstandigheden.

Deze vragen vereisen verschillende metingen. Het tellen van bacteriële mutanten, het onderzoeken van bloedcellen van muizen en het diagnosticeren van tumoren bij necropsie zijn geen onderling uitwisselbare eindpunten. Evenmin stelt een behandelingsexperiment waarin een stof kankercellen beschadigt vast of herhaalde blootstelling tumoren in gezond weefsel kan initiëren. De afzonderlijke bespreking van methyleenblauw in kankeronderzoek behandelt claims over behandeling.

Vergelijking van onderzoeken: de daadwerkelijke chronische blootstellingen

In het centrale experiment werd methyleenblauw-trihydraat gebruikt, toegediend in 0.5% waterige methylcellulose via orale gavage, een afgemeten toediening via een sonde in de maag. Elke dosisgroep in het chronische onderzoek bestond uit 50 mannetjes en 50 vrouwtjes van elke soort. Volgens het onderzoeksrapport van Auerbach en collega's vond de toediening gedurende twee jaar vijf dagen per week plaats.

De tabel behoudt de soortspecifieke conclusies van het NTP. De hoeveelheden zijn milligram van het geteste materiaal per kilogram lichaamsgewicht van het dier op doseringsdagen, geen aanbevelingen voor mensen. Dieren met een dosis van nul kregen het vehiculum.

Model	Dosisgroepen, mg/kg	Toedieningsweg en duur	NTP-conclusie en relevante bevinding
Mannelijke F344/N-ratten	0, 5, 25, 50	Orale gavage; vijf dagen/week; twee jaar	Enig bewijs: adenomen van de eilandjescellen van de pancreas en adenoom/carcinoom gecombineerd namen toe.
Vrouwelijke F344/N-ratten	0, 5, 25, 50	Hetzelfde schema	Geen bewijs voor carcinogene activiteit onder deze omstandigheden.
Mannelijke B6C3F1-muizen	0, 2.5, 12.5, 25	Orale gavage; vijf dagen/week; twee jaar	Enig bewijs: carcinoom van de dunne darm en adenoom/carcinoom gecombineerd namen toe. Maligne lymfoom kan eveneens verband hebben gehouden.
Vrouwelijke B6C3F1-muizen	0, 2.5, 12.5, 25	Hetzelfde schema	Onduidelijk bewijs: marginale toenames van maligne lymfoom.

“Enig bewijs” is een NTP-categorie voor een positieve experimentele bevinding met minder bewijskracht dan “duidelijk bewijs”. “Onduidelijk” beschrijft een onzekere bevinding. Deze categorieën geven de sterkte van het bewijs weer, niet een risicopercentage of een rangschikking van de carcinogene potentie van een stof.

Het resultaat bij mannelijke ratten vormde geen gestaag oplopende reeks. Adenoom of carcinoom van de eilandjescellen van de pancreas kwam voor bij 4/50 controledieren en bij 9/50, 14/50 en 8/50 dieren bij oplopende doses. Het gepubliceerde artikel rapporteert alleen voor de middelste dosis statistische significantie. Daardoor is een eenvoudig lineair verhaal onnauwkeurig; het toont niet aan dat de hoogste dosis beschermend was. Een adenoom is een goedaardige tumor, terwijl een carcinoom kwaadaardig is. Een gecombineerd eindpunt mag niet worden beschreven alsof elke meegetelde tumor kanker was.

Waarom verschillende samenvattingen tegenstrijdig klinken

De huidige voorschrijfinformatie van PROVAYBLUE vermeldt de bevindingen in de pancreas van mannelijke ratten, maar beschrijft geen geneesmiddelgerelateerde neoplastische bevindingen bij muizen. Het onderzoeksartikel stelt dat de toename van neoplasieën bij muizen niet statistisch significant was, maar vermeldt wel positieve trends. Het NTP kende desondanks de hierboven weergegeven categorieën voor muizen toe.

De IARC-analyse van dieronderzoek verduidelijkt een belangrijk statistisch onderscheid: de bevindingen in de darm van mannelijke muizen vertoonden significante dosistrends, maar de afzonderlijke gedoseerde groepen waren niet significant bij paarsgewijze vergelijkingen met controledieren. Het testen van een algemeen patroon over verschillende doses heen verschilt van het afzonderlijk testen van elke groep. Lezers moeten de bron en de formulering ervan behouden in plaats van al deze bevindingen samen te persen tot “muizen kregen kanker” of “het muizenonderzoek was negatief”. Geen van deze bevindingen levert een gemeten kankerpercentage bij mensen op.

Vergelijking van onderzoeken: eindpunten voor genetische schade

Het gedeelte over genetische toxicologie van NTP Technical Report 540 beschrijft een andere reeks experimenten. S9 is een laboratoriummengsel met leverenzymen dat wordt gebruikt om metabole activering te modelleren. De aanwezigheid ervan maakt van een celtest geen onderzoek naar blootstelling van het hele organisme.

Testsysteem	Daadwerkelijke blootstellingsomstandigheden	Gemeten eindpunt en resultaat
Bacteriële mutatietests, tweede geteste partij	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; met en zonder S9 uit rattenlever	Toegenomen mutaties in de geteste stammen.
Gekweekte ovariumcellen van Chinese hamsters	Test op sister-chromatid exchange omvatte 0.17–2.5 µg/mL zonder S9, tot 5 µg/mL met S9; de test op chromosoomafwijkingen gebruikte 4.7–22 µg/mL	Positieve resultaten voor uitwisseling en chromosoomafwijkingen.
Mannelijke muizen, acuut experiment	Eenmalige intraperitoneale injectie: 25, 50 of 150 mg/kg; monsters na 48 uur	Geen toename van erytrocyten met micronuclei in beenmerg of bloed.
Mannelijke en vrouwelijke muizen, herhaald experiment	Orale gavage: 25, 50, 100 of 200 mg/kg; vijf dagen/week gedurende drie maanden	Geen toename van erytrocyten met micronuclei in perifeer bloed.

Een micronucleus is een klein extra kernlichaampje dat kan wijzen op chromosoombreuk of chromosoomverlies tijdens de celdeling. Een negatieve test met bloedcellen beantwoordt die specifieke vraag in de bemonsterde cellen. Daarmee kan niet elke vorm van DNA-schade in elk orgaan worden uitgesloten. Omgekeerd vertelt een positieve test met gekweekte cellen ons niet welke concentratie de weefsels van een persoon hebben bereikt.

De voorschrijfinformatie vermeldt eveneens dit algemene patroon: positieve tests met bacteriën en gekweekte cellen, negatieve micronucleustests bij muizen. Methyleenblauw simpelweg “genotoxisch” of “niet-genotoxisch” noemen, laat informatie weg die van belang is voor de interpretatie.

Wat dit betekent voor blootstelling bij mensen

De onderzoeken leveren geen gevalideerde dagelijkse drempel op waaronder het kankerrisico voor mensen veilig kan worden geacht. Een dosis bij ratten delen door een lichaamsgewichtsfactor zou verschillen in absorptie, metabolisme, toedieningsweg, blootstellingsfrequentie of levenslange duur niet oplossen. Het zou een omgerekende hoeveelheid opleveren, geen bewijs van veiligheid.

Een gavage-experiment van twee jaar en een korte, medisch begeleide intraveneuze behandeling beantwoorden verschillende vragen. Dat onderscheid verhindert directe numerieke extrapolatie; het wist de bevindingen bij dieren niet uit. Een bruikbare beoordeling begint met de exacte verbinding en formulering, hoeveelheid, toedieningsweg, frequentie, duur en reden voor gebruik. “Een paar druppels” laat zowel de concentratie als het gemeten volume weg.

Als methyleenblauw om een medische reden is toegediend, kunnen de tumorbevindingen op zichzelf niet bepalen of de voordelen van die behandeling opwogen tegen de risico's. Als herhaald electief gebruik wordt overwogen, mag een niet-gemeten langetermijnrisico op kanker niet als nul worden beschreven. Directere aandachtspunten, waaronder geneesmiddelinteracties en gevoeligheid voor hemolyse, worden behandeld in bijwerkingen en contra-indicaties.

Gebruik voor verdere informatie de onderzoekslibrary om onderzoeken bij mensen te onderscheiden van dier- en celexperimenten. De essentiële vraag bij elk artikel is welke blootstelling werd getest en welke uitkomst daadwerkelijk werd gemeten.