मेथिलिन ब्लू रङ्गन: सूक्ष्मदर्शन विधिहरू र वास्तविक तस्बिरहरूको एटलस

मेथिलिन ब्लू रङ्गनले उज्ज्वल-क्षेत्र सूक्ष्मदर्शनमा अन्यथा फिक्का देखिने कोषीय विशेषताहरू छुट्याउन सजिलो बनाउँछ। यसले विद्यार्थीहरूलाई गालाको कोषको केन्द्रक भेट्टाउन वा सूक्ष्मजीवहरूको रूपरेखा र विन्यास हेर्न मद्दत गर्न सक्छ। तर नीलो वस्तु देखिनु एउटा अवलोकन हो। जीवको नाम निर्धारण गर्नु, त्यसलाई नाप्नु र त्यसले रोगको सङ्केत गर्छ कि गर्दैन भनेर निर्णय गर्नु छुट्टाछुट्टै काम हुन्।

आवरण तस्बिरले दृश्य भिन्नताको सिद्धान्त देखाउँछ। तलको एटलसमा स्वतन्त्र रूपमा अभिलेख गरिएका नमुनाका वास्तविक तस्बिरहरू छन्, तिनका मूल स्रोत विवरणसहित।

मेथिलिन ब्लूले के देखाउँछ?

मेथिलिन ब्लू एक क्षारीय रङ्गक हो: यसको रङ्गीन आयनमा धनात्मक आवेश हुन्छ। नमुनाको रङ्गनबारे OpenStax को व्याख्या अनुसार, क्षारीय रङ्गकहरूले ऋणात्मक आवेश भएका कोषीय पदार्थसँग अन्तरक्रिया गर्छन् र हल्का पृष्ठभूमिमा कोषहरू स्पष्ट देखाउन सक्छन्। उपयुक्त रूपमा तयार गरिएका नमुनामा मेथिलिन ब्लूले न्यूक्लिक अम्ल बढी भएका क्षेत्र र रङ्गक बाँध्ने अन्य संरचनाहरूलाई स्पष्ट बनाउँछ।

सरल रङ्गनमा एउटा रङ्गकले दृश्य भिन्नता प्रदान गर्छ। त्यसैले विभिन्न जीवहरू एउटै जीव नभए पनि नीलो देखिन सक्छन्। सुरुमा उपयोगी प्रश्नहरू वर्णनात्मक हुन्छन्: वस्तुहरू गोलाकार छन् कि लम्बिएका, छुट्टाछुट्टै छन् कि समूहमा, समान रूपमा रङ्गिएका छन् कि भित्री भागहरू फरक देखिन्छन्? रङलाई वर्गीकरणको नतिजा मान्नुअघि सरल रङ्गन र ग्राम रङ्गनबीचको भिन्नता हेर्नुहोस्।

दृश्य भिन्नता र विभेदन फरक कुरा हुन्। दृश्य भिन्नताले वस्तुलाई वरिपरिबाट छुट्याउन मद्दत गर्छ; विभेदनले नजिकैका सूक्ष्म विवरणहरू छुट्याउँछ। गाढा तस्बिरले बढी संरचना स्पष्ट छुट्टिने ग्यारेन्टी गर्दैन। हरेक गाढा कणलाई कोषाङ्गको नाम दिनु पनि उचित हुँदैन।

मूल अवस्थाका नमुना, रङ्गिएका भिजेका माउन्ट र स्मियर

रङ्ग नलगाइएको, अर्थात् मूल अवस्थाको, भिजेको नमुनाले थप रङ्गकबिनाको दृश्य कायम राख्छ, यद्यपि मूल वातावरणबाट निकाल्दा पनि नमुना परिवर्तन हुन्छ। रङ्गिएको भिजेको माउन्टमा पदार्थ कभरस्लिपमुनि तरलमै रहँदा अभिकर्मक थपिन्छ। स्थिरीकृत स्मियरमा पदार्थ स्लाइडमा फैलाइन्छ र त्यसपछिका प्रशोधनअघि निर्दिष्ट स्थिरीकरण विधि प्रयोग गरिन्छ। OpenStax को नमुना तयारीसम्बन्धी परिचय ले भिजेका माउन्ट र स्थिरीकरणबीचको भिन्नता बताउँछ र स्थिरीकृत जीवहरूले किन सामान्य गति वा चयापचयको दृश्य दिँदैनन् भन्ने स्पष्ट पार्छ।

यी तयारीहरूले फरक प्रश्नहरूको उत्तर दिन्छन्:

कक्षाकोठामा तुलना गर्न, शिक्षण कार्यविधिअनुसार छुट्टै तयार गरिएको रङ्गिएको नमुना जाँच्नुअघि रङ्ग नलगाइएको नमुनाको अभिलेख राख्नुहोस्। प्रकाश र तस्बिर खिच्ने सेटिङहरू तुलनायोग्य राख्नुहोस्। दुई फरक कोषका तस्बिर खिचिएका छन् भने तिनलाई एउटै कोषको पहिले र पछिको अभिलेख नभई उदाहरणका रूपमा वर्णन गर्नुहोस्।

सूक्ष्मदर्शन एटलस: तीन वास्तविक रङ्गिएका नमुना

यो एटलस खुला इजाजतपत्र भएका तीन सूक्ष्मतस्बिरहरूको मौलिक चयन र व्याख्या हो। स्रोत लेखकहरूले नमुना र रङ्गक पहिचान गरेका छन्। हामीले तिनका नमुनाको प्रामाणिकता स्वतन्त्र रूपमा पुष्टि गरेका छैनौँ। तस्बिरहरू कुनै भाग नकाटी, गुणस्तर नघट्ने WebP रूपान्तरणका रूपमा पुनःप्रस्तुत गरिएका छन्; कुनै विशेषता थपिएको वा रङ परिवर्तन गरिएको छैन।

तस्बिर 1: मानव गालाका कोषहरू

नमुना: मानव गालाका कोषहरू। रङ्गक: मेथिलिन ब्लू। आवर्धन: 400×, फोटोग्राफरले जनाएअनुसार। मापन पट्टी: उपलब्ध छैन; स्रोतले क्यालिब्रेट गरिएको पिक्सेल आकार दिएको छैन। Fritzmann2002 द्वारा खिचिएको तस्बिर, 2017, मानव गालाका कोषहरू (मेथिलिन ब्लू रङ्गन) बाट, CC BY-SA 4.0 इजाजतपत्रअन्तर्गत। यो पुनःप्रस्तुतिमा सोही इजाजतपत्र कायम छ।

एउटा छुट्टै कोषबाट सुरु गर्नुहोस्: त्यसको गाढा केन्द्रक वरिपरिको नीलो कोषद्रव्यबाट छुट्याउन सजिलो हुन्छ। त्यसपछि त्यसको तल एकअर्कामाथि खप्टिएका कोषहरू हेर्नुहोस्। खप्टिँदा सीमा पछ्याउन गाह्रो हुन्छ र कुनै स्थानमा गाढा क्षेत्र बन्न सक्छ। हरेक गाढा भागलाई केन्द्रक गन्नका लागि होइन, रूपरेखा पछ्याउने अभ्यासका लागि यो तस्बिर प्रयोग गर्नुहोस्। गालाको कोष अवलोकन मार्गदर्शिका ले यस नमुनासँग सम्बन्धित अभ्यासलाई विस्तारमा प्रस्तुत गर्छ।

तस्बिर 2: प्याजका कोषहरू

नमुना: स्रोतले पहिचान गरेअनुसार, प्याजका कोषहरू। रङ्गक: मेथिलिन ब्लू। आवर्धन: मूल फाइलनाममा “200x” देखिन्छ; यसलाई स्वतन्त्र रूपमा पुष्टि गरिएको छैन। मापन पट्टी: उपलब्ध छैन; क्यालिब्रेसन दिइएको छैन। Alvy16 द्वारा खिचिएको तस्बिर, 2019, प्याजको कोष 200x बाट, CC BY 4.0 इजाजतपत्रअन्तर्गत।

लम्बिएका खण्डहरूले व्यवस्थित तह बनाएका छन्। तिनका लामा साझा सीमाहरूलाई तस्बिर 1 का अनियमित रूपरेखासँग तुलना गर्नुहोस्। साथै स्पष्ट देखिने गाढा पदार्थ र दृश्य क्षेत्रको असमान चमकमा ध्यान दिनुहोस्। तस्बिरले हरेक गाढा निक्षेपको पहिचान स्थापित गर्दैन। यसले रङ समात्ने सबै कुरालाई नाम दिनुको सट्टा उपयोगी अवलोकन अभिलेखमा नमुना तयारी वा चित्रणबाट उत्पन्न विकृति र अनिश्चितता पनि किन समेट्नुपर्छ भन्ने देखाउँछ।

तस्बिर 3: स्रोतले Candida spp. भनेर पहिचान गरेको खमीर

नमुना: फोटोग्राफरका अनुसार, Candida spp.। रङ्गक: मेथिलिन ब्लू प्रयोग गरिएको सरल धनात्मक रङ्गन। आवर्धन: उपलब्ध छैन। मापन पट्टी: उपलब्ध छैन; क्यालिब्रेट गरिएको पिक्सेल आकार दिइएको छैन। Marta, Wikimedia प्रयोगकर्ता Martunia.g, द्वारा खिचिएको तस्बिर, 2021, मेथिलिन ब्लू प्रयोग गरिएको धनात्मक रङ्गन 2 बाट, CC BY 4.0 इजाजतपत्रअन्तर्गत।

घना नीलो समूहहरूलाई कम भीड भएका किनारासँग तुलना गर्नुहोस्। वस्तुहरू कम खप्टिएको ठाउँमा प्रत्येकको रूपरेखा पछ्याउन सजिलो हुन्छ। Candida नाम स्रोतको अभिलेखबाट आएको हो, यस तस्बिरमा गरिएको प्रजाति पहिचानबाट होइन। यस तस्बिरले जीवित रहने क्षमताको नतिजा पनि दिँदैन। खमीरको जीवित रहने क्षमता र श्वसन परीक्षणहरू का लागि आफ्नै अवस्था, नियन्त्रण र व्याख्या आवश्यक हुन्छन्।

मापन सही रूपमा बुझ्ने

यी तस्बिरहरूले दृश्य तुलना गर्न सघाउँछन्, माइक्रोमिटरमा नाप्न वा तस्बिरहरूबीच कोषको निरपेक्ष आकार तुलना गर्न होइन। उल्लेख गरिएको आवर्धनले छुटेको क्यामेरा क्यालिब्रेसनको पूर्ति गर्दैन। तस्बिर देखाइने आकार परिवर्तन गर्दा त्यसको देखिने आवर्धन बदलिन्छ।

आफ्ना तस्बिरका लागि ज्ञात मानक र सम्बन्धित प्रकाशीय व्यवस्थाको प्रयोग गरी मापन क्यालिब्रेसन स्थापित गर्नुहोस्। Nikon को सूक्ष्ममापन मार्गदर्शिका ले स्टेज माइक्रोमिटरले तस्बिर वा रेटिकलका स्वेच्छिक विभाजनहरूलाई वास्तविक लम्बाइमा कसरी रूपान्तरण गर्छ भन्ने बताउँछ। अब्जेक्टिभ लेन्स, क्यामेराको विन्यास र क्यालिब्रेसनको अभिलेख राख्नुहोस्, अनि ती तथ्याङ्कबाट मापन पट्टी थप्नुहोस्। पाठ्यपुस्तकमा दिइएको कोषको औसत आकारबाट पट्टीको अनुमान नगर्नुहोस्।

के बोतलको पदार्थ विधिसँग मेल खान्छ?

मेथिलिन ब्लू लेखिएको बोतल मात्र प्रयोगशालाको पूर्ण विनिर्देश होइन। त्यसको सान्द्रता र एकाइ, विलायक, थप सामग्री, निर्धारित प्रयोग, ब्याचसम्बन्धी कागजात र निर्देशन जाँच्नुहोस्। अभिकर्मकको सुरक्षा तथ्याङ्क पत्रले खतराहरू वर्णन गर्छ; विधिका निर्देशनले निर्धारित नमुना तयारीका लागि त्यसलाई कसरी प्रयोग गर्ने भन्ने तय गर्छन्।

एउटा ठोस उदाहरण Merck को Löffler मेथिलिन ब्लू घोल हो। निर्माताले यसलाई सूक्ष्मदर्शन अभिकर्मकका रूपमा चिनाउँछ र अम्ल-प्रतिरोधी रङ्गनमा प्रतिरङ्गकका रूपमा यसको भूमिका वर्णन गर्छ। यसका विवरणमा उल्लेख गरिएको ज्वलनशीलताले पनि सम्हाल्ने वा तताउने योजना बनाउन “नीलो तरल” भन्ने जानकारी मात्र किन पर्याप्त हुँदैन भन्ने देखाउँछ। ती गुणहरू सोही सूत्रणमा लागू हुन्छन्, हरेक जलीय मेथिलिन ब्लू घोलमा स्वतः होइन।

त्यसैगरी, इओसिन मेथिलिन ब्लू अगर एउटा सूत्रण गरिएको संवर्धन माध्यम हो। यो नमुनामा साधारण मेथिलिन ब्लू थपेर बनाइने स्लाइड रङ्गक होइन। फरक चित्रण उद्देश्यका लागि सूक्ष्मदर्शनमा मेथिलिन ब्लूका विकल्पहरू तुलना गर्नुहोस्।

प्रारम्भिक सूक्ष्मदर्शक किट प्रयोग गर्दा त्यसको लिखित शैक्षिक विधि, ज्ञात तयार स्लाइड र निर्दिष्ट अभिकर्मकबाट सुरु गर्नुहोस्। बोतलको लेबल हराएको छ वा त्यसको संरचना यकिन गर्न सकिँदैन भने त्यसको सट्टा उचित विवरण भएको उपयुक्त अभिकर्मक प्रयोग गर्नुहोस्। आँखाको सुरक्षा साधन र प्रयोग भइरहेको वास्तविक सूत्रणका लागि दिइएका सम्हाल्ने निर्देशनहरू पालना गर्नुहोस्। मानव सामग्री र अज्ञात वातावरणीय नमुनाका लागि शिक्षण प्रयोगशालाका नमुना सम्हाल्ने र नष्ट गर्ने कार्यविधि आवश्यक हुन्छन्; रङ्गन ती कार्यविधिको विकल्प होइन।

निष्कर्षअघि अवलोकन लेख्नुहोस्

“समूहमा रहेका नीलो अण्डाकार वस्तुहरू” तस्बिरको प्रमाणसङ्गत वर्णन हो। “एउटा विशेष सङ्क्रमण” भन्नका लागि तस्बिरले नदिएको प्रमाण आवश्यक हुन्छ। नोटबुकमा नमुनाको स्रोत, तयारी, रङ्गन प्रतिक्रिया र पहिचान विधि छुट्टाछुट्टै राख्नुहोस्। यस भिन्नताले कक्षाकोठाको सरल तस्बिरलाई उपयोगी बनाउँछ र आकर्षक सूक्ष्मतस्बिरबाट त्यसले समर्थन गर्न नसक्ने दाबी गरिनबाट जोगाउँछ।