Metylblått er ikke metylenblått: CAS-numre, strukturer og bruksområder

To flasker står på laboratoriebenken. På den ene står det metylblått. På den andre står det metylenblått. En sliten leser ser det samme ordet to ganger. Kjemisk sett er det to forskjellige molekyler.

Dette er en navneforveksling med praktiske konsekvenser. Bestill feil fargestoff, og fargingen oppfører seg annerledes, redoksindikatoren gir aldri utslag, eller formuleringen inneholder en forbindelse ingen har validert. Løsningen er enkel: Bruk trivialnavnet som et hint og identifikatoren som beslutningsgrunnlag. Kontroller CAS-nummeret, Colour Index-nummeret og hydratformen før noe annet.

Det korte svaret

Metylenblått er et lite kationisk fenotiazin-fargestoff, C.I. 52015, bygget rundt en kompakt kromofor med tre ringer og to dimetylaminogrupper. Metylblått er et stort anionisk triarylmetan-fargestoff, C.I. 42780, bygget av sulfonerte trifenylmetan-enheter. De deler en fargefamilie og en del av et navn. Nesten ingenting annet er felles.

Toluidinblått O ligger nærmere metylenblått. Begge er kationiske tiazin-fargestoffer, men toluidinblått O har én aminogruppe og en metylsubstituent på ringen der metylenblått har sin andre dimetylaminogruppe. Denne lille endringen forskyver absorpsjonstoppen og endrer fargeselektiviteten, så disse to kan heller ikke brukes om hverandre.

Identitetstabell: kontroller disse feltene ved hver bestilling

Katalognavn varierer. Leverandører bruker synonymer upresist. Feltene nedenfor varierer ikke, og et godt utarbeidet analysesertifikat oppgir dem. PubChem oppgir metylenblått som metyltioniniumklorid, C.I. Basic Blue 9, som er referansepunktet for alt som følger.

To detaljer i denne tabellen står bak de fleste innkjøpsfeilene. For det første har metylenblått flere CAS-numre for ulike hydratformer, og 122965-43-9 betegner et uspesifisert hydrat, ikke det spesifikke trihydratet (7220-79-3), slik koblingen i USP-monografien viser. Innveiing basert på feil formelvekt forskyver alle etterfølgende konsentrasjonsberegninger uten at det nødvendigvis merkes. For det andre inneholder en leverandørs synonymliste for toluidinblått O betegnelsen Methylene Blue T50. Det betyr at et katalogsøk basert bare på navn kan gi et helt annet fargestoff.

Strukturen forklarer egenskapene

Se for deg de to kromoforene side om side, så forsvinner forvirringen. Metylenblått er bygget rundt et fenotiazinium-system: tre kondenserte ringer med svovel og nitrogen i den midterste ringen og en dimetylaminogruppe i hver ende. Den fargede formen er metyltioniniumkationet med klorid som motion. Lite, flatt, positivt ladet og klart til å binde seg til negativt ladede cellekomponenter.

Metylblått har omtrent to og en halv ganger så stor masse. Fargen kommer fra en trifenylmetan-kjerne med sulfonerte anilino-fenylgrupper, og stoffet leveres som et dinatriumsalt. Disse sulfonatgruppene gjør det til et anionisk syrefargestoff med motsatt ladningskarakter og helt andre vevsaffiniteter. Mens metylenblått går inn i celler og deltar i redokssykluser, brukes metylblått til farging av kollagen og bindevev og som Cotton Blue i soppreparater, for eksempel i protokoller for laktofenolbomullsblått. Å erstatte det ene med det andre gir ikke en svakere versjon av samme resultat. Det gir et annet eksperiment.

Toluidinblått O beholder fenotiazinium-skjelettet, så egenskapene ligner på metylenblåtts uten å være identiske. Absorpsjonsmaksimumet ligger nær 626 nm, mot omtrent 660 til 665 nm for metylenblått. Den metakromatiske fargingen av sure vevskomponenter (mastcellegranuler, muciner, brusk og nukleinsyrerike strukturer) følger stoffets egen selektivitet, beskrevet i oversiktsartikler om histologi. Et laboratorium som erstatter metylenblått med TBO, bør forvente forskjøvede spektre og annerledes kontrast, ikke et rimeligere alternativ med samme egenskaper.

Hva hvert fargestoff faktisk brukes til

Metylenblått begynte som tekstilfargestoff og ble deretter tatt i bruk innen bakteriologi, hematologi og mikroskopi, en utvikling som er oppsummert i litteraturen om stoffets historie. Den neste rollen er kjemisk: Den oksiderte formen er blå, mens den reduserte formen, leukometylenblått, er nesten fargeløs. Dette gjør det anvendelig som redoksindikator. Den tredje rollen er farmasøytisk. Metyltioniniumklorid er virkestoffet i det reseptbelagte legemidlet PROVAYBLUE, indisert ved ervervet methemoglobinemi, og denne medisinske rollen stiller langt høyere krav til renhet enn kvaliteter beregnet på farging eller tekstiler. Hvordan metylenblått virker som redoksfargestoff forklarer mekanismen bak disse bruksområdene.

Metylblått gjennomgikk aldri den utviklingen. Det brukes fortsatt som fargestoff til papir, tekstiler, lær og mikroskopi: som sertifisert fargestoff for kollagen i bindevevsprosedyrer av Mallory-typen, som erstatning for Fast Green i varianter av Gomoris trikromfarging og som soppfargestoff i mykologi. Enkelte metylblåttprodukter har et pH-indikatorområde rundt 9.4 til 14. Ingenting av dette gjør det til et redoksbasert legemiddel, og ingen fargesertifisering endrer det.

Toluidinblått O er først og fremst et biologisk fargestoff med metakromatiske egenskaper, brukt innen histologi og mikrobiologi. Det brukes også separat som klinisk vitalfargestoff for å avgrense mistenkelige lesjoner i munnhulen før biopsi. Det er et hjelpemiddel ved valg av biopsisted, ikke en erstatning for histopatologi. Den som sammenligner toluidinblått med metylenblått for diagnostikk eller formulering, bør sammenligne spektre, hvilke vev de farger, og dokumentasjon på kvalitetsgrad, ikke navn.

Lignende navn som villeder kjøpere

Tre andre navn bør stå på kontrollisten. New Methylene Blue N er ikke metylenblått. Det er C.I. 52030 (CAS 1934-16-3), et etylert og ringmetylert fenotiazin som brukes innen histologi og hematologi. Fargemetoder med New Methylene Blue hører til denne separate litteraturen. Azure B ligger nærmere: en analog av metylenblått som er N-demetylert én gang (CAS 531-55-5, C.I. 52010), og som både er en viktig metabolitt av metylenblått og en dokumentert urenhet i metylenblåttmateriale. Derfor kombinerer USP-programmet referansemateriale for metylenblått med en Azure B-standard. Forholdet mellom de to, og hvorfor kartlegging av urenhetsprofilen er viktig, omtales i Azure B som urenhet og metabolitt. Krystallfiolett, som noen ganger selges under det eldre navnet gentianafiolett, er et triarylmetan-fargestoff (CAS 548-62-9, C.I. 42555) helt uten tiazinring.

Bekreft identiteten før du betaler

En solid innkjøpsspesifikasjon angir det nøyaktige kjemikaliet, CAS-nummeret, C.I.-nummeret, hydratformen og kvalitetsgraden, og bekrefter deretter disse opplysningene mot analysesertifikatet, ikke bare etiketten på flasken. Absorpsjonsmaksimumet er en rask, uavhengig kontroll: metylenblått nær 665 nm, toluidinblått O nær 626 nm og metylblått nær 595 til 605 nm under de angitte sure betingelsene. En topp på feil sted betyr feil fargestoff, uansett hva flasken hevder.

Dokumentasjon på kvalitetsgrad besvarer et annet spørsmål enn kjemisk identitet. Sertifisering fra Biological Stain Commission tester et bestemt parti for fargestoffinnhold og fargeegenskaper, noe som er viktig når målet er reproduserbar farging. Samsvar med USP omfatter farmasøytisk identitet, renhet, organiske urenheter, rester av løsemidler, elementære urenheter og mikrobiell kontroll, noe som er viktig når materialet skal inntas. De to programmene har overlappende formål, men ulikt innhold, så det ene sertifikatet kan ikke erstatte det andre.

Det er her kvalitet ved innkjøp blir konkret. Høy renhet er viktig fordi metylenblått som ikke oppfyller USP, vanligvis er av tekstilkvalitet og kan inneholde urenheter som Azure B, tungmetaller eller rester av løsemidler som ingen fargeprotokoll kontrollerer for. De fleste selgere som hevder samsvar med USP, tester bare for tungmetaller og erklærer seg ferdige. Fullt samsvar omfatter identitet, innholdsbestemmelse, organiske urenheter, rester av løsemidler, elementære urenheter, gløderest, mikrobielle grenseverdier og bakterielle endotoksiner. Hvordan velge metylenblått av farmasøytisk kvalitet viser hvordan denne dokumentasjonen skal leses. Blupreme samarbeider med en farmasøytisk produsent av metylenblått, tester mot hele USP-spesifikasjonen og publiserer det fullstendige analysesertifikatet (COA). Det er dette den systematiske identitetskontrollen som artikkelen anbefaler, betyr i praksis.