L-Artikolu
Żbigħ bil-blu tal-metilen: metodi tal-mikroskopija u atlas bi stampi reali
Iż-żbigħ bil-blu tal-metilen jagħmel karatteristiċi ċellulari li altrimenti jkunu diffiċli biex jidhru aktar faċli biex jingħarfu fil-mikroskopija b'kamp ċar. Jista' jgħin lill-istudenti jsibu n-nukleu ta' ċellola tal-ħaddejn jew jeżaminaw il-kontorn u l-arranġament tal-mikroorganiżmi. Oġġett blu, madankollu, huwa osservazzjoni. Li tagħti isem lill-organiżmu, tkejlu, u tiddeċiedi jekk jindikax marda huma kompiti separati.
L-istampa tal-qoxra turi l-prinċipju tal-kuntrast. L-atlas hawn taħt fih ritratti reali ta' kampjuni dokumentati indipendentement, bl-informazzjoni mis-sorsi oriġinali tagħhom.
X'juri l-blu tal-metilen?
Il-blu tal-metilen huwa żebgħa bażika: il-jone kkulurit tiegħu għandu ċarġ pożittiv. Kif jispjega OpenStax fit-taqsima tiegħu dwar iż-żbigħ tal-kampjuni, iż-żebgħat bażiċi jinteraġixxu ma' materjal ċellulari b'ċarġ negattiv u jistgħu jagħmlu ċ-ċelloli jispikkaw fuq sfond aktar ċar. Fi preparazzjonijiet xierqa, il-blu tal-metilen jenfasizza reġjuni b'ħafna aċidi nuklejċi u strutturi oħra li jorbtu ż-żebgħa.
Fiż-żbigħ sempliċi, żebgħa waħda tipprovdi l-kuntrast. Għaldaqstant, diversi organiżmi jistgħu jidhru blu mingħajr ma jkunu l-istess organiżmu. Il-mistoqsijiet utli fil-bidu huma deskrittivi: l-oġġetti huma tondi jew tawwalin, iżolati jew fi gruppi, miżbugħin b'mod uniformi jew b'differenzi interni? Ara d-distinzjoni bejn iż-żbigħ sempliċi u ż-żbigħ ta' Gram qabel ma tinterpreta l-kulur bħala riżultat ta' klassifikazzjoni.
Il-kuntrast u r-riżoluzzjoni huma differenti. Il-kuntrast jgħin biex oġġett jingħaraf minn dak li hemm madwaru; ir-riżoluzzjoni tissepara dettalji qrib xulxin. Stampa aktar skura ma tiggarantixxix li aktar strutturi jkunu riżolti. Lanqas kull granulu skur ma għandu jiġi identifikat bħala organell.
Preparazzjonijiet nattivi, preparazzjonijiet imxarrba miżbugħin, u firxiet
Preparazzjoni mxarrba mhux miżbugħa, jew nattiva, tippreserva dehra mingħajr żebgħa miżjuda, għalkemm it-tneħħija mill-ambjent oriġinali xorta tibdel il-kampjun. Preparazzjoni mxarrba miżbugħa żżid reaġent waqt li l-materjal jibqa' f'likwidu taħt għata tal-ħġieġ. Firxa ffissata tifrex il-materjal fuq ħġieġa tal-mikroskopju u tuża metodu speċifikat ta' fissazzjoni qabel l-ipproċessar sussegwenti. Il-ħarsa ġenerali ta' OpenStax lejn il-preparazzjoni tiddistingwi bejn preparazzjonijiet imxarrba u fissazzjoni, u tispjega għaliex organiżmi ffissati ma jibqgħux joffru dehra tal-moviment jew tal-metaboliżmu normali.
Dawn il-preparazzjonijiet iwieġbu mistoqsijiet differenti:
| Preparazzjoni | Osservazzjoni utli | X'ma tistax tistabbilixxi l-istampa waħedha |
|---|---|---|
| Preparazzjoni mxarrba nattiva | Moviment, kontorni, materjal viżibbli b'mod naturali | Identità mill-moviment jew mill-forma biss |
| Preparazzjoni mxarrba miżbugħa | Kuntrast bejn strutturi li jorbtu ż-żebgħa u dak li hemm madwarhom | Jekk ir-reaġent ħalliex il-fiżjoloġija normali mhux mibdula |
| Firxa ffissata u miżbugħa | Morfoloġija ppreservata wara preparazzjoni definita | Kif kien iġib ruħu l-kampjun ħaj oriġinali |
| Metodu differenzjali b'isem speċifiku | Reazzjoni speċifikata għaż-żbigħ b'kontrolli xierqa | Identità tal-ispeċi jew dijanjożi mingħajr l-evidenza usa' tal-metodu |
Għal tqabbil fil-klassi, irreġistra preparazzjoni mhux miżbugħa qabel ma teżamina preparazzjoni separata miżbugħa magħmula skont il-protokoll tat-tagħlim. Żomm l-illuminazzjoni u s-settings tal-qbid tal-istampi komparabbli. Jekk jiġu fotografati żewġ ċelloli differenti, iddeskrivihom bħala eżempji, mhux bħala rekord ta' ċellola waħda qabel u wara.
Atlas tal-mikroskopija: tliet kampjuni reali miżbugħin
Dan l-atlas huwa għażla u interpretazzjoni oriġinali ta' tliet mikrografiji b'liċenzji miftuħa. L-awturi tas-sorsi jidentifikaw il-kampjuni u ż-żebgħat. Aħna ma vverifikajniex b'mod indipendenti l-awtentiċità tal-kampjuni tagħhom. L-istampi huma riprodotti mingħajr qtugħ bħala konverżjonijiet WebP mingħajr telf, mingħajr karatteristiċi miżjuda jew bidliet fil-kulur.
Pjanċa 1: ċelloli tal-ħaddejn tal-bniedem
Kampjun: ċelloli tal-ħaddejn tal-bniedem. Żebgħa: blu tal-metilen. Tkabbir: 400×, irrappurtat mill-fotografu. Barra tal-iskala: mhux disponibbli; is-sors ma jipprovdix daqs ikkalibrat tal-pixel. Ritratt ta' Fritzmann2002, 2017, minn Ċelloli tal-Ħaddejn tal-Bniedem (Żbigħ bil-Blu tal-Metilen), liċenzjat taħt CC BY-SA 4.0. Din ir-riproduzzjoni żżomm dik il-liċenzja.
.jpg){kind=link}
Ibda b'ċellola iżolata: in-nukleu aktar skur tagħha huwa aktar faċli biex jingħaraf miċ-ċitoplażma blu ta' madwaru. Imbagħad eżamina ċ-ċelloli taħtha li jikkoinċidu. Meta ċ-ċelloli jikkoinċidu, il-konfini jkun aktar diffiċli biex issegwih u tista' tinħoloq żona lokalment aktar skura. Uża din il-pjanċa biex tipprattika kif issegwi l-kontorni, mhux biex tgħodd kull roqgħa skura bħala nukleu. Il-gwida għall-osservazzjoni taċ-ċelloli tal-ħaddejn tiżviluppa l-eżerċizzju speċifiku għal dan il-kampjun.
Pjanċa 2: ċelloli tal-basla
Kampjun: ċelloli tal-basla, kif identifikati mis-sors. Żebgħa: blu tal-metilen. Tkabbir: “200x” jidher fl-isem oriġinali tal-fajl; mhuwiex ivvalidat indipendentement. Barra tal-iskala: mhux disponibbli; ma hija pprovduta ebda kalibrazzjoni. Ritratt ta' Alvy16, 2019, minn Ċellola tal-basla 200x, liċenzjat taħt CC BY 4.0.
Il-kompartimenti tawwalin jiffurmaw saff organizzat. Qabbel il-konfini twal komuni tagħhom mal-kontorni irregolari fil-Pjanċa 1. Innota wkoll il-materjal skur prominenti u l-luminożità mhux uniformi tal-kamp. Ir-ritratt ma jistabbilixxix l-identità ta' kull depożitu skur. Juri għaliex rekord utli tal-osservazzjoni jinkludi artefatti u inċertezza, minflok ma jagħti tikketta lil kull ħaġa li tieħu l-kulur.
Pjanċa 3: ħmira identifikata mis-sors bħala Candida spp.
Kampjun: Candida spp., skont il-fotografa. Żebgħa: żbigħ pożittiv sempliċi bil-blu tal-metilen. Tkabbir: mhux disponibbli. Barra tal-iskala: mhux disponibbli; ma huwa pprovdut ebda daqs ikkalibrat tal-pixel. Ritratt ta' Marta, l-utent ta' Wikimedia Martunia.g, 2021, minn Żbigħ pożittiv bil-blu tal-metilen 2, liċenzjat taħt CC BY 4.0.
Qabbel il-gruppi blu densi mal-marġini inqas iffullati. Il-kontorni individwali huma aktar faċli biex issegwihom fejn l-oġġetti jikkoinċidu inqas. L-isem Candida ġej mir-rekord tas-sors, mhux minn identifikazzjoni tal-ispeċi mwettqa fuq dan ir-ritratt. Din il-pjanċa lanqas ma tipprovdi riżultat dwar il-vijabbiltà. L-analiżijiet tal-vijabbiltà u tar-respirazzjoni tal-ħmira jeħtieġu l-kundizzjonijiet, il-kontrolli, u l-interpretazzjoni tagħhom stess.
Kif taqra l-iskala b'mod korrett
Dawn il-pjanċi jappoġġjaw tqabbil viżiv, mhux kejl f'mikrometri jew tqabbil tad-daqs assolut taċ-ċelloli bejn il-pjanċi. It-tkabbir irrappurtat ma jirkuprax il-kalibrazzjoni nieqsa tal-kamera. Meta tbiddel id-daqs li bih tintwera stampa, tbiddel it-tkabbir apparenti tagħha.
Għall-istampi tiegħek stess, stabbilixxi kalibrazzjoni tal-kejl billi tuża standard magħruf u l-konfigurazzjoni ottika rilevanti. Il-gwida ta' Nikon għall-mikrometrija tispjega kif mikrometru tal-pjattaforma jikkonverti diviżjonijiet arbitrarji tal-istampa jew tar-retikulu f'tulijiet fiżiċi. Irreġistra l-lenti oġġettiva, il-konfigurazzjoni tal-kamera, u l-kalibrazzjoni, u żid barra tal-iskala minn dik id-data. Tiddeduċix barra mid-daqs medju ta' ċellola mogħti fi ktieb tat-tagħlim.
Il-flixkun jaqbel mal-metodu?
Flixkun bit-tikketta tal-blu tal-metilen mhuwiex speċifikazzjoni kompluta għal-laboratorju. Iċċekkja l-konċentrazzjoni u l-unitajiet tiegħu, is-solvent, l-ingredjenti addizzjonali, l-applikazzjoni maħsuba, id-dokumentazzjoni tal-lott, u l-istruzzjonijiet. L-iskeda tad-data tas-sigurtà ta' reaġent tiddeskrivi l-perikli; l-istruzzjonijiet tal-metodu jistabbilixxu kif tużah għall-preparazzjoni maħsuba.
Eżempju konkret huwa s-soluzzjoni tal-blu tal-metilen ta' Löffler minn Merck. Il-manifattur jidentifikaha bħala reaġent għall-mikroskopija u jiddeskrivi r-rwol tagħha bħala żebgħa ta' kuntrast fiż-żbigħ għal organiżmi reżistenti għall-aċidu. Il-fjammabbiltà indikata tagħha turi wkoll għaliex “likwidu blu” mhuwiex informazzjoni biżżejjed biex tippjana l-immaniġġjar jew it-tisħin. Dawk il-proprjetajiet japplikaw għal dik il-formulazzjoni, mhux awtomatikament għal kull soluzzjoni milwiema tal-blu tal-metilen.
Bl-istess mod, l-agar bl-eosina u l-blu tal-metilen huwa mezz ta' kultura fformulat. Mhuwiex żebgħa għall-ħġieġa tal-mikroskopju magħmula billi żżid blu tal-metilen sempliċi ma' kampjun. Għal għan differenti fl-immaġni, qabbel l-alternattivi għall-blu tal-metilen fil-mikroskopija.
Għal kitt tal-mikroskopju għall-prinċipjanti, ibda bil-metodu edukattiv dokumentat tiegħu, bi ħġieġ ippreparat magħruf, u bir-reaġent speċifikat. Jekk flixkun ikun tilef it-tikketta tiegħu jew il-kompożizzjoni tiegħu ma tkunx tista' tiġi stabbilita, ibdlu bir-reaġent xieraq u dokumentat. Uża protezzjoni għall-għajnejn u l-istruzzjonijiet tal-immaniġġjar ipprovduti għall-formulazzjoni attwali. Materjal uman u kampjuni ambjentali mhux magħrufa jeħtieġu l-proċeduri tal-laboratorju tat-tagħlim għall-immaniġġjar u r-rimi tal-kampjuni; iż-żbigħ mhuwiex sostitut għal dawk il-proċeduri.
Ikteb l-osservazzjoni qabel il-konklużjoni
“Oġġetti ovali blu fi gruppi” hija deskrizzjoni ta' stampa li tista' tiġi ġġustifikata. “Infezzjoni partikolari” teħtieġ evidenza li l-istampa ma pprovdietx. Żomm il-provenjenza tal-kampjun, il-preparazzjoni, ir-reazzjoni għaż-żbigħ, u l-metodu ta' identifikazzjoni separati fil-ktejjeb tan-noti. Dik id-distinzjoni tagħmel stampa sempliċi tal-klassi utli u tipprevjeni mikrografija attraenti milli ġġorr stqarrija li ma tistax tappoġġja.