Боење со метиленско сино: микроскопски методи и атлас со вистински снимки

Боењето со метиленско сино го олеснува разликувањето на инаку слабо видливите клеточни структури при микроскопија во светло поле. Тоа може да им помогне на учениците и студентите да го најдат јадрото на клетка од образот или да ги испитаат контурите и распоредот на микроорганизмите. Меѓутоа, синиот објект е само набљудување. Именувањето на организмот, неговото мерење и утврдувањето дали укажува на болест се одделни задачи.

Насловната слика го илустрира принципот на контраст. Атласот подолу содржи вистински фотографии од независно документирани примероци, со нивните оригинални податоци за изворот.

Што открива метиленското сино?

Метиленското сино е базна боја: неговиот обоен јон носи позитивен полнеж. Како што објаснува OpenStax во делот за боење примероци, базните бои стапуваат во интеракција со негативно наелектризиран клеточен материјал и можат да ги истакнат клетките на посветла заднина. Во соодветни препарати, метиленското сино ги нагласува подрачјата богати со нуклеински киселини и другите структури што ја врзуваат бојата.

При едноставно боење, контрастот го обезбедува една боја. Поради тоа, различни организми можат да изгледаат сино без да бидат ист организам. Корисните прашања на почетокот се описни: дали објектите се тркалезни или издолжени, изолирани или групирани, рамномерно обоени или со различно обоени внатрешни делови? Погледнете ја разликата меѓу едноставното боење и боењето по Грам пред да ја толкувате бојата како резултат од класификација.

Контрастот и резолуцијата се различни. Контрастот помага да се разликува објектот од околината; резолуцијата овозможува да се разликуваат блиските детали. Потемна слика не гарантира дека ќе се распознаат повеќе структури. Ниту, пак, секоја темна гранула треба да се означи како органела.

Нативни препарати, обоени влажни препарати и размаски

Необоениот, или нативен, влажен препарат овозможува набљудување без додадена боја, иако отстранувањето од првичната средина сепак го менува примерокот. Кај обоениот влажен препарат се додава реагенс додека материјалот останува во течност под покривно стакленце. За фиксиран размасок, материјалот се разнесува на предметно стакло и се применува одреден метод на фиксација пред понатамошната обработка. Прегледот на подготовката во OpenStax ги разликува влажните препарати од фиксацијата и објаснува зошто фиксираните организми повеќе не овозможуваат набљудување на нормалното движење или метаболизам.

Овие препарати одговараат на различни прашања:

За споредба на час, документирајте необоен препарат пред да испитате одделен обоен препарат направен според наставниот протокол. Одржувајте споредливи услови на осветлување и поставки за снимање. Ако се фотографирани две различни клетки, опишете ги како примери, а не како приказ на една клетка пред и по боењето.

Микроскопски атлас: три вистински обоени примероци

Овој атлас е оригинален избор и толкување на три микрофотографии со отворени лиценци. Авторите на изворните фотографии ги идентификуваат примероците и боите. Ние не сме ја потврдиле независно автентичноста на нивните примероци. Сликите се репродуцирани без отсекување, како WebP-конверзии без загуба, без додадени елементи или промени на бојата.

Табла 1: човечки клетки од образот

Примерок: човечки клетки од образот. Боја: метиленско сино. Зголемување: 400×, наведено од фотографот. Линија за размер: недостапна; изворот не дава калибрирана големина на пикселот. Фотографија од Fritzmann2002, 2017, од Човечки клетки од образот (боење со метиленско сино), со лиценца CC BY-SA 4.0. Оваа репродукција ја задржува таа лиценца.

Почнете со изолирана клетка: нејзиното потемно јадро полесно се разликува од околната сина цитоплазма. Потоа разгледајте ги преклопените клетки под неа. Преклопувањето го отежнува следењето на границата и може да создаде локално потемно подрачје. Користете ја оваа табла за да вежбате следење на контурите, а не за да ја броите секоја темна дамка како јадро. Водичот за набљудување клетки од образот ја разработува вежбата специфична за овој примерок.

Табла 2: клетки од кромид

Примерок: клетки од кромид, според идентификацијата во изворот. Боја: метиленско сино. Зголемување: „200x“ се појавува во оригиналното име на датотеката; не е независно потврдено. Линија за размер: недостапна; не е дадена калибрација. Фотографија од Alvy16, 2019, од Клетка од кромид 200x, со лиценца CC BY 4.0.

Издолжените прегради формираат организиран слој. Споредете ги нивните долги заеднички граници со неправилните контури во Табла 1. Забележете ги и впечатливиот темен материјал и нерамномерната осветленост на видното поле. Фотографијата не го утврдува идентитетот на секој темен талог. Таа покажува зошто корисниот запис од набљудувањето ги вклучува артефактите и неизвесноста, наместо да означува сè што прима боја.

Табла 3: квасец идентификуван во изворот како Candida spp.

Примерок: Candida spp., според фотографот. Боја: едноставно позитивно боење со метиленско сино. Зголемување: недостапно. Линија за размер: недостапна; не е дадена калибрирана големина на пикселот. Фотографија од Marta, корисник на Wikimedia со име Martunia.g, 2021, од Позитивно боење со метиленско сино 2, со лиценца CC BY 4.0.

Споредете ги густите сини групи со поретко населените рабови. Поединечните контури полесно се следат таму каде што објектите помалку се преклопуваат. Името Candida потекнува од изворниот запис, а не од идентификација на видот извршена врз оваа фотографија. Оваа табла не дава ни резултат за вијабилноста. Тестовите за вијабилност и респирација на квасец бараат сопствени услови, контроли и толкување.

Правилно читање на размерот

Овие табли овозможуваат визуелна споредба, а не мерења во микрометри или споредби на апсолутната големина на клетките меѓу таблите. Наведеното зголемување не ја надоместува недостасувачката калибрација на камерата. Менувањето на големината на прикажување на сликата го менува нејзиното привидно зголемување.

За сопствените слики, воспоставете калибрација за мерење со познат стандард и соодветната оптичка конфигурација. Водичот на Nikon за микрометрија објаснува како предметниот микрометар ги претвора произволните поделби на сликата или на мерната скала во физички должини. Запишете ги објективот, конфигурацијата на камерата и калибрацијата, па додајте линија за размер врз основа на тие податоци. Не изведувајте таква линија од просечната големина на клетка наведена во учебник.

Дали шишето одговара на методот?

Шише означено како метиленско сино не е целосна лабораториска спецификација. Проверете ги концентрацијата и единиците, растворувачот, дополнителните состојки, намената, документацијата за серијата и упатствата. Безбедносниот лист на реагенсот ги опишува опасностите; упатствата за методот утврдуваат како да се користи за предвидениот препарат.

Конкретен пример е Лефлеровиот раствор на метиленско сино од Merck. Производителот го идентификува како реагенс за микроскопија и ја опишува неговата улога како контрастна боја при боење за киселинска отпорност. Наведената запаливост исто така покажува зошто „сина течност“ е недоволна информација за планирање на ракувањето или загревањето. Тие својства важат за таа формулација, а не автоматски за секој воден раствор на метиленско сино.

Исто така, еозин-метиленско синиот агар е формулирана подлога за култивирање. Тој не е боја за микроскопски препарати што се подготвува со додавање обично метиленско сино во примерок. За друга цел на снимање, споредете ги алтернативите на метиленското сино за микроскопија.

За почетнички микроскопски комплет, почнете со неговиот документиран наставен метод, познати готови препарати и наведениот реагенс. Ако шишето ја изгубило етикетата или неговиот состав не може да се утврди, заменете го со соодветен документиран реагенс. Користете заштита за очите и упатствата за ракување приложени за конкретната формулација. Човечкиот материјал и непознатите примероци од животната средина бараат примена на постапките за ракување со примероци и отстранување отпад на наставната лабораторија; боењето не е замена за тие постапки.

Запишете го набљудувањето пред заклучокот

„Сини овални објекти во групи“ е опис на слика што може да се поткрепи. „Одредена инфекција“ бара докази што сликата не ги дала. Во лабораториската тетратка одделно запишувајте ги потеклото на примерокот, подготовката, реакцијата на боење и методот на идентификација. Таа разлика ја прави едноставната слика од наставата корисна и спречува впечатливата микрофотографија да носи тврдење што не може да го поткрепи.