ບົດຄວາມ
ທາງເລືອກແທນເມທີລີນບລູສຳລັບການສ່ອງກ້ອງຈຸລະທັດ: ເລືອກຕາມວຽກ
ສຳລັບສະເມຍແບັກທີເຣຍແບບງ່າຍ, ຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດສາມາດໃຊ້ແທນເມທີລີນບລູໄດ້ເມື່ອເປົ້າໝາຍແມ່ນເບິ່ງຮູບຮ່າງຂອງເຊວ. ສຳລັບເຊວທີ່ຍັງມີຊີວິດ, ທາງເລືອກທີ່ເໝາະກວ່າອາດເປັນ phase contrast ໂດຍບໍ່ໃຊ້ສານຍ້ອມສີເລີຍ. ການເລືອກຂຶ້ນກັບສິ່ງທີ່ທ່ານຕ້ອງການສັງເກດ.
ສົມມຸດວ່າມີສອງຄົນກຳລັງກວດເບິ່ງວັດທະນະທຳແບັກທີເຣຍດຽວກັນ. ຄົນໜຶ່ງຕ້ອງການແຍກເຊວຮູບແທ່ງອອກຈາກເຊວຮູບກົມ. ອີກຄົນໜຶ່ງຕ້ອງການຮູ້ວ່າການຈັດການໜຶ່ງໄດ້ຂ້າແບັກທີເຣຍຫຼືບໍ່. ສານຍ້ອມສີທີ່ໃຫ້ພາບຊັດເຈນແກ່ຄົນທຳອິດ ອາດບໍ່ໃຫ້ຄຳຕອບທີ່ນຳໃຊ້ໄດ້ແກ່ຄົນທີສອງ.
ກ່ອນເລືອກສິ່ງທົດແທນ, ໃຫ້ຕື່ມປະໂຫຍກນີ້ໃຫ້ສົມບູນ: “ຂ້ອຍຕ້ອງການສັງເກດ ___ ໃນ ___, ແລະ ເຊວຕ້ອງ / ບໍ່ຈຳເປັນຕ້ອງຍັງມີຊີວິດ.” ປະໂຫຍກນີ້ກຳນົດໜ້າທີ່ທີ່ສານຍ້ອມສີຕ້ອງເຮັດ.
ເລີ່ມຈາກຕົວຢ່າງ ແລະ ຄຳຖາມ
ກ່ອນອື່ນໃຫ້ຕັດສິນໃຈວ່າເຊວຈະຕ້ອງຍັງມີຊີວິດຢູ່ຫຼືບໍ່, ຈາກນັ້ນລະບຸລັກສະນະທີ່ທ່ານຕ້ອງການສັງເກດ:
- ເຊວຕ້ອງຍັງມີຊີວິດ: ສຳລັບການເຄື່ອນໄຫວ ຫຼື ຮູບຮ່າງ, ພິຈາລະນາ phase contrast ຫຼື DIC ໂດຍບໍ່ຍ້ອມສີ; ສຳລັບ DNA ໃນນິວເຄຼຍ, ພິຈາລະນາ Hoechst 33342 ຮ່ວມກັບ fluorescence; ສຳລັບຄວາມສົມບູນຂອງເຢື່ອຫຸ້ມ, ເລືອກການທົດສອບທີ່ຜ່ານການຢືນຢັນ ເຊັ່ນ SYTO 9 ຮ່ວມກັບ propidium iodide.
- ເຊວບໍ່ຈຳເປັນຕ້ອງຍັງມີຊີວິດ: ສຳລັບຮູບຮ່າງແບັກທີເຣຍ, ພິຈາລະນາການຍ້ອມສີແບບງ່າຍດ້ວຍຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດ ຫຼື ການຍ້ອມແບບ negative stain ດ້ວຍນິໂກຣຊິນ; ສຳລັບປະຕິກິລິຍາ Gram, ໃຫ້ໃຊ້ວິທີ Gram-stain ຄົບຊຸດ; ສຳລັບ DNA ໃນນິວເຄຼຍຂອງເຊວທີ່ຖືກຕຶງໄວ້, ພິຈາລະນາ DAPI fluorescence.
ໃຊ້ຕາຕະລາງນີ້ເພື່ອປຽບທຽບຂໍ້ຈຳກັດຂອງແຕ່ລະທາງເລືອກ. ນີ້ແມ່ນການເລືອກວິທີ, ບໍ່ແມ່ນຄຳແນະນຳໃຫ້ສະຫຼັບຂວດສານເຄມີພາຍໃນໂປຣໂຕຄອນທີ່ມີຢູ່.
| ສິ່ງທີ່ທ່ານຕ້ອງການສັງເກດ | ຕົວຢ່າງ ແລະ ອຸປະກອນ | ທາງເລືອກທີ່ອາດໃຊ້ໄດ້ | ຂໍ້ຈຳກັດຫຼັກ |
|---|---|---|---|
| ຮູບຮ່າງ ແລະ ການຈັດຮຽງຂອງແບັກທີເຣຍ | ສະເມຍແບັກທີເຣຍທີ່ກຽມແລ້ວ; brightfield | ການຍ້ອມສີແບບງ່າຍດ້ວຍຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດ | ສະແດງຮູບຮ່າງ; ບໍ່ໄດ້ຢືນຢັນປະຕິກິລິຍາ Gram ຫຼື ຄວາມມີຊີວິດ. |
| ຂອບເຊວເທິງພື້ນຫຼັງສີເຂັ້ມ | ການກຽມຕົວຢ່າງດ້ານແບັກທີເຣຍ; brightfield | ການຍ້ອມແບບ negative stain ດ້ວຍນິໂກຣຊິນ | ວິທີກຽມ ແລະ ສູດປະສົມມີຄວາມສຳຄັນ; ເຊວທີ່ບໍ່ຖືກຍ້ອມສີບໍ່ຈຳເປັນຕ້ອງຍັງມີຊີວິດ. |
| ປະຕິກິລິຍາ Gram | ສະເມຍແບັກທີເຣຍທີ່ກຽມແລ້ວ; brightfield | ວິທີ Gram-stain ຄົບຊຸດ | ຕ້ອງໃຊ້ລຳດັບສານເຄມີ ແລະ ຕົວຄວບຄຸມຄົບຖ້ວນ. |
| ການເຄື່ອນໄຫວ ຫຼື ການປ່ຽນແປງໃນເຊວທີ່ມີຊີວິດ | ການກຽມຕົວຢ່າງແບບປຽກທີ່ເໝາະສົມ; phase contrast ຫຼື DIC | ບໍ່ໃຊ້ສານຍ້ອມສີ | ຕ້ອງມີລະບົບທັດສະນະທີ່ເໝາະສົມ; contrast ບໍ່ໄດ້ລະບຸໂມເລກຸນ. |
| DNA ໃນນິວເຄຼຍ | ເຊວທີ່ຖືກຕຶງໄວ້; fluorescence | DAPI | ຕ້ອງໃຊ້ຟິລເຕີ excitation ແລະ emission ທີ່ເຂົ້າກັນໄດ້. |
| DNA ໃນນິວເຄຼຍຂອງເຊວທີ່ມີຊີວິດ | ເຊວທີ່ມີຊີວິດ; fluorescence | Hoechst 33342 | ການທີ່ສານເຂົ້າເຊວໄດ້ບໍ່ໄດ້ຢືນຢັນວ່າເງື່ອນໄຂການຖ່າຍພາບຈະບໍ່ສົ່ງຜົນຕໍ່ເຊວ. |
| ຄວາມສົມບູນຂອງເຢື່ອຫຸ້ມແບັກທີເຣຍ | ແບັກທີເຣຍທີ່ບໍ່ໄດ້ຕຶງໄວ້; fluorescence | SYTO 9 ຮ່ວມກັບ propidium iodide | ການຍ້ອມສີເຢື່ອຫຸ້ມເປັນຕົວຊີ້ວັດທາງອ້ອມຂອງຄວາມມີຊີວິດ. |
ສຳລັບສະເມຍແບບງ່າຍ, ປ່ຽນວິທີຢ່າງລະມັດລະວັງ
ຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດເປັນທາງເລືອກທີ່ໃຊ້ງານໄດ້ຈິງເມື່ອໜ້າທີ່ແມ່ນການເບິ່ງຮູບຮ່າງແບັກທີເຣຍແບບສີດຽວ. Bacteriological Analytical Manual ຂອງ FDA ລະບຸ ສອງສູດປະສົມຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດທີ່ເໝາະສຳລັບການຍ້ອມສີແບບງ່າຍ. ໃຊ້ສູດປະສົມທີ່ມີເອກະສານກຳກັບ ແລະ ວິທີກຽມຂອງມັນ; ຊື່ຂອງສານຍ້ອມສີຢ່າງດຽວບໍ່ໄດ້ລະບຸສານເຮັດວຽກທີ່ພ້ອມໃຊ້.
ຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດຍັງຖືກໃຊ້ໃນການຍ້ອມ Gram, ແຕ່ນັ້ນບໍ່ໄດ້ເຮັດໃຫ້ການຍ້ອມແບບງ່າຍດ້ວຍຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດກາຍເປັນ Gram stain. ໃນ ໂປຣໂຕຄອນ Gram-stain ຂອງ ASM, ຜົນການແຍກຄວາມແຕກຕ່າງຂຶ້ນກັບຄຣິສຕັລໄວໂອເລັດ, iodine, ການລ້າງສີອອກ ແລະ ການຍ້ອມສີຕ້ານ ທີ່ເຮັດວຽກຕາມລຳດັບ. ການຕັດຂັ້ນຕອນເຫຼົ່ານັ້ນອອກຈະປ່ຽນສິ່ງທີ່ພາບສາມາດຢືນຢັນໄດ້. ເບິ່ງ ການຍ້ອມສີແບບງ່າຍທຽບກັບການຍ້ອມ Gram ສຳລັບຄວາມແຕກຕ່າງນີ້.
ນິໂກຣຊິນໃຫ້ອີກວິທີໜຶ່ງໃນການເຮັດໃຫ້ຂອບຂອງເຊວເຫັນຊັດ: ມັນເຮັດໃຫ້ພື້ນຫຼັງມືດລົງ ໃນຂະນະທີ່ເຊວແບັກທີເຣຍຍັງສະຫວ່າງກວ່າໂດຍປຽບທຽບ. ມີລາຍລະອຽດທີ່ເປັນປະໂຫຍດໃນ ຄຳແນະນຳນິໂກຣຊິນຂອງ Merck ທີ່ລາຍຊື່ສານທົດແທນທົ່ວໄປອາດພາດໄປ. ສູດປະສົມສຳລັບໃຊ້ງານທີ່ລະບຸໄວ້ຂອງມັນມີ formaldehyde. ດັ່ງນັ້ນ ທ່ານບໍ່ສາມາດອະນຸມານຄວາມເໝາະສົມກັບເຊວທີ່ມີຊີວິດຈາກຄຳວ່າ “negative stain” ເຖິງແມ່ນວ່າຕົວເຊວເອງຈະເບິ່ງຄືບໍ່ຖືກຍ້ອມສີ. ກວດສອບສູດປະສົມທັງໝົດ ແລະ ການກຽມຕົວຢ່າງ.
ສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ຍັງມີຊີວິດ, ພິຈາລະນາປ່ຽນລະບົບທັດສະນະ
ຖ້າທ່ານຕ້ອງການເບິ່ງເຊວເຄື່ອນໄຫວ ຫຼື ແບ່ງຕົວ, ການເພີ່ມສານຍ້ອມສີອີກຊະນິດໜຶ່ງອາດເຮັດໃຫ້ການສັງເກດຊັບຊ້ອນຂຶ້ນ. ດັ່ງທີ່ Nikon ອະທິບາຍໃນຄູ່ມືກ່ຽວກັບ contrast ໃນຕົວຢ່າງໂປ່ງໃສ, phase contrast ແລະ differential interference contrast ຫຼື DIC ເຮັດໃຫ້ເຫັນຕົວຢ່າງໄດ້ຜ່ານຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຄຸນສົມບັດທາງແສງ. ວິທີເຫຼົ່ານີ້ສາມາດເຮັດໃຫ້ເຫັນເຊວທີ່ຍັງມີຊີວິດ ແລະ ບໍ່ຖືກຍ້ອມສີໄດ້, ຖ້າກ້ອງຈຸລະທັດມີສ່ວນປະກອບທີ່ຈຳເປັນ.
ທາງເລືອກນີ້ຮັກສາການກຽມຕົວຢ່າງໂດຍບໍ່ຍ້ອມສີໄວ້, ແຕ່ມັນປ່ຽນຂໍ້ມູນທີ່ສາມາດໄດ້ຮັບ. ທ່ານສາມາດຕິດຕາມຂອບເຂດ ຫຼື ການເຄື່ອນໄຫວໄດ້ ໂດຍບໍ່ຮູ້ວ່າໂມເລກຸນໃດສ້າງ contrast ນັ້ນ. ຖ້າຄຳຖາມແມ່ນການລະບຸຕຳແໜ່ງໂມເລກຸນ, ໃຫ້ເລືອກວິທີຕິດສະຫຼາກທີ່ເໝາະສົມແທນ.
ສຳລັບ DNA ໃນນິວເຄຼຍ, ການປຽບທຽບ DAPI ແລະ Hoechst stains ຂອງ Invitrogen ແຍກໃຫ້ເຫັນການໃຊ້ DAPI ທົ່ວໄປກັບເຊວທີ່ຖືກຕຶງໄວ້ ອອກຈາກ Hoechst 33342 ທີ່ຜ່ານເຂົ້າເຊວໄດ້ດີກວ່າ ແລະ ນິຍົມໃຊ້ສຳລັບການຕິດສະຫຼາກເຊວທີ່ມີຊີວິດ. ທັງສອງຕ້ອງໃຊ້ອຸປະກອນ fluorescence. ທັງສອງບໍ່ແມ່ນສິ່ງທົດແທນໂດຍກົງສຳລັບສານຍ້ອມສີທີ່ໃຊ້ກັບ brightfield.
ໃຫ້ຖືວ່າການສຳຜັດກັບສານຍ້ອມສີ ແລະ ການສ່ອງແສງເປັນເງື່ອນໄຂການທົດລອງ. ປຽບທຽບການກຽມຕົວຢ່າງທີ່ຍ້ອມສີ ແລະ ບໍ່ຍ້ອມສີ ເມື່ອພຶດຕິກຳຂອງເຊວເປັນສິ່ງທີ່ທ່ານກຳລັງວັດ.
ເຊວສີແດງບໍ່ໄດ້ໝາຍຄວາມວ່າເປັນເຊວຕາຍໂດຍອັດຕະໂນມັດ
SYTO 9 ແລະ propidium iodide ມັກຖືກໃຊ້ຮ່ວມກັນເພື່ອປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງເຢື່ອຫຸ້ມແບັກທີເຣຍ. ຄູ່ມື BacLight ເຊື່ອມໂຍງເຢື່ອຫຸ້ມທີ່ສົມບູນກັບການຍ້ອມສີຂຽວ ແລະ ເຢື່ອຫຸ້ມທີ່ເສຍຫາຍກັບການຍ້ອມສີແດງ. ການຕີຄວາມນັ້ນຕ້ອງໄດ້ຮັບການຢືນຢັນສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້.
ການສຶກສາປີ 2019 ໂດຍ Rosenberg ແລະ ຄະນະ ສະແດງບັນຫານີ້ໃຫ້ເຫັນ. ໃນ biofilms ຂອງ E. coli ອາຍຸ 24-hour ເທິງແກ້ວໃນ phosphate-buffered saline, ປະມານ 96% ຂອງເຊວປາກົດວ່າເປັນ propidium-iodide-positive ໃນຕຳແໜ່ງເດີມ. ແຕ່ຜູ້ຂຽນປະເມີນວ່າ 82% ຍັງສາມາດເພາະລ້ຽງໄດ້ຫຼັງຈາກເກັບຕົວຢ່າງ. ພາບ confocal ສະແດງເຊວທີ່ມີພາຍໃນເປັນສີຂຽວຢູ່ໃຕ້ວັດຖຸທີ່ຖືກຍ້ອມສີແດງ, ຊຶ່ງຊີ້ໄປທີ່ກົດນິວຄລີອິກນອກເຊວເປັນສາເຫດຂອງສັນຍານທີ່ເຮັດໃຫ້ຕີຄວາມຜິດ.
ເປີເຊັນເຫຼົ່ານັ້ນອະທິບາຍການວັດຄົນລະແບບໃນຕົວຢ່າງຂອງການສຶກສາ, ບໍ່ແມ່ນຄ່າແກ້ໄຂສາກົນ. ບົດຮຽນທີ່ນຳໃຊ້ໄດ້ແມ່ນໃຫ້ກວດສອບວ່າສິ່ງໃດສ້າງສັນຍານ. ໃນ biofilm, ສານຍ້ອມສີກົດນິວຄລີອິກສາມາດກວດພົບວັດຖຸນອກເຊວ ພ້ອມກັບວັດຖຸພາຍໃນເຊວທີ່ເສຍຫາຍ. ສຳລັບຂໍ້ສະຫຼຸບກ່ຽວກັບຄວາມມີຊີວິດ, ນັກວິຈັຍແນະນຳການວັດເສີມ ເຊັ່ນ ການເພາະລ້ຽງ ຫຼື ກິດຈະກຳທາງເມຕາບອລິກ, ພ້ອມທັງຍອມຮັບວ່າແຕ່ລະວິທີມີຂໍ້ຈຳກັດ.
ກວດສອບວ່າທາງເລືອກນັ້ນມີຫຍັງຢູ່ແທ້
ວິທີຍ້ອມສີທາງເລືອກອາດຍັງມີເມທີລີນບລູຢູ່. Giemsa ເປັນຕົວຢ່າງ: Merck ອະທິບາຍຜະລິດຕະພັນຂອງຕົນວ່າເປັນ ສານລະລາຍ azure-eosin-methylene-blue, ມີຈຸດປະສົງໃຊ້ງານລວມເຖິງສະເມຍເລືອດ ແລະ ໄຂກະດູກ. ມັນອາດເປັນວິທີທີ່ແຕກຕ່າງສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ແຕກຕ່າງ, ແຕ່ບໍ່ຕອບສະໜອງຂໍ້ກຳນົດໃນການຕັດເມທີລີນບລູອອກ.
ຖ້າການຕັດສານປະກອບໜຶ່ງອອກເປັນສ່ວນໜຶ່ງຂອງການທົດລອງ, ໃຫ້ກວດສອບຕົວຕົນຂອງສານເຄມີ ແລະ ສູດປະສົມກ່ອນປຽບທຽບພາບ. ຄູ່ມືກ່ຽວກັບ methyl blue, methylene blue ແລະ ສານຍ້ອມສີທີ່ມີຊື່ຄ້າຍກັນ ອະທິບາຍຄວາມແຕກຕ່າງດ້ານການຕັ້ງຊື່.
ຢືນຢັນການທົດແທນກ່ອນນຳຜົນໄປໃຊ້
ສຳລັບວິທີໃໝ່, ໃຫ້ເຮັດການປຽບທຽບຂະໜາດນ້ອຍໂດຍໃຊ້ຕົວຢ່າງທີ່ເປັນຕົວແທນ ແລະ ຕົວຄວບຄຸມທີ່ເໝາະສົມ. ຮັກສາການຕັ້ງຄ່າກ້ອງຈຸລະທັດໃຫ້ສາມາດປຽບທຽບກັນໄດ້ເມື່ອເປັນໄປໄດ້. ບັນທຶກສູດປະສົມຂອງສານເຄມີ, ການກຽມຕົວຢ່າງ, ການສຳຜັດ ແລະ ເງື່ອນໄຂການຖ່າຍພາບ ເພື່ອໃຫ້ພາບທີ່ເບິ່ງດີກວ່າສາມາດຖືກກວດສອບໄດ້ ແທນທີ່ຈະພຽງແຕ່ຖືກເລືອກເພາະເບິ່ງດີກວ່າ.
ປະເມີນຄວາມສຳເລັດໂດຍອີງຕາມຄຳຖາມເດີມ. ສຳລັບຮູບຮ່າງ, ປະເມີນວ່າຂອບເຊວ ແລະ ການຈັດຮຽງຍັງສາມາດຕີຄວາມໄດ້ຫຼືບໍ່. ສຳລັບການຕິດສະຫຼາກນິວເຄຼຍ, ປະເມີນຕຳແໜ່ງສັນຍານ ແລະ ພື້ນຫຼັງ. ສຳລັບຄວາມມີຊີວິດ, ຕ້ອງມີຫຼັກຖານຫຼາຍກວ່າການແຍກສີທີ່ເບິ່ງດີ. ຄູ່ມືທີ່ກວ້າງກວ່າກ່ຽວກັບ ການຍ້ອມເມທີລີນບລູ ແລະ ການນຳໃຊ້ໃນຫ້ອງປະຕິບັດການ ອະທິບາຍວ່າການສັງເກດ ແລະ ການກຽມຕົວຢ່າງສອດຄ່ອງກັນແນວໃດ.
ເລືອກທາງເລືອກທີ່ຮັກສາການວັດທີ່ທ່ານຕ້ອງການ. ສີເປັນພຽງໜຶ່ງໃນຄຸນສົມບັດຂອງພາບທີ່ໄດ້.