Метилен көгү жана чачыранды склероз: жаныбарлардагы изилдөөлөр эмнени текшерген

Чачыранды склероздо метилен көгүн колдонуу тууралуу издесеңиз, бир эле суроого жооп бергендей көрүнгөн макалаларды табасыз. Бирок алар андай эмес. Бир макалада ооруган чычкандарга метилен көгү дарылоо катары берилген. Экинчисинде бир да жаныбар аны менен дарыланган эмес. Анда метилен көгү жүлүндүн жука кесиндилерин көк түскө боёо үчүн колдонулган, ошондо патолог микроскоп аркылуу миелинди көрө алган.

Бүт макаланын негизги түшүнүгү ушунда. Бул боёктун биологияда эки ролу бар, алардын ортосунда бир бөтөлкөдөн башка жалпы нерсе жок. Дарыга талапкер катары ал тирүү жаныбарга белгилүү дозада берилет жана оору өзгөрөбү деген суроо текшерилет. Боёк катары ал эксперименттен кийин өлүк, фиксацияланган тканга колдонулат жана ткань кандай көрүнгөнү изилденет. Бул айырманы байкабасаңыз, патологиялык изилдөөнүн ыкмалар бөлүмүн дарылоонун натыйжасы катары кабыл алып каласыз.

EAE деген эмне: жөнөкөй түшүндүрмө

Эксперименттик аутоиммундук энцефаломиелит, адатта EAE деп кыскартылат, чачыранды склероздун айрым жактарын изилдөө үчүн колдонулган стандарттуу жаныбар модели. Изилдөөчү ооруга сезимтал чычканды миелин белогунун фрагменти жана күчтүү адъювант менен иммунизациялайт. Андан кийин иммундук система жаныбардын өзүнүн борбордук нерв системасына кол салат. Чычканда төмөндөн жогору карай тараган алсыздык пайда болот. Аны куйруктун шалбырашынан арткы буттардын шал болушуна чейин 0дөн 5ке чейинки шкала боюнча баалоо оңой.

Баалоонун ушундай ыңгайлуулугу EAE эмне үчүн кеңири колдонуларын да, эмне үчүн жаңылыш түшүнүк жаратарын да түшүндүрөт. Адамдагы чачыранды склероз өзүнөн өзү пайда болот, иммундук чабуулдун кеңири жана азыраак такталган буталарын камтыйт. Ал кайталануучу же бара-бара күчөгөн жүрүштө көрүү, сезүү, таанып-билүү, мээченин иштеши жана кыймыл менен байланышкан белгилерди жаратат. EAE көзөмөлдөнгөн шарттарда сезгенүү, демиелинизация жана аксон жабыркашы сыяктуу айрым механизмдерди кайра жаратат. Ал чачыранды склероздун кичирейтилген көчүрмөсү эмес. Жалпы түшүнүк алгысы келген окурмандар кайсы бир оору тууралуу ырастоону баалоодон мурда метилен көгү клеткалык деңгээлде кандай таасир этет деп эсептелерин карап чыкса болот.

Төмөндөгү эки изилдөөдө EAE үчүн ар башка антигендер колдонулган, бул маанилүү. Дарылоо изилдөөсүндө оору миелин олигодендроцит гликопротеининин кыска пептиди болгон MOG35-55 менен шартталган. Патология изилдөөсүндө оору миелиндин негизги белогунун жана протеолипид белогунун бөлүктөрүнөн бириктирилген MP4 менен шартталган. Чычкандын линиясы менен антигенди тандоо жабыркоо очокторунун кайда пайда болорун жана сезгенүүнүн кандай жүрөрүн өзгөртөт. Демек, бул эки изилдөө бир эксперименттин эки жолу кайталанышы эмес.

Багыт картасы: моделден суроого жана чектерге чейин

Бул таблицаны ачык кармаңыз. Ал ушул макаланын негизги маалымдама таблицасы. Ар бир сап модель кайсы клиникалык суроого жооп бере аларын, чындыгында эмне өлчөнгөнүн жана натыйжаларды адамдарга колдонуу кайсы жерден чектелерин көрсөтөт.

Кийинки баш аталыштагы ырастоону текшерген ар бир адам клиникага чейинки изилдөөлөрдү кантип окуу керек деген материалдын жардамы менен ушул эле тилкелерди колдоно алат: жаныбардын түрүн жана антигенди, кошулманын ролун, баалоо көрсөткүчтөрүн, ошондой эле натыйжа оорунун жүрүшүнбү же ткандын белгилүү бир учурдагы көрүнүшүнбү чагылдырарын сураңыз.

Дарылоонун натыйжасы: белгилүү дозада берүү эмнени өзгөрткөн

Journal of Neuroimmunology журналындагы 2016-жылкы дарылоо изилдөөсүндө болжол менен 8ден 10 жумага чейинки ургаачы C57BL/6 чычкандары колдонулган. Ар бир чычкан 250 микрограмм MOG35-55 менен иммунизацияланган. Оору шартталгандан кийин EAE бар жаныбарлар кокус бөлүштүрүү жолу менен метилен көгү берилген топко же дарыланбаган EAE тобуна бөлүнүп, клиникалык упайлар болжол менен 30-күнгө чейин көзөмөлдөнгөн.

15-күндөн 30-күнгө чейин дарыланган чычкандардын клиникалык упайлары EAE контролдук тобуна караганда статистикалык жактан кыйла төмөн болгон, P 0.01ден аз болгон. Жүлүндүн анализи да ушундай багытты көрсөткөн: дарыланган жаныбарларда сезгенүүчү инфильтрация, демиелинизация жана аксондордун жоголушу азыраак болгон.

Изилдөөнүн өзгөчө жагы сигналдык көрсөткүчтөрдүн топтому болгон. Дарылоо AMPK активдешүүсүн жана SIRT1 экспрессиясын күчөтүп, сезгенүүнү жөнгө салуучу негизги механизмдердин бири болгон NF-kB активдешүүсүн басаңдаткан. Адаптивдүү иммунитет жагынан ал Th17 жообун азайтып, Treg жообун күчөткөн. Демек, сунушталган байланыш чынжыры мындай: метилен көгү AMPK жана SIRT1ге таасир этет, андан NF-kB сигналдары төмөндөйт, сезгенүүгө түрткү берген Th17ден жөнгө салуучу Treg тарапка жылыш болот, ткандын жабыркашы жеңилдеп, клиникалык упайлар төмөндөйт.

Бул чынжыр — далилденген себептик ырааттуулук эмес, чечмелөө. Изилдөө дарынын колдонулушу, сигналдардын өзгөрүшү жана оорунун жеңилдеши чогуу жүргөнүн көрсөтөт. Ал бардык оң натыйжаны AMPK жана SIRT1 камсыз кылганын далилдебейт. Ошондой эле жалпыга жеткиликтүү индекстелген текстте килограммга эсептелген так миллиграмм дозасы, берүү жолу, башталган күнү же узактыгы аннотациянын өзүнөн эле схеманы кайра түзүүгө жетишерлик так берилген эмес. Сатуу барагында ушул макалага байланыштуу көрсөтүлгөн кандай гана доза болбосун, толук тексттин ыкмалар бөлүмүнө шилтеме берилбесе, аны текшерилбеген деп эсептеңиз. Бул алгачкы иммундук сигнал кийин клиникалык маалыматтар менен ырасталган-ырасталбаганын текшерүү үчүн метилен көгү боюнча адамдардагы кеңири далилдер базасына кайрылуу керек.

Патологиянын натыйжасы: алты айдагы ткань эмнени көрсөткөн

PLoS ONE журналындагы 2015-жылкы MP4 изилдөөсүндө ургаачы C57BL/6 чычкандары толук Фрейнд адъювантындагы 200 микрограмм MP4 менен иммунизацияланган. Иммунизация күнү жана андан 48 саат өткөндө көк жөтөл токсини да берилген. Бир да жаныбар метилен көгүн дары катары алган эмес. Фиксациялоодон жана куюп бекитүүдөн кийин жүлүндүн калыңдыгы бир микрометр болгон туурасынан кесиндилери жарык микроскопиясы үчүн метилен көгү менен боёлгон. Майда түзүлүштөрдү көрүү үчүн вентролатералдык жол электрондук микроскоп менен изилденген.

Ткань үлгүлөрү үч этапта алынган: курч чокусунда 7 чычкандан, оору башталгандан үч ай өткөндө 5 чычкандан жана алты ай өткөндө 10 чычкандан. Бул этаптардагы орточо клиникалык упайлар дээрлик бирдей көрүнгөн: 0дөн 5ке чейинки шкалада болжол менен 1.7ден 1.8ге чейин. Бирок ткань башкача көрүнүштү көрсөткөн. Миелиндин өзүнчө жабыркашы курч чокусунда бир чарчы миллиметрге болжол менен 569,000 буладан алты айда болжол менен 1,496,000ге чейин өскөн. Курч жана узак мөөнөттүү этаптарды салыштырууда айырма статистикалык жактан маанилүү болуп, P 0.027ге барабар болгон. Миелин менен аксондун биргелешкен жабыркашы алты айга карата болжол менен эки эсе көбөйгөн. Кайра миелин кабыгы түзүлүп жаткан булалар бардык этаптарда бир пайыздан төмөн бойдон калган. Бул калыбына келүүгө байланыштуу үмүттөрдү этият баалоого түрткү берген жагдай.

Аксон жабыркашы U сымал өзгөргөн: курч чокусунда жогору, үч айда төмөнүрөөк, ал эми алты айда эң жогору болгон. Ал митохондриялардын шишиши жана нейрофиламенттердин ортосундагы аралыктын кыскарышы менен байланышкан. Баалоочуларга клиникалык упайлар жана этаптар тууралуу маалымат берилген эмес. Бул клиникалык упайлар уланып жаткан түзүмдүк жабыркоону толук чагылдырган эмес деген чечмелөөнү бекемдейт.

Ушул дал келбестик — чачыранды склероз тууралуу окуган адам үчүн изилдөөнүн чыныгы салымы. Майыптык деңгээлин көрсөткөн упайдын туруктуу болушу ткандын да туруктуу экенин билдирген эмес. Ошондой эле бул макала эмне үчүн метилен көгү менен чачыранды склерозду дарылоо тууралуу кандайдыр бир ырастоону колдой албасын көрсөтөт. Анда дарылоо эмес, убакыттын таасири текшерилген.

Эмне үчүн эки изилдөө тең бейтаптардагы пайдасын далилдебейт

Ар бир макала тар суроого жакшы жооп берет, бирок бейтаптарга байланыштуу суроого таптакыр жооп бербейт деп караңыз.

Биринчиден, себептери башка. EAE атайын, белгилүү антиген жана адъювант менен шартталат. Адамдагы чачыранды склероз өзүнөн өзү өнүгөт жана T клеткаларын, B клеткаларын, тубаса иммунитетти, нерв системасындагы глия клеткаларын камтыган кеңири иммундук механизмдер менен байланышат. Чычкандагы MOGго багытталган жоопту өзгөрткөн кошулма адамдагы ошол кеңири жоопту сөзсүз өзгөртөт дегенди билдирбейт.

Экинчиден, фенотиптери башка. Чычкандын куйругунан арткы буттарына карай тараган алсыздык — ыңгайлуу баалоо көрсөткүчү. Ал адамдагы чачыранды склероздун ар түрдүүлүгүн кыймылга байланыштуу бир санга кыскартат. Дарылар көп учурда EAEнин кыска мөөнөттүү упайларын өзгөртүп, бирок адамдардагы оорунун жүрүшүн өзгөртпөйт. Ошондуктан EAE кичирейтилген клиника эмес, алдын ала тандоо жана механизмдерди изилдөө куралы болуп саналат.

Үчүнчүдөн, дарынын таасирге жетиши жана колдонуу убактысы тактала элек. Чычкандардагы 30 күндүк экспериментте дарылоону эрте баштап, үзгүлтүксүз берүү — оорусу калыптанган адамдын дарыны узак убакыт ооз аркылуу колдонушу менен бирдей эмес. Эки изилдөөнүн эч биринде нерв системасындагы дарынын деңгээли өлчөнгөн эмес. Мындай байланышсыз лабораториялык табакчадагы концентрациядан же чычканга берилген дозадан адам үчүн колдонуу схемасына өтүүгө негиз жок.

Төртүнчүдөн, бул эки макала бири-бирин кайталабайт. Антигендери, суроолору жана баалоо көрсөткүчтөрү башка, ал эми биринде таптакыр дарылоо болгон эмес. Аларды чачыранды склерозду дарылоонун эки оң натыйжалуу изилдөөсү катары бирге келтирүү — ар башка категорияларды чаташтыруу.

Далилдерди таразалап жаткан окурмандар үчүн бул эмнени билдирет

Бул макалаларда чачыранды склероз үчүн метилен көгүн колдонуунун тастыкталган протоколу жок. Дарылоо изилдөөсү MOG EAEде AMPK, SIRT1, NF-kB жана Th17 менен Treg ортосундагы тең салмакты андан ары изилдөөгө негиз берет. Патология изилдөөсү упайлар өзгөрбөгөндөй көрүнсө да ткандын жабыркашы күчөй берерин, ошондой эле ыкмалар бөлүмүндөгү метилен көгү кээде дарыны эмес, боёк салынган идишти билдирерин эске салат. Чачыранды склероз боюнча уланып жаткан изилдөөлөрдү көзөмөлдөгөн окурмандар боёк менен дарынын ушул айырмасын эстен чыгарбашы керек. Лабораториялык изилдөөлөр тууралуу баш аталыштарга таянып аракеттенүүдөн мурда, канга байланышкан тобокелдиктерди жана өз ара таасирлерди кошо алганда, коопсуздук маселелерин метилен көгүнүн коопсуздугу боюнча жалпы маалыматтар менен бирге клиницист менен талкуулоо керек.

Негизги жыйынтыкты бир сүйлөм менен айтууга болот. Шилтеме берилген бир изилдөөдө MOG EAE бар чычкандарга метилен көгү белгилүү дозада берилип, сезгенүүгө каршы багыттагы иммундук өзгөрүү менен коштолгон оорунун жеңилдеши билдирилген; экинчи изилдөөдө эч кандай дарылоо берилбестен, метилен көгү жүлүндү боёо үчүн гана колдонулуп, алты ай бою топтолгон миелин жана аксон жабыркашы документтештирилген, ошондуктан бул эки изилдөө метилен көгү адамдагы чачыранды склерозго жардам берерин далилдебейт.