Метилен көгімен бояу: микроскопия әдістері және нақты суреттер атласы

Метилен көгімен бояу жарық өрісті микроскопияда көмескі көрінетін жасушалық белгілерді ажыратуды жеңілдетеді. Ол оқушыларға ұрт жасушасының ядросын табуға немесе микроорганизмдердің пішіні мен орналасуын зерттеуге көмектесе алады. Алайда көк түсті нысан — тек бақылау нәтижесі. Организмнің атауын анықтау, оны өлшеу және оның ауруды білдіретін-білдірмейтінін шешу — бөлек міндеттер.

Мұқаба контраст қағидасын көрсетеді. Төмендегі атласта тәуелсіз түрде құжатталған үлгілердің нақты фотосуреттері бастапқы дереккөз мәліметтерімен бірге берілген.

Метилен көгі нені айқындайды?

Метилен көгі — негіздік бояғыш: оның түсті ионы оң зарядталған. OpenStax үлгілерді бояу туралы бөлімінде түсіндіргендей, негіздік бояғыштар теріс зарядталған жасушалық материалмен әрекеттесіп, жасушаларды ашық фонда айқын көрсете алады. Тиісті препараттарда метилен көгі нуклеин қышқылдарына бай аймақтарды және бояғышты байланыстыратын басқа құрылымдарды айқындайды.

Қарапайым бояуда контрастты бір бояғыш қамтамасыз етеді. Сондықтан әртүрлі организмдер бір организм болмаса да, көк болып көрінуі мүмкін. Алғашқы пайдалы сұрақтар сипаттамалық болады: нысандар дөңгелек пе, әлде созылыңқы ма, жеке орналасқан ба, әлде шоғырланған ба, біркелкі боялған ба, әлде ішкі бөліктері ажыратыла ма? Түсті жіктеу нәтижесі ретінде түсіндірмес бұрын, қарапайым бояу мен Грам әдісімен бояудың айырмашылығын қараңыз.

Контраст пен ажырату қабілеті — екі бөлек нәрсе. Контраст нысанды айналасынан ажыратуға көмектеседі; ажырату қабілеті бір-біріне жақын бөлшектерді бөлек көрсетеді. Суреттің күңгірт болуы көбірек құрылым ажыратылатынына кепілдік бермейді. Әрбір күңгірт түйіршікті де органелла деп атауға болмайды.

Нативті препараттар, боялған ылғалды препараттар және жағындылар

Боялмаған, яғни нативті, ылғалды препарат үлгіні бояғыш қоспай көруге мүмкіндік береді, дегенмен бастапқы ортасынан алып шығудың өзі үлгіні өзгертеді. Боялған ылғалды препаратта материал жабын әйнегінің астындағы сұйықтықта тұрғанда реагент қосылады. Бекітілген жағындыда материал заттық әйнекке жайылып, кейінгі өңдеуге дейін белгіленген бекіту әдісі қолданылады. OpenStax-тың препарат дайындауға шолуы ылғалды препараттар мен бекітуді ажыратып, бекітілген организмдерден қалыпты қозғалыс немесе зат алмасу көрінісін енді бақылау мүмкін еместігінің себебін түсіндіреді.

Бұл препараттар әртүрлі сұрақтарға жауап береді:

Сабақтағы салыстыру үшін оқыту хаттамасына сәйкес бөлек дайындалып, боялған препаратты зерттемес бұрын боялмаған препаратты тіркеп алыңыз. Жарықтандыру мен сурет түсіру параметрлерін салыстыруға келетіндей ұстаңыз. Егер екі түрлі жасуша суретке түсірілсе, оларды бір жасушаның бояуға дейінгі және кейінгі жазбасы емес, мысалдар ретінде сипаттаңыз.

Микроскопия атласы: нақты боялған үш үлгі

Бұл атлас — ашық лицензиямен жарияланған үш микрофотосуреттің авторлық іріктемесі мен түсіндірмесі. Дереккөз авторлары үлгілер мен бояғыштарды атайды. Біз олардың үлгілерінің түпнұсқалығын тәуелсіз түрде растаған жоқпыз. Суреттер қиылмай, қосымша белгілер енгізілмей және түстері өзгертілмей, сапаны жоғалтпай WebP пішіміне түрлендіріліп берілген.

1-сурет: адамның ұрт жасушалары

Үлгі: адамның ұрт жасушалары. Бояғыш: метилен көгі. Ұлғайту: 400×, фотографтың мәліметі бойынша. Масштаб сызығы: жоқ; дереккөзде калибрленген пиксель өлшемі берілмеген. Fritzmann2002 түсірген фотосурет, 2017, Адамның ұрт жасушалары (метилен көгімен бояу) дереккөзінен, CC BY-SA 4.0 лицензиясымен жарияланған. Бұл көшірме сол лицензияны сақтайды.

Жеке тұрған жасушадан бастаңыз: оның күңгірттеу ядросын айналасындағы көк цитоплазмадан ажырату оңайырақ. Содан кейін оның астындағы қабаттасқан жасушаларды қараңыз. Қабаттасу шекараны бақылауды қиындатып, белгілі бір жерде күңгірттеу аймақ түзуі мүмкін. Бұл суретті әрбір күңгірт дақты ядро деп санау үшін емес, контурларды қадағалауды үйрену үшін пайдаланыңыз. Ұрт жасушаларын бақылау нұсқаулығында осы үлгіге арналған жаттығу егжей-тегжейлі берілген.

2-сурет: пияз жасушалары

Үлгі: дереккөзде пияз жасушалары деп көрсетілген. Бояғыш: метилен көгі. Ұлғайту: бастапқы файл атауында “200x” көрсетілген; бұл тәуелсіз түрде расталмаған. Масштаб сызығы: жоқ; калибрлеу деректері берілмеген. Alvy16 түсірген фотосурет, 2019, Пияз жасушасы 200x дереккөзінен, CC BY 4.0 лицензиясымен жарияланған.

Созылыңқы бөлімдер реттелген қабат түзеді. Олардың ұзын ортақ шекараларын 1-суреттегі біркелкі емес контурлармен салыстырыңыз. Сондай-ақ көзге түсетін күңгірт материал мен көру өрісінің біркелкі емес жарықтығына назар аударыңыз. Фотосурет әрбір күңгірт шөгіндінің не екенін анықтамайды. Ол пайдалы бақылау жазбасында түс алғанның бәріне атау берудің орнына артефактілер мен белгісіздікті де көрсету керектігін аңғартады.

3-сурет: дереккөзде Candida spp. деп анықталған ашытқы

Үлгі: фотографтың мәліметі бойынша Candida spp. Бояу: метилен көгімен қарапайым позитивті бояу. Ұлғайту: мәлімет жоқ. Масштаб сызығы: жоқ; калибрленген пиксель өлшемі берілмеген. Wikimedia пайдаланушысы Martunia.g, Marta түсірген фотосурет, 2021, Метилен көгімен позитивті бояу 2 дереккөзінен, CC BY 4.0 лицензиясымен жарияланған.

Тығыз көк шоғырларды нысандар сирегірек орналасқан шеткі аймақтармен салыстырыңыз. Нысандар азырақ қабаттасқан жерлерде жеке контурларды қадағалау оңайырақ. Candida атауы осы фотосурет бойынша жүргізілген түрді анықтау нәтижесінен емес, дереккөз жазбасынан алынған. Бұл сурет өміршеңдік туралы нәтиже де бермейді. Ашытқының өміршеңдігі мен тыныс алуын бағалау сынақтары өзіне тән жағдайларды, бақылау үлгілерін және түсіндіруді қажет етеді.

Масштабты дұрыс түсіну

Бұл суреттер визуалды салыстыруға арналған, бірақ микрометрмен өлшеуге немесе суреттер арасындағы жасушалардың абсолютті өлшемін салыстыруға арналмаған. Көрсетілген ұлғайту камераның жетіспейтін калибрлеу деректерін қалпына келтірмейді. Суреттің экрандағы өлшемін өзгерту оның көрінетін ұлғаюын өзгертеді.

Өз суреттеріңіз үшін белгілі эталон мен тиісті оптикалық конфигурацияны пайдаланып, өлшеу калибрлеуін жүргізіңіз. Nikon-ның микрометрия нұсқаулығы заттық микрометрдің суреттегі немесе өлшеу торындағы шартты бөліктерді нақты ұзындықтарға қалай айналдыратынын түсіндіреді. Объективті, камера конфигурациясын және калибрлеуді жазып алып, сол деректер негізінде масштаб сызығын қосыңыз. Масштаб сызығын оқулықтағы жасушаның орташа өлшеміне сүйеніп шығармаңыз.

Құтыдағы құрам әдіске сай келе ме?

Метилен көгі деп таңбаланған құты толық зертханалық сипаттама емес. Оның концентрациясы мен өлшем бірліктерін, еріткішін, қосымша ингредиенттерін, қолданылу мақсатын, партия құжаттарын және нұсқауларын тексеріңіз. Реагенттің қауіпсіздік паспорты қауіптерді сипаттайды; әдіс нұсқаулары оны көзделген препарат үшін қалай қолдану керектігін белгілейді.

Нақты мысал — Merck компаниясының Лёффлер метилен көгі ерітіндісі. Өндіруші оны микроскопия реагенті ретінде көрсетіп, қышқылға төзімділікті анықтайтын бояудағы қосымша бояғыш рөлін сипаттайды. Оның құжатта көрсетілген тұтанғыштығы да жұмыс істеу немесе қыздыруды жоспарлау үшін “көк сұйықтық” деген ақпараттың жеткіліксіз екенін көрсетеді. Бұл қасиеттер нақты осы құрамға қатысты және метилен көгінің барлық су ерітінділеріне автоматты түрде қолданылмайды.

Сол сияқты, эозин-метилен көгі агары — құрамы арнайы әзірленген қоректік орта. Ол үлгіге жай метилен көгін қосу арқылы жасалатын заттық әйнекке арналған бояғыш емес. Бейнелеудің басқа мақсаты үшін микроскопияда метилен көгіне балама бояғыштарды салыстырыңыз.

Бастауыштарға арналған микроскоп жиынтығымен жұмыс істегенде оның құжатталған оқу әдісінен, белгілі дайын препараттардан және көрсетілген реагенттен бастаңыз. Егер құтының заттаңбасы жоғалса немесе құрамын анықтау мүмкін болмаса, оны тиісті құжатталған реагентпен ауыстырыңыз. Көзді қорғайтын құрал қолданыңыз және нақты құрамға берілген жұмыс істеу нұсқауларын орындаңыз. Адамнан алынған материал мен қоршаған ортадан алынған белгісіз үлгілер оқу зертханасының үлгілермен жұмыс істеу және оларды жою рәсімдерін талап етеді; бояу бұл рәсімдерді алмастырмайды.

Қорытындыдан бұрын бақылауды жазыңыз

“Шоғырланған көк сопақ нысандар” — суреттің негізді сипаттамасы. “Белгілі бір инфекция” деген тұжырым сурет бермеген дәлелдерді қажет етеді. Дәптерде үлгінің шығу тегін, дайындау тәсілін, бояу реакциясын және анықтау әдісін бөлек жазыңыз. Бұл айырмашылық сабақтағы қарапайым суретті пайдалы етеді және тартымды микрофотосуретке өзі растай алмайтын тұжырымды телуге жол бермейді.