Metilen biru baru dan pewarnaan retikulosit: pewarna terpisah dan metode sel hidup

Seorang mahasiswa menyiapkan penghitungan retikulosit, memesan metilen biru, mencampurnya dengan darah, dan hampir tidak melihat apa pun. Seorang teman sekelas menggunakan botol berlabel metilen biru baru dan mendapatkan filamen biru yang jelas di dalam sebagian kecil sel darah merah. Mahasiswa pertama menganggap botol kedua lebih baru atau lebih pekat. Keduanya salah. Botol tersebut berisi molekul yang berbeda.

Inilah kesalahan konsep yang menjadi penyebab sebagian besar kebingungan di bidang ini. Namanya menunjukkan bahwa metilen biru baru adalah batch metilen biru yang telah ditingkatkan. Kimia menyatakan sebaliknya. Metilen biru baru N adalah pewarna fenotiazin terpisah dengan nomor Colour Index tersendiri, pola substitusi tersendiri, dan peran standar tersendiri dalam hematologi. Setelah perbedaan ini jelas, bagian metode lainnya (mengapa sel harus hidup saat diwarnai, apa yang dihitung sebagai retikulosit, posisi badan Heinz, dan kapan brilliant cresyl blue digunakan) menjadi mudah dipahami.

Jawaban singkat

Metilen biru baru N, reagen hematologi, umumnya diidentifikasi sebagai Basic Blue 24 dalam catatan PubChem untuk metilen biru baru, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, formula C18H22ClN3S. Metilen biru biasa adalah methylthioninium chloride, Basic Blue 9, dalam catatan PubChem, C.I. 52015, CAS 61-73-4, formula C16H18ClN3S. Secara struktur, metilen biru baru memiliki dua gugus metil cincin dan rantai samping etilamino, sedangkan metilen biru memiliki gugus dimetilamino. Perbedaan tersebut mengubah perilaku pewarnaan. Teks hematologi menjelaskan bahwa metilen biru biasa merupakan pewarna retikulosit yang relatif buruk dan metilen biru baru memberikan pewarnaan yang lebih dalam dan seragam, perbandingan yang dirangkum dalam topik ScienceDirect tentang metilen biru baru.

Ya, metilen biru baru adalah pewarna supravital. Pewarnaan supravital berarti mewarnai sel hidup setelah dikeluarkan dari tubuh dan sebelum fiksasi, sebagaimana dijelaskan dalam ulasan NCBI tentang prinsip pewarnaan supravital. Metilen biru baru dan brilliant cresyl blue termasuk dalam kategori ini, dan standar retikulosit CLSI secara eksplisit mencakup metilen biru baru sebagai pewarna supravital. Mahasiswa sering mengelompokkan ini dengan pewarnaan Romanowsky pada apusan yang telah difiksasi. Model pemikiran tersebut tidak berlaku di sini. Lakukan fiksasi terlebih dahulu dan metode ini tidak akan berfungsi.

Bagi pembaca yang mengikuti nama pewarna terkait, methyl blue versus methylene blue membahas kebingungan berbeda dan lebih besar antara pewarna triarilmetana anionik dan keluarga fenotiazin kationik. laboratory staining overview menempatkan pekerjaan supravital di antara metode apusan terfiksasi, dan panduan morfologi sel darah menunjukkan posisi penilaian retikulosit dalam diagnosis banding yang lebih luas.