Մեթիլենային կապույտով ներկում․ մանրադիտակային մեթոդներ և իրական պատկերների ատլաս

Մեթիլենային կապույտով ներկումը լուսավոր դաշտի մանրադիտակման ժամանակ հեշտացնում է այլապես թույլ տեսանելի բջջային առանձնահատկությունների տարբերակումը։ Այն կարող է օգնել ուսանողներին գտնել այտի բջջի կորիզը կամ ուսումնասիրել միկրոօրգանիզմների ուրվագիծն ու դասավորությունը։ Սակայն կապույտ օբյեկտը դիտարկում է։ Օրգանիզմի անվանումը որոշելը, այն չափելը և որոշելը՝ արդյոք այն վկայում է հիվանդության մասին, առանձին խնդիրներ են։

Շապիկի պատկերը ցույց է տալիս հակադրության սկզբունքը։ Ստորև ներկայացված ատլասը պարունակում է անկախ փաստագրված նմուշների իրական լուսանկարներ՝ դրանց սկզբնական աղբյուրի տեղեկություններով։

Ի՞նչ է բացահայտում մեթիլենային կապույտը

Մեթիլենային կապույտը հիմնային ներկանյութ է․ դրա գունավոր իոնը դրական լիցք ունի։ Ինչպես OpenStax-ը բացատրում է նմուշների ներկմանը նվիրված իր բաժնում, հիմնային ներկանյութերը փոխազդում են բացասական լիցքավորված բջջային նյութի հետ և կարող են բջիջներն ավելի տեսանելի դարձնել բաց ֆոնի վրա։ Համապատասխան պատրաստուկներում մեթիլենային կապույտն ընդգծում է նուկլեինաթթուներով հարուստ հատվածներն ու ներկանյութը կապող այլ կառուցվածքները։

Պարզ ներկման դեպքում հակադրությունն ապահովում է մեկ ներկանյութ։ Հետևաբար տարբեր օրգանիզմներ կարող են կապույտ երևալ՝ առանց նույն օրգանիզմը լինելու։ Սկզբում օգտակար հարցերը նկարագրական են․ օբյեկտները կլո՞ր են, թե՞ երկարավուն, առանձի՞ն են, թե՞ խմբավորված, համաչա՞փ են ներկված, թե՞ ներսում տարբերակվող հատվածներ ունեն։ Նախքան գույնը որպես դասակարգման արդյունք մեկնաբանելը ծանոթացեք պարզ ներկման և Գրամի մեթոդով ներկման տարբերությանը։

Հակադրությունն ու լուծունակությունը տարբեր են։ Հակադրությունն օգնում է տարբերակել օբյեկտն իր շրջապատից, իսկ լուծունակությունը՝ միմյանց մոտ գտնվող մանրամասները։ Ավելի մուգ պատկերը չի երաշխավորում, որ ավելի շատ կառուցվածքներ են առանձին տարբերակելի։ Եվ ամեն մուգ հատիկ չէ, որ պետք է օրգանել անվանել։

Բնական պատրաստուկներ, ներկված թաց պատրաստուկներ և քսուքներ

Չներկված կամ բնական թաց պատրաստուկը պահպանում է տեսքը՝ առանց ներկանյութ ավելացնելու, թեև սկզբնական միջավայրից հեռացնելն արդեն փոխում է նմուշը։ Ներկված թաց պատրաստուկում ռեագենտ է ավելացվում, մինչ նյութը ծածկապակու տակ մնում է հեղուկի մեջ։ Ֆիքսված քսուք պատրաստելիս նյութը տարածվում է առարկայակիր ապակու վրա, և հետագա մշակմանն անցնելուց առաջ կիրառվում է սահմանված ֆիքսման մեթոդ։ OpenStax-ի՝ պատրաստման եղանակների ամփոփումը տարբերակում է թաց պատրաստուկներն ու ֆիքսումը և բացատրում, թե ինչու ֆիքսված օրգանիզմներն այլևս չեն ցուցադրում բնականոն շարժում կամ նյութափոխանակություն։

Այս պատրաստուկները տարբեր հարցերի են պատասխանում․

Դասարանում համեմատություն կատարելու համար նախ գրանցեք չներկված պատրաստուկի պատկերը, ապա ուսումնասիրեք առանձին ներկված պատրաստուկը, որը պատրաստվել է ուսումնական արձանագրության համաձայն։ Լուսավորման և պատկերի ստացման կարգավորումները պահեք համադրելի։ Եթե լուսանկարվում են երկու տարբեր բջիջներ, դրանք նկարագրեք որպես օրինակներ, ոչ թե որպես մեկ բջջի՝ ներկումից առաջ և հետո ստացված պատկերներ։

Մանրադիտակային ատլաս․ երեք իրական ներկված նմուշ

Այս ատլասը բաց արտոնագրերով հասանելի երեք մանրապատկերների ինքնուրույն ընտրություն և մեկնաբանություն է։ Աղբյուրների հեղինակները նշել են նմուշներն ու ներկանյութերը։ Մենք անկախ կերպով չենք հաստատել նրանց նմուշների ինքնությունը։ Պատկերները վերարտադրված են առանց կտրելու՝ անկորուստ WebP փոխարկմամբ, առանց ավելացված տարրերի կամ գունային փոփոխությունների։

Պատկեր 1․ մարդու այտի բջիջներ

Նմուշ՝ մարդու այտի բջիջներ։ Ներկանյութ՝ մեթիլենային կապույտ։ Խոշորացում՝ 400×՝ ըստ լուսանկարչի հաղորդած տվյալների։ Մասշտաբային գիծ՝ հասանելի չէ․ աղբյուրը չի տրամադրում կալիբրացված պիքսելի չափ։ Լուսանկարը՝ Fritzmann2002, 2017, աղբյուրը՝ Մարդու այտի բջիջներ (մեթիլենային կապույտով ներկում), արտոնագիրը՝ CC BY-SA 4.0։ Այս վերարտադրությունը պահպանում է նույն արտոնագիրը։

Սկսեք առանձին բջջից․ դրա ավելի մուգ կորիզն ավելի հեշտ է տարբերակել շրջապատող կապույտ ցիտոպլազմայից։ Այնուհետև ուսումնասիրեք դրա ներքևում գտնվող համընկնող բջիջները։ Համընկնումը դժվարացնում է սահմանի հետևելը և կարող է տեղային ավելի մուգ հատված ստեղծել։ Այս պատկերն օգտագործեք ուրվագծերին հետևելու հմտությունը զարգացնելու համար, ոչ թե ամեն մուգ բիծը կորիզ հաշվելու։ Այտի բջիջների դիտարկման ուղեցույցը մանրամասնում է այս նմուշին հատուկ վարժությունը։

Պատկեր 2․ սոխի բջիջներ

Նմուշ՝ սոխի բջիջներ՝ ըստ աղբյուրի նույնականացման։ Ներկանյութ՝ մեթիլենային կապույտ։ Խոշորացում՝ սկզբնական ֆայլի անվան մեջ նշված է «200x»․ այն անկախ կերպով հաստատված չէ։ Մասշտաբային գիծ՝ հասանելի չէ․ կալիբրման տվյալներ չեն տրամադրվել։ Լուսանկարը՝ Alvy16, 2019, աղբյուրը՝ Սոխի բջիջ՝ 200x, արտոնագիրը՝ CC BY 4.0։

Երկարավուն բաժանմունքները կանոնավոր շերտ են կազմում։ Համեմատեք դրանց երկար ընդհանուր սահմանները Պատկեր 1-ի անկանոն ուրվագծերի հետ։ Նկատեք նաև աչքի ընկնող մուգ նյութն ու տեսադաշտի անհավասար պայծառությունը։ Լուսանկարը չի հաստատում յուրաքանչյուր մուգ նստվածքի ինքնությունը։ Այն ցույց է տալիս, թե ինչու օգտակար դիտարկման գրառումը ներառում է արտեֆակտներն ու անորոշությունը՝ փոխարենը անվանում տալու ամեն ինչին, ինչը ներկվում է։

Պատկեր 3․ խմորասնկեր, որոնք աղբյուրը նույնականացրել է որպես Candida spp.

Նմուշ՝ Candida spp.՝ ըստ լուսանկարչի։ Ներկում՝ պարզ դրական ներկում մեթիլենային կապույտով։ Խոշորացում՝ հասանելի չէ։ Մասշտաբային գիծ՝ հասանելի չէ․ կալիբրացված պիքսելի չափ չի տրամադրվել։ Լուսանկարը՝ Marta, Wikimedia-ի Martunia.g օգտատեր, 2021, աղբյուրը՝ Դրական ներկում մեթիլենային կապույտով 2, արտոնագիրը՝ CC BY 4.0։

Համեմատեք խիտ կապույտ խմբերը պակաս խիտ եզրային հատվածների հետ։ Առանձին ուրվագծերին ավելի հեշտ է հետևել այնտեղ, որտեղ օբյեկտներն ավելի քիչ են համընկնում։ Candida անվանումը վերցված է աղբյուրի գրառումից, ոչ թե այս լուսանկարի հիման վրա կատարված տեսակային նույնականացումից։ Այս պատկերը նաև կենսունակության վերաբերյալ արդյունք չի տրամադրում։ Խմորասնկերի կենսունակության և շնչառության փորձարկումները պահանջում են իրենց հատուկ պայմանները, ստուգիչ նմուշներն ու մեկնաբանությունը։

Մասշտաբի ճիշտ ընթերցումը

Այս պատկերները նախատեսված են տեսողական համեմատության համար, ոչ թե միկրոմետրերով չափումների կամ պատկերների միջև բջիջների բացարձակ չափերի համեմատության։ Հաղորդված խոշորացումը չի վերականգնում տեսախցիկի բացակայող կալիբրման տվյալները։ Պատկերի ցուցադրման չափը փոխելիս փոխվում է նաև դրա տեսանելի խոշորացումը։

Ձեր սեփական պատկերների համար կատարեք չափման կալիբրում՝ օգտագործելով հայտնի չափանմուշ և համապատասխան օպտիկական համակարգը։ Nikon-ի միկրոմետրիայի ուղեցույցը բացատրում է, թե ինչպես է առարկայական միկրոմետրը պատկերի կամ չափիչ ցանցի պայմանական բաժանումները փոխակերպում ֆիզիկական երկարությունների։ Գրանցեք օբյեկտիվը, տեսախցիկի կազմաձևումն ու կալիբրման տվյալները և այդ տվյալների հիման վրա ավելացրեք մասշտաբային գիծ։ Մի հաշվարկեք այդ գիծը դասագրքում նշված բջջի միջին չափից։

Արդյո՞ք շշի պարունակությունը համապատասխանում է մեթոդին

Մեթիլենային կապույտ պիտակով շիշը լաբորատոր ամբողջական բնութագիր չէ։ Ստուգեք դրա կոնցենտրացիան և չափման միավորները, լուծիչը, լրացուցիչ բաղադրիչները, նախատեսված կիրառությունը, խմբաքանակի փաստաթղթերն ու հրահանգները։ Ռեագենտի անվտանգության տվյալների թերթիկը նկարագրում է վտանգները, իսկ մեթոդի հրահանգները սահմանում են, թե ինչպես այն օգտագործել նախատեսված պատրաստուկի համար։

Կոնկրետ օրինակ է Merck-ի Լյոֆլերի մեթիլենային կապույտի լուծույթը։ Արտադրողն այն բնութագրում է որպես մանրադիտակման ռեագենտ և նկարագրում դրա դերը որպես հակադրող ներկանյութ թթվակայունության ներկման մեթոդում։ Նշված դյուրավառությունը նաև ցույց է տալիս, թե ինչու «կապույտ հեղուկ» նկարագրությունը բավարար տեղեկություն չէ դրա հետ աշխատելը կամ այն տաքացնելը պլանավորելու համար։ Այդ հատկությունները վերաբերում են տվյալ բաղադրությանը, ոչ թե ինքնաբերաբար մեթիլենային կապույտի բոլոր ջրային լուծույթներին։

Նմանապես, էոզին-մեթիլենային կապույտ ագարը որոշակի բաղադրությամբ աճեցման միջավայր է։ Այն առարկայակիր ապակու համար նախատեսված ներկանյութ չէ, որը ստացվում է նմուշին պարզապես մեթիլենային կապույտ ավելացնելով։ Պատկերավորման այլ նպատակի համար համեմատեք մանրադիտակման մեջ մեթիլենային կապույտի այլընտրանքները։

Սկսնակների մանրադիտակի հավաքածու օգտագործելիս սկսեք դրա փաստագրված ուսումնական մեթոդից, հայտնի պատրաստի պատրաստուկներից և նշված ռեագենտից։ Եթե շիշը կորցրել է պիտակը կամ դրա բաղադրությունը հնարավոր չէ պարզել, այն փոխարինեք համապատասխան փաստագրված ռեագենտով։ Օգտագործեք աչքերի պաշտպանիչ միջոցներ և հետևեք հենց տվյալ բաղադրության համար տրամադրված՝ աշխատանքի հրահանգներին։ Մարդկային նյութն ու շրջակա միջավայրից վերցված անհայտ նմուշները պահանջում են հետևել ուսումնական լաբորատորիայի՝ նմուշների մշակման և հեռացման ընթացակարգերին․ ներկումը չի փոխարինում այդ ընթացակարգերին։

Դիտարկումը գրառեք եզրակացությունից առաջ

«Խմբավորված կապույտ օվալաձև օբյեկտներ» ձևակերպումը պատկերի հիմնավոր նկարագրություն է։ «Որոշակի վարակ» ձևակերպումը պահանջում է ապացույցներ, որոնք պատկերը չի տրամադրել։ Նոթատետրում առանձին գրանցեք նմուշի ծագումը, պատրաստման եղանակը, ներկման ռեակցիան և նույնականացման մեթոդը։ Այդ տարբերակումը դասարանում ստացված պարզ պատկերը դարձնում է օգտակար և կանխում է գրավիչ մանրապատկերին այնպիսի պնդում վերագրելը, որը այն չի կարող հիմնավորել։