Մեթիլենային կապույտը և աղիքների միկրոբիոմը․ ինչ է ցույց տալիս մկների ուսումնասիրությունը

Մեթիլենային կապույտը կարող է փոխել մկների կղանքում չափվող բակտերիալ կազմը։ Այս արդյունքը չի հաստատում, որ այն բարելավում է մարդու աղիքների առողջությունը, ընտրողաբար վերացնում վնասակար բակտերիաները կամ բուժում դիսբիոզը։ Էական տարբերությունը մանրէային համայնքը փոխելու և դրա կրող օրգանիզմի առողջությունը բարելավելու միջև է։

Այս հարցին առավել անմիջականորեն առնչվող մկների փորձը չափել է բակտերիալ ԴՆԹ-ն և լաբիրինթոսային առաջադրանքի կատարումը։ Այդ չափումները կարող են բացահայտել հետագա ուսումնասիրության արժանի օրինաչափություններ։ Սակայն դրանք ինքնին չեն կարող հաստատել, որ բակտերիալ փոփոխությունն առաջացրել է վարքային փոփոխություն, կամ որ դրանցից որևէ մեկը կանխատեսում է մարսողական ախտանիշների թեթևացում։

Ինչ են իրականում չափել հետազոտողները

Գուրեևի և գործընկերների 2020 թվականի փորձի ընթացքում երեք ամսական C57Bl/6 մկները չորս շաբաթ ստացել են մեթիլենային կապույտ՝ 15 mg/kg/day (ինը մուկ), 50 mg/kg/day (ութ մուկ), կամ վերահսկիչ խմբին տրվել է ջուր (13 մուկ)։ Փորձի նախագծման բաժնում հստակ նշված չեն դեղի ներմուծման ուղին կամ կենդանիների սեռը։

Կղանքի նմուշներ են վերցվել նախքան նյութի կիրառումը և այնուհետև ամեն շաբաթ։ Հետազոտողներն օգտագործել են բակտերիալ խմբերի qPCR և լրացուցիչ՝ 16S ԴՆԹ-ի ամպլիկոնային սեքվենավորում։ Վերջին հինգ օրերի ընթացքում մկներն անցել են հարմարվելու երկու օր, որին հաջորդել է պարգևատրմամբ T-աձև լաբիրինթոսի թեստավորման երեք օր՝ օրական տասը գնահատվող ընտրությամբ։

Սրանք մկների վրա փորձարարական ազդեցություններ են, ոչ թե մարդկանց համար դեղաչափի առաջարկություններ։ Ներմուծման ուղին կարևոր է հասկանալու համար, թե որքան դեղ է հասնում աղիքներ, և չնշված ուղին պետք է մնա չնշված։ Մարմնի քաշի հիման վրա վերահաշվարկը չի հաստատի մարդկանց համար անվտանգ կամ արդյունավետ կիրառման սխեմա։

Միկրոբիոմի ուսումնասիրության ապացույցների աղյուսակ

Այս՝ մեր կազմած աղյուսակը տարանջատում է հաղորդված դիտարկումները այն լրացուցիչ պնդումներից, որոնց ընթերցողը կարող է հանդիպել։ Բակտերիալ խմբերի անվանումները համապատասխանում են հոդվածում օգտագործված տերմինաբանությանը։

Աղյուսակը միտումնավոր բաժանված է ըստ չափված ցուցանիշների։ Մի տողում բարենպաստ պատասխանը չի կարող լրացնել մեկ այլ տողում բացակայող պատասխանը։ Օրինակ՝ լաբիրինթոսային առաջադրանքի ավելի լավ կատարումը չի լրացնում աղիքային բորբոքման մասին բացակայող ապացույցները։

Ինչու բակտերիաների տոկոսները չեն ցույց տալիս, թե ինչն է ոչնչացվել

Հարաբերական առատություն տերմինը նկարագրում է խմբի բաժինը չափված համայնքում։ Այն տարբերվում է կղանքի մեկ գրամում բակտերիալ բջիջների թվից։ Իրենց միկրոբիոմի քանակական նկարագրման ուսումնասիրությունում Վանդեպուտեն և գործընկերները ցույց են տվել, թե ինչու է մանրէային ընդհանուր քանակը կարևոր համայնքների տարբերությունները մեկնաբանելիս։

Դիտարկենք պատկերավոր նմուշ, որը պարունակում է A օրգանիզմի տասը միավոր և այլ օրգանիզմների 90 միավոր։ A-ին բաժին է ընկնում 10%-ը։ Եթե A-ն մնում է տասը, իսկ մյուսները նվազում են մինչև 40, ապա A-ին արդեն բաժին է ընկնում 20%-ը։ Նրա բաժինը կրկնապատկվել է՝ առանց բացարձակ քանակի որևէ աճի։ Այս թվաբանական օրինակը մեթիլենային կապույտի փորձի արդյունք չէ։

Նույն տարբերակումը սահմանափակում է բակտերիաների ոչնչացման մասին պնդումները։ ԴՆԹ-ի հիման վրա որոշված համամասնությունը կենսունակության ուղղակի թեստ չէ։ Կենսունակ բակտերիաների նվազումը հաստատելու համար փորձին անհրաժեշտ են չափումներ, որոնք գնահատում են կենսունակությունը և հաշվի են առնում ամբողջ պոպուլյացիան։ Գործառութային փոփոխությունը հաստատելու համար անհրաժեշտ է համապատասխան գործառութային չափում, օրինակ՝ չափված մետաբոլիտ, այլ ոչ թե միայն բակտերիաների անվանումների վրա հիմնված կանխատեսում։

Լայն անվանումները նաև թաքցնում են կենսաբանական բազմազանությունը։ Ամբողջ տիպը օգտակար կամ վնասակար համարելը անտեսում է որոշակի արդյունքի համար պատասխանատու օրգանիզմներն ու նրանց գործունեությունը։ Ուստի հարաբերակցության փոփոխությունն ինքնին դիսբիոզի ախտորոշում կամ դրա բուժված լինելու ապացույց չէ։

Արդյո՞ք միկրոբիոմը բացատրում էր լաբիրինթոսի արդյունքը

Փորձը դեղի ազդեցությունը, բակտերիալ կազմը և վարքը ներառել է նույն ուսումնասիրության մեջ։ Դա օգտակար է վարկած ձևակերպելու համար։ Մեր մեկնաբանությամբ՝ փորձի կառուցվածքը չի տարանջատում մի քանի հնարավոր բացատրություն՝ վարքի վրա դեղի ուղղակի ազդեցությունը, մանրէների անուղղակի ազդեցությունը կամ վարքի և բակտերիաների առանձին արձագանքները նույն ազդեցությանը։

Միջնորդավորումը ստուգող ավելի համոզիչ փորձը ենթադրվող մանրէային միջնորդը կփոխեր դեղից անկախ։ Հետազոտողները կարող են ստուգել՝ արդյոք սահմանված համայնքի փոխանցումը փոխանցում է նաև ազդեցությունը, կամ արդյոք ենթադրվող մանրէային ուղու վերացումը կանխում է այն։ Նման փորձերը նաև պահանջում են վերահսկիչ պայմաններ՝ հաշվի առնելու համար, թե ուրիշ ինչ է փոխանցվում կամ փոփոխվում։

Վարքային վերջնակետը պահանջում է նույնքան ուշադիր մեկնաբանություն։ Պարգևատրմամբ լաբիրինթոսը կենդանուց պահանջում է ընտրություններ կատարել որոշակի պայմաններում։ Գնահատման սկզբունքների համաձայն՝ առաջադրանքի կատարումը կարող է կախված լինել ուսումնասիրելու պատրաստակամությունից, շարժումից, պարգև ստանալու մոտիվացիայից և սովորելուց։ Արդյունքը «ավելի լավ ճանաչողական կարողություն» անվանելը միավորում և կորցնում է այս տարբերությունները։ Ուղղակիորեն չափված առաջադրանքի նկարագրությունը մնում է ավելի տեղեկատու։

Մեթիլենային կապույտը ոչնչացնո՞ւմ է աղիքային բակտերիաները

Մեթիլենային կապույտը կարող է մասնակցել հակամանրէային ակտիվությանը՝ սահմանված լաբորատոր պայմաններում։ Դա չի պարզաբանում, թե ինչ է տեղի ունենում ամբողջ աղիքային համայնքի հետ՝ նյութը բերանով ընդունելուց հետո։

Օրինակ՝ բակտերիաների ֆոտոդինամիկ ապաակտիվացման լաբորատոր ուսումնասիրությունը փորձարկել է E. coli-ն և S. aureus-ը՝ լուսազգայունացնող նյութերով և վերահսկվող լուսավորմամբ։ Այն գնահատել է գաղութների ձևավորումն ու թաղանթի վնասումը և ներառել համապատասխան՝ մթության պայմաններում վերահսկիչ փորձեր։ Միայն լույսը կամ միայն լուսազգայունացնող նյութը փորձարկված պայմաններում ազդեցություն չեն ունեցել։

Այդ վերահսկիչ փորձերը տվյալ փորձի շրջանակում պատասխանում են կարևոր պատճառահետևանքային հարցի՝ ի՞նչ ներդրում է ունեցել համակցությունը։ Նյութը կուլ տալը չի վերարտադրում բակտերիալ կախույթի լուսավորումը։ Մյուս կողմից, որոշակի խտության և տևողության դեպքում մթության վերահսկիչ փորձի բացասական արդյունքը չի ապացուցում, որ առանց լուսավորման ցանկացած ազդեցություն կենսաբանորեն ոչ ակտիվ է։ Հակամանրէային հետազոտությունների ակնարկը բացատրում է պայմաններից կախված այս տարբերությունները։

Աղիքային համայնքի ուսումնասիրությունը նաև չի կարող հաստատել որոշակի վարակի բուժումը։ Օրգանիզմի նույնականացումը և համապատասխան կլինիկական արդյունքի ցուցադրումն առանձին խնդիրներ են, այդ թվում՝ մակաբույծների բուժման մասին պնդումները գնահատելիս։

Ինչ է սա նշանակում մարդու աղիքների առողջության մասին պնդումների համար

Այս հոդվածի համար կատարված նպատակային գրականության որոնմամբ չի հայտնաբերվել մարդկանց աղիքային միկրոբիոմի վերահսկվող փորձարկում, որը հաստատի մեթիլենային կապույտի օգուտը աղիքների առողջության համար։ Սա հայտարարություն է հայտնաբերված ապացույցների մասին, ոչ թե ապացույց, որ համապատասխան ուսումնասիրություն գոյություն չունի։ Մարդկանց բերանի խոռոչում տեղային ֆոտոդինամիկ բուժման հետազոտությունն այլ հարց է․ օրինակ՝ բերանի տհաճ հոտի վերաբերյալ 45 մասնակցով փորձարկումը վերցրել է լեզվի փառի նմուշներ և չափել արտաշնչվող գազերը, ոչ թե աղիքների առողջությունը։

Մարդու աղիքների առողջության մասին պնդումը հիմնավորելու համար ուսումնասիրությունը պետք է ունենա սահմանված մասնակիցների խումբ, վերարտադրելի պատրաստուկ և ներմուծման ուղի, համապատասխան համեմատիչ և այդ խմբի համար կարևոր արդյունք։ Մանրէային կազմը կարող է օգնել բացատրել արդյունքը, սակայն ախտանիշների բարելավումը, հիվանդության վերահսկումը և անցանկալի ազդեցությունները դեռ պետք է գնահատվեն։

Մկների մեկ մոդելում չորս շաբաթը նույնպես չի կարող հաստատել ամիսներ կամ տարիներ տևող կիրառման հետևանքները։ Մեթիլենային կապույտի ամենօրյա և երկարաժամկետ ազդեցության ակնարկը տարանջատում է կիրառման տևողությունը դիտարկումից և անվտանգության վերջնակետերից։ Ավելի լայն կլինիկական համատեքստի համար ծանոթացեք, թե ինչ են հիմնավորում մարդկանց մասնակցությամբ հետազոտությունները։