मेथिलीन ब्लू और फैटी लिवर: प्रायोगिक अध्ययनों में क्या मिला

फैटी लिवर कई अलग-अलग समस्याओं के लिए इस्तेमाल होने वाला एक नाम है। एक व्यक्ति में इसकी वजह लंबे समय तक अत्यधिक शराब का सेवन हो सकता है। दूसरे में इसकी वजह इंसुलिन प्रतिरोध के साथ पोषक तत्वों की अधिक आपूर्ति और यकृत तक अतिरिक्त वसा का पहुँचना हो सकता है। सूक्ष्मदर्शी से दोनों स्थितियों में केवल वसा का संचय दिख सकता है, लेकिन उसे पैदा करने वाले शुरुआती कारण अलग होते हैं। यही अंतर तय करता है कि कोई प्रयोग क्या सिद्ध कर सकता है।

फैटी लिवर के संबंध में मेथिलीन ब्लू पर उपलब्ध शोध सीमित है और इस प्रश्न पर पूरी तरह पूर्वनैदानिक है। चूहों की दो प्रजातियों, रैट और माउस, पर किए गए तीन अध्ययनों का सबसे अधिक उल्लेख होता है, और उनके निष्कर्ष एक जैसे नहीं हैं। एथेनॉल दिए जाने वाले एक अध्ययन में रेडॉक्स बदलाव ठीक हुआ, लेकिन यकृत की वसा अपरिवर्तित रही। अधिक वसा वाले आहार के एक अध्ययन में संकेतन में बदलाव के साथ यकृत की वसा कम हुई। स्वस्थ पशुओं के एक अध्ययन में यकृत और गुर्दे में लिपिड पेरॉक्सिडेशन के विपरीत परिणाम मिले। इन्हें साथ पढ़ने पर स्पष्ट होता है कि तीन परिणामों को अलग रखना क्यों जरूरी है: रेडॉक्स बदलाव, संकेतन का सक्रिय होना और ऊतक में वसा का संचय।

तीन परिणाम जिन्हें आसानी से एक समझ लिया जाता है

रेडॉक्स माप इलेक्ट्रॉनों के आदान-प्रदान को दर्शाता है। यकृत में NAD+ और NADH का अनुपात बताता है कि कोशिका का वातावरण अपेक्षाकृत ऑक्सीकृत है या अपचयित। एथेनॉल के ऑक्सीकरण से NAD+ का NADH में रूपांतरण होता है, इसलिए लंबे समय तक शराब पीने से यह अनुपात घटता है। इलेक्ट्रॉन स्वीकार करने वाला कोई रंजक इसे फिर बढ़ा सकता है। यह एक रासायनिक प्रक्रिया है, जमा वसा के कम होने का प्रमाण नहीं।

संकेतन का माप नियमन को दर्शाता है। SIRT1 एक NAD+ पर निर्भर नियामक एंजाइम है, जो माइटोकॉन्ड्रिया के कार्य और लिपिड के प्रबंधन से जुड़े प्रोटीनों में बदलाव करता है। AMPK ऊर्जा की कमी का संवेदक है। सक्रिय होने पर यह ऊर्जा स्रोतों के ऑक्सीकरण को बढ़ावा देता है और लिपिड संश्लेषण को सीमित करता है। जब कोई शोधपत्र मेथिलीन ब्लू से यकृत में SIRT1 के सक्रिय होने की रिपोर्ट देता है, तो वह नियमन में बदलाव की रिपोर्ट देता है। इससे अभी किसी रोगी के परिणाम की जानकारी नहीं मिलती।

ऊतक परीक्षण या जैवरासायनिक माप स्वयं यकृत की स्थिति को दर्शाता है। सामान्य उदाहरणों में प्रति ग्राम ऊतक में ट्राइग्लिसराइड की मात्रा, उदासीन वसा का Oil Red O अभिरंजन, हेमाटॉक्सिलिन और ईओसिन से कोशिकाओं के फूलने और क्षति का आकलन, तथा प्लाज्मा ALT गतिविधि शामिल हैं। केवल यह तीसरी श्रेणी बताती है कि उस प्रयोग में मेथिलीन ब्लू से यकृत के वसा संचय में सुधार हुआ या नहीं।

इन श्रेणियों को अलग रखने से सबसे आम गलत व्याख्या से बचा जा सकता है: अनुकूल रेडॉक्स या संकेतन परिणाम का अर्थ यकृत में वसा कम होना नहीं है।

एथेनॉल मॉडल: रेडॉक्स ठीक हुआ, वसा अपरिवर्तित रही

सबसे स्पष्ट नकारात्मक निष्कर्ष नर Wistar रैटों में लंबे समय तक एथेनॉल दिए जाने के अध्ययन से मिलता है। पशुओं को तरल आहार में एथेनॉल दिया गया, जिसकी मात्रा बढ़ाकर कुल ऊर्जा का 36 प्रतिशत की गई। समान मात्रा में आहार पाने वाले नियंत्रण पशुओं को एथेनॉल से मिलने वाली ऊर्जा के स्थान पर ग्लूकोज दिया गया। एथेनॉल पाने वाले एक समूह और एक नियंत्रण समूह को दिन 5 से दिन 30 तक आहार में मेथिलीन ब्लू भी दिया गया। इसकी मात्रा प्रति लीटर आहार में 130 mg थी, जो प्रतिदिन लगभग 42 mg प्रति kg के बराबर थी।

रेडॉक्स स्थिति का अनुमान मानक चयापचयज युग्मों से लगाया गया: साइटोसोल के लिए लैक्टेट और पाइरुवेट का अनुपात, तथा माइटोकॉन्ड्रिया के लिए 3-हाइड्रॉक्सीब्यूटिरेट और एसीटोएसीटेट का अनुपात। अधिक मात्रा में एथेनॉल दिए जाने के शुरुआती चरण में एथेनॉल समूहों में बड़े बदलाव दिखे। साइटोसोल में NAD+ और NADH का अनुपात लगभग 62 प्रतिशत और माइटोकॉन्ड्रिया में लगभग 71 प्रतिशत घटा, जबकि ग्लिसरॉल 3-फॉस्फेट बढ़ा। मेथिलीन ब्लू ने इन बदलावों को काफी हद तक उलट दिया और ग्लिसरॉल 3-फॉस्फेट को नियंत्रण समूह के स्तर के करीब वापस लाया। इससे एथेनॉल सेवन, शरीर के वजन में वृद्धि या सीरम एथेनॉल में कोई बदलाव नहीं हुआ।

यकृत की वसा के परिणाम अलग थे। दिन 12 पर, जब तक वसा का बड़ा संचय नहीं हुआ था, समूहों के बीच ट्राइग्लिसराइड में अंतर नहीं था। दिन 27 पर, मेथिलीन ब्लू दिया गया हो या नहीं, एथेनॉल समूहों में ट्राइग्लिसराइड बहुत बढ़ा। दिन 30 पर एथेनॉल पाने वाले पशुओं में कुल लिपिड लगभग 89 प्रतिशत और ट्राइग्लिसराइड लगभग 196 प्रतिशत बढ़ा। रंजक ने इस वृद्धि पर भी कोई प्रभाव नहीं डाला। यकृत की लोब्यूल के केंद्रीय क्षेत्र में वसा का जमाव उपचार के साथ और उसके बिना एक जैसा दिखा। लेखकों ने निष्कर्ष निकाला कि इस मॉडल में लंबे समय तक एथेनॉल दिए जाने के बाद होने वाले फैटी लिवर का प्राथमिक कारण एथेनॉल से उत्पन्न रेडॉक्स बदलाव नहीं है। पशु और कोशिका अध्ययनों के निष्कर्ष मानव जोखिम पर किस तरह लागू होते हैं, इसे अलग से समझना यहाँ उपयोगी है: कोई तंत्र वास्तविक हो सकता है, फिर भी परिणाम को नियंत्रित न करता हो।

जब कोई दावा करे कि रेडॉक्स ठीक होने से यकृत की वसा जरूर हट जाएगी, तो इस अध्ययन का उल्लेख करना चाहिए। इस प्रयोग में ऐसा नहीं हुआ।

चयापचयी मॉडल: माउस में संकेतन के साथ वसा भी कम हुई

SIRT1 और AMPK पर केंद्रित यकृत कोशिकाओं और अधिक वसा वाले आहार पर रखे गए माउस के अध्ययन से अलग तस्वीर सामने आती है। HepG2 कोशिकाओं, AML-12 कोशिकाओं और रैट से प्राप्त प्राथमिक यकृत कोशिकाओं में मेथिलीन ब्लू ने NAD+ और NADH का अनुपात बढ़ाया, SIRT1 प्रोटीन बढ़ाया, नियामक PGC-1alpha का एसीटिलीकरण घटाया, माइटोकॉन्ड्रियल DNA की मात्रा और ऑक्सीजन की खपत बढ़ाई, तथा AMPK को सक्रिय किया। इसके बाद CPT-1 और PPARalpha में भी वृद्धि हुई। जब SIRT1 की अभिव्यक्ति घटाई गई, तो AMPK का सक्रिय होना समाप्त हो गया। इससे उस कोशिका तंत्र में इस घटनाक्रम का SIRT1 से संबंध स्थापित होता है। रंजक ने LXR एगोनिस्ट T0901317 और पाल्मिटेट के संपर्क से उत्पन्न लिपिड निर्माण के संकेतों का भी विरोध किया, जिनमें SREBP-1c, FAS और ACC का प्रेरण शामिल था।

पशु प्रयोग में नर C57BL/6 माउस को 8 सप्ताह तक 60 प्रतिशत वसा वाला आहार दिया गया। अंतिम 4 सप्ताह में सप्ताह में चार बार मुख से मेथिलीन ब्लू दिया गया, जिसकी मात्रा प्रतिदिन 3 या 10 mg प्रति kg थी। अधिक वसा वाला आहार पाने वाले अनुपचारित माउस की तुलना में उपचार पाने वाले माउस में Oil Red O अभिरंजन कम था, यकृत का ट्राइग्लिसराइड कम था, ऊतक परीक्षण में कोशिकाओं का फूलना और वसायुक्त अपक्षय कम था, तथा प्लाज्मा ALT कम था। उसी शोधपत्र के औषधगतिकी संबंधी परीक्षणों में मुख से देने पर जैवउपलब्धता लगभग 31 से 35 प्रतिशत मिली। आँत से अवशोषण लगभग पूर्ण था, लेकिन काफी चयापचय भी हुआ। ऊतक और प्लाज्मा की सांद्रता का सबसे अधिक अनुपात यकृत में मिला, जिससे शरीर में वितरण के आधार पर यकृत पर प्रभाव होना कम से कम संभावित लगता है।

यह वसा संचय में कमी का वास्तविक संकेत है, लेकिन इसकी सीमाएँ संकीर्ण हैं। यह माउस पर किया गया एक छोटा प्रयोग है, जिसमें प्रत्येक समूह में 9 से 10 पशु, एक आहार, दो खुराकें और चार सप्ताह का उपचार शामिल था। यह चयापचयी वसा संचय और वसा संचय के साथ यकृत की सूजन की विशेषताओं की जाँच करता है, शराब से संबंधित रोग की नहीं। इसमें सिरोसिस, फाइब्रोसिस को उलटने या मनुष्यों में किसी परिणाम की जाँच नहीं की गई। ऐसे परिणामों की व्याख्या में माइटोकॉन्ड्रिया और रेडॉक्स के माप किसी परिकल्पना के समर्थन के रूप में काम करते हैं, खुराक या उपचार प्रक्रिया के रूप में नहीं।

स्वस्थ ऊतकों की स्थिति: समान खुराक, अंगों में विपरीत परिणाम

तीसरे अध्ययन को अक्सर यकृत से जुड़े ऐसे दावों में शामिल किया जाता है, जिनके लिए वह उपयुक्त नहीं है। स्वस्थ मादा Wistar रैटों में 30 दिन के प्रयोग में पाँच पशुओं को पीने के पानी में 1 mM मेथिलीन ब्लू दिया गया और पाँच पशु नियंत्रण समूह में थे। यकृत या गुर्दे में सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज, कैटालेज और अपचयित ग्लूटाथायोन में कोई बदलाव नहीं हुआ। लिपिड पेरॉक्सिडेशन यकृत में थोड़ा बढ़ा और गुर्दे में घटा। सीरम ALT और क्रिएटिनिन घटे, जबकि रक्त यूरिया नाइट्रोजन में कोई बदलाव नहीं हुआ।

इसकी सटीक व्याख्या स्वस्थ पशुओं में अंग के अनुसार अलग प्रभाव है, रोग का उपचार नहीं। एक ही संपर्क से, एक माप के आधार पर, यकृत में ऑक्सीकरण को थोड़ा बढ़ावा मिला और गुर्दे में उसी माप के आधार पर थोड़ा सुरक्षात्मक प्रभाव दिखा। इस दौरान मानक एंटीऑक्सीडेंट रक्षा तंत्र अपरिवर्तित रहे। प्रत्येक समूह में पाँच पशु और कोई रोग मॉडल न होने के कारण यह शोधपत्र मेथिलीन ब्लू को यकृत का सामान्य एंटीऑक्सीडेंट कहने से सावधान करता है। यह यह भी दिखाता है कि सुधार का अर्थ निकालने से पहले यकृत एंजाइमों में बदलाव के लिए रोग का स्पष्ट संदर्भ जरूरी है।

यकृत के तीन प्रयोगों की तुलना

तालिका मुख्य बात स्पष्ट करती है। नीला रंजक समान है, लेकिन जीववैज्ञानिक स्थितियाँ अलग हैं। एथेनॉल अध्ययन रेडॉक्स में सफलता को वसा कम करने में विफलता से अलग करता है। आहार अध्ययन एक मॉडल में संकेतन और वसा में सुधार को साथ दिखाता है। स्वस्थ पशुओं का अध्ययन दिखाता है कि अंग के अनुसार रेडॉक्स संकेतक विपरीत दिशाओं में बदल सकते हैं।

इनसे उपचार का दावा क्यों नहीं किया जा सकता

इनमें से किसी अध्ययन में फैटी लिवर वाले मनुष्यों को शामिल नहीं किया गया। शोधपत्रों में खुराकें, देने के तरीके और अवधियाँ अलग हैं। केवल अनुपात के आधार पर इन्हें मनुष्यों के लिए उपचार योजना में नहीं बदला जा सकता। समूहों का छोटा आकार पर्याप्त अनिश्चितता छोड़ता है, विशेष रूप से एथेनॉल अध्ययन में रेडॉक्स माप के प्रत्येक समय बिंदु पर तीन पशु और स्वस्थ पशुओं के अध्ययन में प्रत्येक समूह में पाँच पशु। लिंग, नस्ल, आहार की संरचना और क्षति के सापेक्ष उपचार का समय, सभी अलग हैं। दोनों रोग मॉडल अलग-अलग शुरुआती कारणों को दर्शाते हैं, इसलिए आहार मॉडल का सकारात्मक परिणाम एथेनॉल मॉडल के नकारात्मक परिणाम को नहीं बदल सकता, और इसका उलटा भी सही है।

जिन लोगों में यकृत रोग का निदान हो चुका है, उनके लिए इन निष्कर्षों को उपचार की अपेक्षा सावधानी के संदर्भ में पढ़ना अधिक जरूरी है। मेथिलीन ब्लू के लिए गुर्दे और यकृत संबंधी सावधानियों का विवरण बताता है कि अंग की कार्यक्षमता में कमी सुरक्षा से जुड़े प्रश्नों को क्यों बदल देती है, भले ही कोई पशु अध्ययन अनुकूल दिखे। चिकित्सक को निदान, हाल की प्रयोगशाला रिपोर्टें, इस्तेमाल किए जाने वाले सटीक उत्पाद और उसे लेने के तरीके, तथा सभी दवाओं की सूची दें। उनसे पूछें कि अंग की कार्यक्षमता में इतनी कमी वाले व्यक्ति में उस उद्देश्य के लिए उस उत्पाद के उपयोग का समर्थन कौन-से साक्ष्य करते हैं।

निष्कर्ष: मेथिलीन ब्लू ने एक एथेनॉल मॉडल में जमा वसा कम किए बिना यकृत की रेडॉक्स स्थिति बदली, एक माउस चयापचयी मॉडल में वसा कम होने के साथ SIRT1 और AMPK को सक्रिय किया, तथा स्वस्थ रैटों में अंग के अनुसार अलग रेडॉक्स प्रभाव दिखाए। ये आगे शोध करने के संकेत हैं, फैटी लिवर का स्थापित उपचार नहीं।